Name: preparing individual drosophila egg chambers for live imaging
Uploaded: 2012-02-27T13:00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי אחוות Wellcome Trust מחקר בכיר א דייויס.

<ol>
	<li>Arias, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+and+the+development+of+biology+in+the+20th+century.">Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century.</a> Methods Mol. Biol. 420, 1-25 (2008).</li><li>Parton, R. M., Valles, A. -. M., Dobbie, I. D., Davis, I., Goldman, R. D., Swedlow, J. R., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Limits+of+Live+Cell+Imaging+in+Drosophila.">Pushing the Limits of Live Cell Imaging in Drosophila.</a> Live Cell Imaging: A Laboratory. , 387-418 (2010).</li><li>Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+messages:+the+intracellular+localization+of+mRNAs.">Moving messages: the intracellular localization of mRNAs.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6 (5), 363-375 (2005).</li><li>Jansen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA+Localization:+Message+on+the+Move.">mRNA Localization: Message on the Move.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 247-256 (2001).</li><li>Van De Bor, V., Hartswood, E., Jones, C., Finnegan, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gurken+and+the+I+factor+retrotransposon+RNAs+share+common+localization+signals+and+machinery.">gurken and the I factor retrotransposon RNAs share common localization signals and machinery.</a> Dev. Cell. 9 (1), 51-62 (2005).</li><li>Delanoue, R., Herpers, B., Soetaert, J., Davis, I., Rabouille, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Squid&#47;hnRNP+helps+Dynein+switch+from+a+gurken+mRNA+transport+motor+to+an+ultrastructural+static+anchor+in+sponge+bodies.">Drosophila Squid&#47;hnRNP helps Dynein switch from a gurken mRNA transport motor to an ultrastructural static anchor in sponge bodies.</a> Dev. Cell. 13 (4), 523-538 (2007).</li><li>Jaramillo, A. M., Weil, T. T., Goodhouse, J., Gavis, E. R., Schupbach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+fluorescently+labeled+endogenous+gurken+mRNA+in+Drosophila.">The dynamics of fluorescently labeled endogenous gurken mRNA in Drosophila.</a> J. Cell. Sci. 121 (Pt. 6), 887-894 (2008).</li><li>Forrest, K. M., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+endogenous+mRNA+reveals+a+diffusion+and+entrapment+mechanism+for+nanos+mRNA+localization+in+Drosophila.">Live imaging of endogenous mRNA reveals a diffusion and entrapment mechanism for nanos mRNA localization in Drosophila.</a> Curr. Biol. 13, 1159-1168 (2003).</li><li>Bertrand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+ASH1+mRNA+particles+in+living+yeast.">Localization of ASH1 mRNA particles in living yeast.</a> Mol. Cell. 2 (4), 437-445 (1998).</li><li>Spradling, A. C., Bate, M., Martinez-Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+genetics+of+oogenesis.">Developmental genetics of oogenesis.</a> The Development of Drosophila melanogaster. 1, 1-70 (1993).</li><li>MacDougall, N., Clark, A., MacDougall, E., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+gurken+(TGFalpha)+mRNA+localizes+as+particles+that+move+within+the+oocyte+in+two+dynein-dependent+steps.">Drosophila gurken (TGFalpha) mRNA localizes as particles that move within the oocyte in two dynein-dependent steps.</a> Dev. Cell. 4 (3), 307-319 (2003).</li><li>Tekotte, H., Tollervey, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+migrating+border+cell+cluster+in+living+Drosophila+egg+chambers.">Imaging the migrating border cell cluster in living Drosophila egg chambers.</a> Dev. Dyn. 236 (10), 2818-2824 (2007).</li><li>Weil, T. T., Parton, R., Davis, I., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+bicoid+mRNA+anchoring+highlight+conserved+mechanisms+during+the+oocyte-to-embryo+transition.">Changes in bicoid mRNA anchoring highlight conserved mechanisms during the oocyte-to-embryo transition.</a> Curr. Biol. 18, 1055-1061 (2008).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Morris, L. X., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+live+imaging+provides+new+insight+into+stem+cell+regulation+and+germline-soma+coordination+in+the+Drosophila+ovary.">Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary.</a> Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

