Name: detection of toxin translocation into the host cytosol by surface plasmon resonance
Uploaded: 2012-01-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance at JoVE.com

Эта работа финансировалась NIH грант R01 AI073783 К. Тетер. Мы благодарим доктора Шейна Massey за помощь в развитии субклеточного фракционирования протокол и Хелен Burress за критическое прочтение рукописи.

1. Подготовка дигитонин <ol><li> Добавить 500 мкл 100% этанола микроцентрифужных трубки и поместить его в тепло блок установлен на уровне 80 ° С в течение 10 мин. </li><li> Растворите 2,5 мг дигитонин в 250 мкл этанола подогревом для производства 1% исходного раствора дигитонин. </li><li> Для создания рабоче...

Сравнение с существующей методологии Наши SPR основе анализа транслокации представляет быстрый, чувствительный и количественный метод для обнаружения токсина доставку в принимающее цитозоле. Техника не требует радиоактивной метки или другие изменения токсин, и он може?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Дигитонин </td><td> Сигма </td><td> D141 </td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Acros </td><td> 61509-0010 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11995065 </td></tr><tr><td> Эмбриональной бычьей сыворотки </td><td> Атланты биологические препараты </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> Ганглиозидов GM1 </td><td> Сигма </td><td> G7641 </td></tr><tr><td> CTA </td><td> Сигма </td><td> C2398 </td></tr><tr><td> PTS1 </td><td> Список </td><td> 182 </td></tr><tr><td> Государственная служба здравоохранения (N-гидроксисукцинимида) </td><td> Прокалывать </td><td> 24500 </td></tr><tr><td> EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида) </td><td> Thermo Scientific </td><td> 22981 </td></tr><tr><td> Ethanolamine </td><td> СиGMA </td><td> E0135 </td></tr><tr><td> PBST </td><td> Medicago </td><td> 09-8903-100 </td></tr><tr><td> Анти-CTA антител </td><td> Санта-Крус-Biotech </td><td> SC-80747 </td></tr><tr><td> Анти-CTB антител </td><td> Calbiochem </td><td> 227040 </td></tr><tr><td> Анти-PTS1 антител </td><td> Санта-Крус-Biotech </td><td> SC-57639 </td></tr><tr><td> Рефрактометр </td><td> Reichert </td><td> SR7000, SR7000DC </td></tr><tr><td> SPR датчик слайдов </td><td> Reichert </td><td> 13206060 </td></tr><tr><td> Шприц насос </td><td> Коул Палмер </td><td> 780200C </td></tr></tbody></table>

detection of toxin translocation into the host cytosol by surface plasmon resonance

AB токсины состоят из ферментативной субъединицы и клетка-связывающий B субъединицы 1. Эти токсины секретируются во внеклеточную среду, но они действуют на цели в пределах эукариотической цитозоле. Некоторые туристические AB токсинов пузырьков носителей от поверхности клетки, чтобы эндоплазматический ретикулум (ER), перед входом в цитозоле 2-4. В ER, каталитический диссоциирует цепь от остальной токсина и движется через белок-проводящий канал, чтобы достичь своей целевой цитозольного 5. Перемещаться, цитозольного цепи трудно обнаружить, поскольку токсин торговли людьми ER является крайне неэффективный процесс: большинство внутренним токсин направляется лизосом для деградации, так что только небольшая часть поверхности связанного токсина достигает аппарат Гольджи и ОР 6 -12. Для контроля перемещения токсинов из ЭР в цитозоле в культуре клеток, мы объединили субклеточных протокол фракционирования с highlу чувствительный метод обнаружения поверхностного плазменного резонанса (SPR) 13-15. Плазматической мембраны токсин-обработанных клеток избирательно проницаемыми с дигитонин, позволяя коллекция цитозольного фракцию, которая впоследствии перфузии за датчик SPR покрыты анти-токсин цепи антитела. Покрытых антителами датчик может захватить и выявления пг / мл количество цитозольного токсина. С этим протоколом, то можно проследить кинетику токсин вступления в цитозоле и охарактеризовать тормозящее действие на транслокацию события. Концентрация цитозольного токсин может быть вычислена по стандартной кривой, полученной с известными количествами цепочке стандартов, которые были перфузии по датчику. Наш метод представляет собой быстрый, чувствительный и количественного определения системы, которая не требует радиоактивной метки или другие изменения целевой токсин.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance at JoVE.com

Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance

В этом докладе мы описываем, как поверхностного плазменного резонанса используется для обнаружения токсина вступления в хост цитозоле. Этот высокочувствительный метод может обеспечить количественные данные о количестве цитозольного токсин, и он может быть применен к различным токсинам.

Обнаружение токсинного транслокации в хост цитозоля от поверхностного плазменного резонанса

AB toxins consist of an enzymatic A subunit and a cell-binding B subunit1.  These toxins are secreted into the extracellular milieu, but they act upon ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

В естественных изображений трансгенных Паразиты Leishmania в реальный хост

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Выявление инфекционных Касперского с поля, собранные Комары от Vero Пробирной культуры клеток

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

Обнаружение инвазивный легочный аспергиллез в гематологических больных злокачественных новообразований с помощью бокового потока технологии

Invasive pulmonary aspergillosis (IPA) is a leading cause of morbidity and mortality in haematological malignancy patients and hematopoietic stem cell ...

Analysis of Yersinia enterocolitica Effector Translocation into Host Cells Using Beta-lactamase Effector Fusions

Analysis of Yersinia enterocolitica Effector Translocation into Host Cells Using Beta-lactamase Effector Fusions

Анализ<em&gt; Yersinia энтероколитные</em&gt; Эффектор Транслокация в клетки-хозяева с помощью Бета-лактамазы эффекторных Слияния

Many gram-negative bacteria including pathogenic Yersinia spp. employ type III secretion systems to translocate effector proteins into eukaryotic target ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Применение флуоресцентного резонанса переноса энергии (FRET) для изучения Эффектор транслокации эффективности путем<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Во время миРНК Глушащий

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

обнаружение<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Вариант поверхности гликопротеин Переключение с помощью магнитных Активированный сортировки клеток и проточной цитометрии

Trypanosoma brucei, a protozoan parasite that causes both Human and Animal African Trypanosomiasis (known as sleeping sickness and nagana, respectively) ...

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

Протоколы для исследования распределения Хоста-ткань, Transmission-режим, и эффекта на хост приспособленности Densovirus в хлопковой совке

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Обнаружение энтерогеморрагические Escherichia Coli колонизации в мышиных принимающей системой неинвазивные в Vivo биолюминесценции

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Высок объём платформы для проверки Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy

Временной анализ ядерных и цитоплазматических транслокации герпеса вирус 1 белок, Immunofluorescent конфокальная микроскопия

Infected cell protein 0 (ICP0) of herpes simplex virus 1 (HSV-1) is an immediate early protein containing a RING-type E3 ubiquitin ligase. It is ...