Name: preparing individual drosophila egg chambers for live imaging
Uploaded: 2012-02-27T13:00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

Эта работа была поддержана Wellcome Trust старший стипендий исследований И. Дэвис.

<ol>
	<li>Arias, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+and+the+development+of+biology+in+the+20th+century.">Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century.</a> Methods Mol. Biol. 420, 1-25 (2008).</li><li>Parton, R. M., Valles, A. -. M., Dobbie, I. D., Davis, I., Goldman, R. D., Swedlow, J. R., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Limits+of+Live+Cell+Imaging+in+Drosophila.">Pushing the Limits of Live Cell Imaging in Drosophila.</a> Live Cell Imaging: A Laboratory. , 387-418 (2010).</li><li>Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+messages:+the+intracellular+localization+of+mRNAs.">Moving messages: the intracellular localization of mRNAs.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6 (5), 363-375 (2005).</li><li>Jansen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA+Localization:+Message+on+the+Move.">mRNA Localization: Message on the Move.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 247-256 (2001).</li><li>Van De Bor, V., Hartswood, E., Jones, C., Finnegan, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gurken+and+the+I+factor+retrotransposon+RNAs+share+common+localization+signals+and+machinery.">gurken and the I factor retrotransposon RNAs share common localization signals and machinery.</a> Dev. Cell. 9 (1), 51-62 (2005).</li><li>Delanoue, R., Herpers, B., Soetaert, J., Davis, I., Rabouille, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Squid&#47;hnRNP+helps+Dynein+switch+from+a+gurken+mRNA+transport+motor+to+an+ultrastructural+static+anchor+in+sponge+bodies.">Drosophila Squid&#47;hnRNP helps Dynein switch from a gurken mRNA transport motor to an ultrastructural static anchor in sponge bodies.</a> Dev. Cell. 13 (4), 523-538 (2007).</li><li>Jaramillo, A. M., Weil, T. T., Goodhouse, J., Gavis, E. R., Schupbach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+fluorescently+labeled+endogenous+gurken+mRNA+in+Drosophila.">The dynamics of fluorescently labeled endogenous gurken mRNA in Drosophila.</a> J. Cell. Sci. 121 (Pt. 6), 887-894 (2008).</li><li>Forrest, K. M., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+endogenous+mRNA+reveals+a+diffusion+and+entrapment+mechanism+for+nanos+mRNA+localization+in+Drosophila.">Live imaging of endogenous mRNA reveals a diffusion and entrapment mechanism for nanos mRNA localization in Drosophila.</a> Curr. Biol. 13, 1159-1168 (2003).</li><li>Bertrand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+ASH1+mRNA+particles+in+living+yeast.">Localization of ASH1 mRNA particles in living yeast.</a> Mol. Cell. 2 (4), 437-445 (1998).</li><li>Spradling, A. C., Bate, M., Martinez-Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+genetics+of+oogenesis.">Developmental genetics of oogenesis.</a> The Development of Drosophila melanogaster. 1, 1-70 (1993).</li><li>MacDougall, N., Clark, A., MacDougall, E., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+gurken+(TGFalpha)+mRNA+localizes+as+particles+that+move+within+the+oocyte+in+two+dynein-dependent+steps.">Drosophila gurken (TGFalpha) mRNA localizes as particles that move within the oocyte in two dynein-dependent steps.</a> Dev. Cell. 4 (3), 307-319 (2003).</li><li>Tekotte, H., Tollervey, D., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+migrating+border+cell+cluster+in+living+Drosophila+egg+chambers.">Imaging the migrating border cell cluster in living Drosophila egg chambers.</a> Dev. Dyn. 236 (10), 2818-2824 (2007).</li><li>Weil, T. T., Parton, R., Davis, I., Gavis, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+bicoid+mRNA+anchoring+highlight+conserved+mechanisms+during+the+oocyte-to-embryo+transition.">Changes in bicoid mRNA anchoring highlight conserved mechanisms during the oocyte-to-embryo transition.</a> Curr. Biol. 18, 1055-1061 (2008).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Morris, L. X., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+live+imaging+provides+new+insight+into+stem+cell+regulation+and+germline-soma+coordination+in+the+Drosophila+ovary.">Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary.</a> Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).</li></ol>

Нам нечего раскрывать.