<html> הדמיה תא חי הוא assay עוצמה לבחינת תהליכים תאיים בזמן אמת. בנוסף תצפית פשוטה בתחום בהיר, הוספת תוויות ניאון כדי חלבונים RNAs של עניין יש להוביל לפריצות דרך רבות. כאן אנו התוויתי פרוטוקול ביציות הדמיה חיים בודדים שניתן לנצלם בשילוב עם מבחני גנטיים ביוכימיים. בפרוטוקול זה, אנחנו גם מסבירים כיצד לתפעל באופן ניסיוני ביציות החיים בזריקה. קיימות אפשרויות רבות עבור חומר להזריק, כולל חוץ גופית ב-RNA מסונתז שכותרתו ניאון assay את היכולת של המבנה משני לוקליזציה RNA ישירה (כדור ו דייוויס, לא פורסם) וכן נוגדנים המעכבים את הפונקציה של חלבונים 6. העבודה העתידית צפויה לראות את המבוא של רכיבים אחרים תיוג ומכונות הסלולר ביציות חיים המאפשרים המנגנונים המולקולריים להיבדק. t &quot;&gt; שמירה על יכולת הקיום והבריאות של רקמה חיונית בעבודה עם תאים חיים. בפרוטוקול זה, אנו מציינים מספר צעדים שיכולים להוביל ללחץ של תא הביצה. לדוגמה, על אף היותו שמן מעולה עבור הדמיה, תרבות המורחבת בשמן יכול להוביל ללחץ על תא הביצה. זה ניתן לפקח בקלות על ידי בחינת המורפולוגיה עמדה גרעינית, קרום הביצית אשר לעוות ו בועה תחת לחץ (איור להשוות 7E (מוטעמות) כדי Figure7F תחת חשיפה לשדות בהיר ( הדגיש)). שלב 9 בתאי ביצה להראות לוקליזציה RNA של התא הגבול ההגירה מעל 12 שעות מרובות. עם זאת, בשלב 7/8 תא הביצה תתחיל להציג תופעות לוואי בשמן פחמן הילה לאחר כ 40 דקות של השחלה סולקו מן נשים. מאוחרת ביצה הבמה חדרי, בשלב 11-14, יכול להתפתח בדרך כלל בשמן או בתקשורת מימית בגלל הפרשת מעטפת הביצית מתאי זקיק בכל השלבים האלה 13. זה כבר reported כי תוספת של אינסולין עד בינוני חרק מימית יכול לשמור 9 ביציות הבמה עד 6 שעות 14 ו germaria עד 14 שעות 15. בכל המקרים, תמרון אגרסיבי של תא הביצה יש להימנע, כפי שהוא מדגיש את ביציות ומפחית את יכולת הקיום שלה. הדמיה פחות בתאי ביצה ולדאוג לטיפול בכל בעדינות היא הדרך הטובה ביותר להבטיח את יכולת הקיום האופטימלי.

כלים המשמשים לנתיחה צריך להיות נקי אבל לא צריך להיות autoclaved. נגב כלים עם ETOH ולאפשר להם להתייבש לפני ההתחלה. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> בסדר צבע היטה מברשת (אמנים סייבל, עגול, בגודל 00 או 0) </td><td> זמין מ רוב חנויות ציוד אמנות </td><td></td><td> מברשת איכותית היא חשובה </td></tr><tr><td> Halocarbon מוצרי החברה, סדרה 95 </td><td> Halocarbon מוצרים Corporation, 887 Kinderkamack כביש, נהר Edge NJ 07661 </td><td></td><td> אירופה המפיץ: Solvadis (GmbH) הקפד על ידי חמצן מבעבע אוויר דרך השמן. </td></tr><tr><td> מכסים, לא להחליק. 1.5, 22 x 50 מ&quot;מ </td><td> הבינלאומי-No1-VWR cat = 631-0137-22-50mm </td><td> מנצל-גלזר-22-40mm MNJ-400-070T </td><td></td></tr><tr><td> דומון מס &#39;5 - Dumostar </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11253-20 </td><td> &quot;Biologie&quot; עצה טובה גם אבל שברירי יותר </td></tr><tr><td> לנתח בדיקה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 10140-01 </td><td></td></tr><tr><td> לנתח מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> SZ61 </td><td></td></tr><tr><td> CO2 כרית </td><td> זמין דרך <a href="http://www.flystuff.com">http://www.flystuff.com</a> / (חלוקת Genesee מדעי) </td><td> 59-114 (789,060 Dutscher) </td><td> אירופה המפיץ: www. dutscherscientific. com</a> / זה גם קל יחסית מותאם אישית לבנות רפידות משלך זבוב </td></tr><tr><td> KimCare </td><td> Kimbery קלארק, KimCare רפואיות מגבונים </td><td> KLEW3020 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ-DeltaVision </td><td> יישומי Precision </td><td> DC-CORE </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> Burleigh Micromanipulators מ Lumen הדינמיקה הקבוצתית Inc. 2260 Argentia כביש, Mississauga, אונטריו, קנדה L5N 6H7 </td><td> Burleigh PCS-5000 הסדרה, TS-5000-300 </td><td> <a href="http://www.ldgi-burleigh.com">http://www.ldgi-burleigh.com</a> / (לשעבר Exfo) </td></tr><tr><td> זריקת המכשיר </td><td> Tritech Research, Inc 2961 ותיק Ave לוס אנג&#39;לס, קליפורניה 90064 </td><td> MINJ-1 </td><td> שונה עם בעל לקחת Eppendorf Femptotips </td></tr><tr><td> הזרקת מחט </td><td> Eppendorf סטרילי Femtotips I ו-II </td><td> 930000043 </td><td> טיפים שונים טובים יותר עבור יישומים שונים </td></tr><tr><td> טוען טיפים 20μl </td><td> Eppendorf </td><td> 5242956.003 </td><td></td></tr><tr><td> שמרים יבשים פעילים </td><td> פליישמן של שמרים </td><td> # 2192 </td><td></td></tr></tbody></table>

