Name: detection of toxin translocation into the host cytosol by surface plasmon resonance
Uploaded: 2012-01-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 AI073783 إلى تيتر ك. نشكر الدكتور شين ماسي للمساعدة في تطوير بروتوكول تجزيء التحت خلوية وهيلين [بورس] لقراءة نقدية للمخطوطة.

1. إعداد ديجيتونين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميليلتر من الإيثانول بنسبة 100 ٪ لأنبوب microcentrifuge ووضعه في كتلة وضعت في حرارة 80 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 2.5 ملغ من ديجيتونين في 250 ميليلتر من الإيثانول ساخنة لإنتاج ?...

بالمقارنة مع المنهجية القائمة مقايسة لدينا إزفاء SPR المستندة يمثل السريع ، وطريقة حساسة ، والكمي للكشف عن تقديم السم في العصارة الخلوية المضيف. هذه التقنية لا تتطلب radiolabeling أو تعديلات أخرى لالسم ، ويمكن تطبيقه على أي السم الذي مضا?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> ديجيتونين </td><td> سيغما </td><td> D141 </td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> Acros </td><td> 61509-0010 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11995065 </td></tr><tr><td> المصل البقري الجنين </td><td> اتلانتا البيولوجية </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> غانغليوزيد GM1 </td><td> سيغما </td><td> G7641 </td></tr><tr><td> CTA </td><td> سيغما </td><td> C2398 </td></tr><tr><td> PTS1 </td><td> قائمة </td><td> 182 </td></tr><tr><td> NHS (N - Hydroxysuccinimide) </td><td> ثقب </td><td> 24500 </td></tr><tr><td> EDC (1 - الأثيل - 3 - (3 - dimethylaminopropyl) carbodiimide) </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 22981 </td></tr><tr><td> إيثانولامين </td><td> سيGMA </td><td> E0135 </td></tr><tr><td> PBST </td><td> Medicago </td><td> 09-8903-100 </td></tr><tr><td> الأضداد المضادة للCTA </td><td> سانتا كروز في مجال التكنولوجيا الحيوية </td><td> SC - 80747 </td></tr><tr><td> الأضداد المضادة للCTB </td><td> Calbiochem </td><td> 227040 </td></tr><tr><td> الأضداد المضادة للPTS1 </td><td> سانتا كروز في مجال التكنولوجيا الحيوية </td><td> SC - 57639 </td></tr><tr><td> الإنكسار </td><td> رايشرت </td><td> SR7000 ، SR7000DC </td></tr><tr><td> SPR استشعار الشرائح </td><td> رايشرت </td><td> 13206060 </td></tr><tr><td> المحاقن مضخة </td><td> كول بالمر </td><td> 780200C </td></tr></tbody></table>

detection of toxin translocation into the host cytosol by surface plasmon resonance

السموم AB تتألف من الأنزيمية والوحيدات والوحيدات الخلية B - 1 ملزم. تفرز هذه السموم في الوسط خارج الخلية ، لكنها تتصرف على أهداف داخل العصارة الخلوية حقيقية النواة. بعض السموم السفر AB بناقلات حويصلة من سطح الخلية إلى شبكية هيولي باطني (ER) قبل دخول العصارة الخلوية 2-4. في لائحة ، والحفاز سلسلة تنأى عن بقية السم ويتحرك من خلال قناة البروتين إجراء للوصول إلى هدفه عصاري خلوي 5. و، عصاري خلوي translocated سلسلة من الصعب الكشف عن الاتجار غير المشروع بسبب السم لائحة هو عملية غير فعالة للغاية : يتم توجيه معظم السم المنضوية في lysosomes للتدهور ، وذلك فقط جزءا صغيرا من سطح محدد السم تصل إلى جهاز جولجي ، والنتيجة المتوقعة 6 -12. لرصد إزفاء السم من لائحة لالعصارة الخلوية في الخلايا المستزرعة ، جنبا إلى جنب لدينا بروتوكول تجزيء التحت خلوية مع highlذ طريقة الكشف الحساسة من مأكل السطح بالرنين (SPR) 13-15. غير انتقائي permeabilized غشاء البلازما من خلايا السم المعاملة مع ديجيتونين ، مما يسمح بجمع جزء عصاري خلوي وهو perfused في وقت لاحق على جهاز استشعار SPR المغلفة مع توكسين A الأضداد المضادة للسلسلة. يمكن للاستشعار الأجسام المضادة المغلفة التقاط وكشف جزء من الغرام / مل كميات من السم عصاري خلوي. مع هذا البروتوكول ، فمن الممكن أن يتبع حركية دخول السم في العصارة الخلوية ولتوصيف الآثار المثبطة على الحدث إزفاء. ويمكن أيضا تركيز السم عصاري خلوي تحسب من المنحنى القياسي إنشاؤها مع كميات معروفة لسلسلة المعايير التي تم على مدى perfused الاستشعار. أسلوبنا يمثل السريع ، ونظام كشف حساسة ، والكمية التي لا تتطلب تعديلات أو radiolabeling أخرى لالسم الهدف.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance at JoVE.com

Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance

في هذا التقرير ، ونحن تصف كيفية استخدام سطح مأكل صدى للكشف عن دخول السم في العصارة الخلوية المضيف. هذا الأسلوب يمكن حساسة للغاية تقديم بيانات كمية عن مقدار السم عصاري خلوي ، ويمكن تطبيقه على مجموعة من السموم.

كشف إزفاء السمية في العصارة الخلوية المضيف بواسطة الرنين مأكل السطح

AB toxins consist of an enzymatic A subunit and a cell-binding B subunit1.  These toxins are secreted into the extracellular milieu, but they act upon ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

في الجسم الحي التصوير الطفيليات الليشمانية المعدلة وراثيا في مضيف لايف

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

الكشف عن الفيروسات المعدية التي جمعت من الحقل عن طريق البعوض فيرو خلية الفحص الثقافة

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

الكشف عن الرشاشيات الرئوي الغازية في الخباثة المرضى باستخدام مكونات دم الاطراف تدفق التكنولوجيا

Invasive pulmonary aspergillosis (IPA) is a leading cause of morbidity and mortality in haematological malignancy patients and hematopoietic stem cell ...

Analysis of Yersinia enterocolitica Effector Translocation into Host Cells Using Beta-lactamase Effector Fusions

Analysis of Yersinia enterocolitica Effector Translocation into Host Cells Using Beta-lactamase Effector Fusions

تحليل<em&gt; يرسينيا القولون</em&gt; المستجيب إزفاء في الخلايا المضيفة عن طريق بيتا لاكتاماز المستجيب الإنشطار

Many gram-negative bacteria including pathogenic Yersinia spp. employ type III secretion systems to translocate effector proteins into eukaryotic target ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

تطبيق نقل الإسفار الرنين الطاقة (الحنق) لدراسة المستجيب إزفاء الكفاءة من قبل<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; أثناء سيرنا إسكات

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

الكشف عن<em&gt; المثقبية البروسية</em&gt; التبديل البديل البروتين السكري السطح بواسطة المغناطيسي خلية المنشط فرز والتدفق الخلوي

Trypanosoma brucei, a protozoan parasite that causes both Human and Animal African Trypanosomiasis (known as sleeping sickness and nagana, respectively) ...

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

بروتوكولات للتحقيق في توزيع الأنسجة المضيف، نقل واسطة، وتأثير ذلك على الرشاقة المضيف من Densovirus في دودة اللوز القطن

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

الكشف عن استعمار الإشريكيّة القولونية Enterohemorrhagic موريني واستضافة بنظام الإضاءة الحيوية غير الغازية في فيفو

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

منصة الفائق لفحص السالمونيلا spp./دوسنتاريا spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy

التحليل الزمني إزفاء النووية إلى هيولى بروتين الفيروس 1 الحلأ البسيط بالفحص المجهري [كنفوكل] إيمونوفلوريسسينت

Infected cell protein 0 (ICP0) of herpes simplex virus 1 (HSV-1) is an immediate early protein containing a RING-type E3 ubiquitin ligase. It is ...