<html> Живых клеток представляет собой мощный анализ для изучения клеточных процессов в реальном времени. В дополнение к простому яркие наблюдения поля, кроме флуоресцентных меток с белками и РНК интереса привело к много открытий. Здесь мы наметили протокол для работы с изображениями отдельных яйцеклеток жизни, который может быть использован в сочетании с генетическими и биохимическими методами. В этом протоколе, мы объясним, как экспериментально манипулировать жизни ооцитов в виде инъекций. Есть много возможностей для материала для введения, в том числе в пробирке синтезировали люминесцентные меченой РНК для анализа возможности вторичной структуры прямого локализации РНК (мяч и Дэвис, не опубликовано) и антитела, которые подавляют функцию белков 6. Будущая работа, скорее всего, см. введение других компонентов, маркировки и клеточные механизмы для живых яйцеклеток позволит молекулярные механизмы должны быть протестированы. т &quot;&gt; Сохранение жизнеспособности и здоровья тканей необходимо при работе с живыми клетками. В этом протоколе мы отмечаем ряд шагов, которые могут привести к стрессу из яйцевой камеры. Например, несмотря на нефти является превосходной для работы с изображениями, расширенные культуры в нефти может привести к стрессу на яйцо камеру. Это можно легко контролировать при ярком воздействия поля изучения морфологии ядра и положение, что мембраны ооцитов будет искажать и пузырь в условиях стресса (ср. рис 7E (безударный), чтобы Figure7F ( подчеркнул,)). Этап 9 камер яйцо показать РНК локализации и границ миграции клеток 12 в течение нескольких часов. Тем не менее, этап 7/8 яйца камера начнет проявлять негативных последствий на нефть углерода гало примерно через 40 минут яичник был удален из женщины. Поздняя стадия яйца камеры, этап 11 до 14, может нормально развиваться в нефть или водной среде из-за выделения яичной скорлупы из фолликула клетки на этих этапах 13. Это было репоrted, что добавление инсулина для водной среды насекомое может поддерживать этап 9 ооцитов до 6 часов 14 germaria до 14 часов 15. Во всех случаях агрессивного маневрирования яйцевой камеры следует избегать, так как она подчеркивает ооцитов и снижает ее жизнеспособность. Изображения меньше яйцо камер и забота относиться друг мягко является лучшим способом для обеспечения оптимальной устойчивости.

Инструменты, используемые в вскрытия должны быть чистыми, но не должны быть в автоклаве. Протрите инструменты с этанолом и дать им высохнуть до начала. <table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Изобразительное наконечником кисть (Художники Соболь, круглые, размером 00 или 0) </td><td> Доступен из наиболее художественные принадлежности точек </td><td></td><td> Хорошая кисть большое значение имеет качество </td></tr><tr><td> Хладон Products Corporation, Series 95 </td><td> Хладон Products Corporation, 887 Kinderkamack автомобильного, речного пограничного NJ 07661 </td><td></td><td> Европейский дистрибьютор: Solvadis (GMBH) Будьте уверены, чтобы кислородом при пропускании воздуха через масло. </td></tr><tr><td> Крышка не промах. 1.5, 22 х 50 мм </td><td> Международно-№ 1-VWR Cat = 631-0137-22-50 </td><td> Menzel-Glaser-22-40-400-MNJ 070T </td><td></td></tr><tr><td> Дюмон № 5 - Dumostar </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 11253-20 </td><td> &quot;Biologie&quot; верхушка тоже хорошо, но более хрупким </td></tr><tr><td> Анатомический зонд </td><td> Изобразительных средств наук </td><td> 10140-01 </td><td></td></tr><tr><td> Препаровальная лупа </td><td> Олимп </td><td> SZ61 </td><td></td></tr><tr><td> CO2 площадки </td><td> Доступный через <a href="http://www.flystuff.com">http://www.flystuff.com</a> / (Разделение Genesee Scientific) </td><td> 59-114 (789060 Dutscher) </td><td> Европейский дистрибьютор: WWW. dutscherscientific. COM</a> / Кроме того, сравнительно легко пользовательский построить свой собственный прокладки лету </td></tr><tr><td> KimCare </td><td> Kimbery Кларка KimCare-медицинской салфетки </td><td> KLEW3020 </td><td></td></tr><tr><td> Микроскоп-DeltaVision </td><td> Прикладная Precision </td><td> DC-CORE </td><td></td></tr><tr><td> Микроманипулятор </td><td> Берли Микроманипуляторы из группы Lumen Динамика вкл. 2260 Argentia Road, Mississauga, Онтарио, Канада L5N 6H7 </td><td> Берли PCS-5000, TS-5000-300 </td><td> <a href="http://www.ldgi-burleigh.com">http://www.ldgi-burleigh.com</a> / (ранее Exfo) </td></tr><tr><td> Инъекция аппарат </td><td> Tritech Research, Inc 2961 ветеранов пр. Los Angeles, CA 90064 </td><td> MINJ-1 </td><td> Изменения с держателем принять Эппендорф Femptotips </td></tr><tr><td> Инъекционная игла </td><td> Эппендорф стерильные Femtotips я и II </td><td> 930000043 </td><td> Различные советы лучше для различных приложений </td></tr><tr><td> Загрузка советы 20 мкл </td><td> Эппендорф </td><td> 5242956.003 </td><td></td></tr><tr><td> Сухие активные дрожжи </td><td> Fleischmann дрожжи </td><td> # 2192 </td><td></td></tr></tbody></table>