preparing individual drosophila egg chambers for live imaging

הדמיה תא חי הוא טכניקה חשוב ליישם מספר של רקמות תסיסנית המשמשים מודלים לחקור נושאים כגון מפרט ציר, התמיינות תאים ו organogenesis 1. הכנה נכונה של דגימות הניסוי הוא מכריע, לעיתים קרובות מוזנחים, צעד. מטרת ההכנה היא להבטיח התאמה פיזיולוגית ולקבוע תנאים אופטימליים הדמיה. כדי לשמור על הכדאיות רקמות, חיוני כדי למנוע התייבשות, הידרדרות היפוקסיה, התחממות יתר או בינוני 2. תא הביצה תסיסנית היא מערכת מבוססת היטב לבחינת שאלות הנוגעות, אך לא רק, על דפוסים הגוף, לוקליזציה mRNA וארגון cytoskeletal 3,4. עבור בתאי ביצה המוקדמות ו באמצע הבמה, גובר בשמן halocarbon טוב להישרדות כי היא מאפשרת דיפוזיה ללא חמצן, מונע התייבשות היפוקסיה ויש לו תכונות אופטיות מעולה במיקרוסקופ. Imההזדקנות של חלבונים ניאון ניתן באמצעות הכנסת transgenes לתוך תא ביצית או הזרקת הפיזי של רנ&quot;א, חלבונים שכותרתו או נוגדנים 5-7. לדוגמה, תוספת של MS2 בונה על הגנום של בעלי חיים המאפשרת תצפית בזמן אמת של mRNAs ב הביצית 8. מבנים אלו מאפשרים על תווית vivo של ה-mRNA באמצעות ניצול האינטראקציה bacteriophage MS2 RNA גזע לולאה עם חלבון המעיל שלה 9. כאן, אנו מציגים פרוטוקול להוצאת השחלות, כמו גם בידוד ovarioles בודדים ותאי ביצה מ תסיסנית הנשי. לתיאור מפורט של תסיסנית oogenesis הכס אלן ג Spradling (1993, נדפס 2009) 10.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

<em&gt; תסיסנית</em&gt; ביצה קאמרית הוא מודל מצוין לחקר המנגנונים של לוקליזציה mRNA. על מנת ללכוד את האירועים דינמיים ביסודה של תהליכי לוקליזציה, ברזולוציה גבוהה הדמיה מהירה של רקמה חיה נדרש. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לנתיחה והדמיה של דגימות חי עם הפרעה מזערית.

הכנת הפרט תסיסנית ביצה צ&#39;יימברס הדמיה חיים

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

הכנת תסיסנית עוברים Live-הדמיה באמצעות פרוטוקול Drop Hanging

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

חיים הדמיה של המוח על ידי עוברי דג הזברה מיקרוסקופיה confocal

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

מסיק והכנת תסיסנית עוברים הקלטה אלקטרו ונהלים אחרים

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

הדמיה חיה של תנועתיות התא ואת cytoskeleton אקטין של נוירונים בודדים לבין תאים קרסט עצבית בעוברים דג הזברה

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

הכנת פיתוח למבוגרים תסיסנית מוח רשתיות עבור הדמיה חיה

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

חי הדמיה של חלבוני ה-GFP שהכותרת ב-<em&gt; דרוזופילה</em&gt; ביציות

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

חי הדמיה של חיסול תאים אפופטוטיים במהלך<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עובר

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...