preparing individual drosophila egg chambers for live imaging

Живых клеток является важным техника применяется в ряде тканей дрозофилы используются в качестве моделей для исследования темы, такие как оси спецификации, клеточной дифференцировки и органогенеза 1. Правильная подготовка экспериментальных образцов является одним из важнейших, часто пренебрегают, шаг. Целью подготовки является обеспечение физиологическое значение и создание оптимальных условий съемки. Для поддержания жизнеспособности тканей, важно, чтобы избежать обезвоживания, гипоксия, перегревание или средней ухудшения 2. Камера дрозофилы яйца хорошо организованной системы для изучения вопросов, связанных, но не ограничиваясь, к телу рисунка, мРНК, локализации и организации цитоскелета 3,4. Для ранней и средней стадии яйца камер, монтаж в галоидоуглеводородов масло хорошо для выживания в том, что она позволяет свободной диффузии кислорода, предотвращает обезвоживание и гипоксии, обладает превосходными оптическими свойствами для микроскопии. Imстарение флуоресцентных белков можно за счет внедрения трансгенов в камеру яйцо или физического введения меченой РНК, белков или антител 5-7. Например, добавление MS2 конструкций в геном животных позволяет в режиме реального времени наблюдения мРНК в ооцит 8. Эти конструкции позволяют в естественных условиях маркировки мРНК за счет использования бактериофага MS2 РНК стволовых цикл взаимодействия с его белка оболочки 9. Здесь мы приводим протокол для извлечения из яичников, а также выделения отдельных овариол и яйца камер из женской дрозофилы. Подробное описание оогенеза Drosophila см. Аллан Спредлинг (1993, перепечатано 2009) 10.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging at JoVE.com

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

<em&gt; Drosophila</em&gt; Яйцевой камеры является прекрасной моделью для изучения механизмов мРНК локализации. Для того, чтобы захватить динамические события, которые лежат в основе процессов локализации, быстрого высоким разрешением живой ткани не требуется. Здесь мы приводим протокол вскрытия и обработки изображений живых образцов с минимальными потерями.

Подготовка индивидуальных Drosophila Яйцо палат для работы с изображениями Онлайн

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Живая изображений глиальных миграции клеток в диск дрозофилы глаз имагинальных

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Подготовка Drosophila Эмбрионы для Live-визуализации с использованием висячей капли протокола

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Живая съемка данио рерио Эмбриональные мозга с помощью конфокальной микроскопии

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

Сбор и подготовка Drosophila Эмбрионы для Электрофизиологические Запись и другие процедуры

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Мезоскопические флуоресцентная томография для В естественных условиях Изображений развивающихся Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Живая съемка Дрозофилы Эмбриональные миграции гемоцитов

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Живая съемка подвижность клеток и актинового цитоскелета отдельных нейронов и нервных клеток Крест в данио рерио Эмбрионы

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Подготовка Разработка и взрослых Drosophila Мозги и сетчатки для живых изображений

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Жить Визуализация GFP-меченых белков в<em&gt; Drosophila</em&gt; Ооцитов

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Живая съемка апоптоза клеток во время акции<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбриогенеза

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...