Name: dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays
Uploaded: 2012-03-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

De matrix van collageen test is ontwikkeld en verbeterd door het werk van vele verschillende onderzoeksgroepen de afgelopen twee tot drie decennia. De aanpak hier beschreven voor de dopaminerge en het striatum explantaten veel baat hebben bij deze studies. Daarnaast zou de auteurs willen Asheeta Prasad bedanken voor haar hulp bij het opzetten van striatale explant culturen. Werk in het lab werd gefinancierd door het Human Frontier Science Program Organization (Career Development Award), Nederland Organisatie van gezondheidsonderzoek en zorginnovatie (ZonMw-VIDI-en ZonMW-TOP), de Europanian Unie (mdDA-NeuroDev, FP7/2007-2011 , Grant 222999) (in RJP), en Nederland Organisatie voor Wetenschappelijk Onderzoek (Toptalent, tot ERES).

1. Voorbereiding van de Rat Tail Collageen <ol><li> Verzamelen 6-10 volwassen rat staart (het is mogelijk om de staart bewaren bij -20 ° C tot gebruik). </li><li> Laat de staarten in 95% ethanol gedurende de nacht bij kamertemperatuur (RT). </li></ol> Dissectie van de rat staarten (in weefselkweek kap): (Houd tools in 70% ethanol als u niet met hen en zorg ervoor dat alle oplossingen, tools en glaswerk tijdens de gehele procedure steriel zijn) <ol start="3"><li> Om pezen te...

<ol>
	<li>van den Heuvel, D. M., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+connected+in+the+dopamine+system.">Getting connected in the dopamine system.</a> Prog. Neurobiol. 85, 75-93 (2008).</li><li>Lobo, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+of+striatonigral+and+striatopallidal+medium+spiny+neurons+past,+present,+and+future.">Molecular profiling of striatonigral and striatopallidal medium spiny neurons past, present, and future.</a> Int. Rev. Neurobiol. 89, 1-35 (2009).</li><li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298, 1959-1964 (2002).</li><li>Chilton, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecules+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecules mechanisms of axon guidance.</a> Dev. Biol. 292, 13-24 (2006).</li><li>Lumsden, A. G., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+effect+of+specific+target+epithelium+in+the+developing+mammalian+nervous+system.">Chemotropic effect of specific target epithelium in the developing mammalian nervous system.</a> Nature. 323, 538-539 (1986).</li><li>Tessier-Lavigne, M., Placzek, M., Lumsden, A. G., Dodd, J., Jessel, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+guidance+of+developing+axons+in+the+mammalian+central+nervous+system.">Chemotropic guidance of developing axons in the mammalian central nervous system.</a> Nature. 336, 775-778 (1988).</li><li>Kolk, S. M., Gunput, R. A., Tran, T. S., van den Heuvel, D. M., Prasad, A. A., Hellemons, A. J., Adolfs, Y., Ginty, D. D., Kolodkin, A. L., Burbach, J. P., Smidt, M. P., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+3F+is+a+bifunctional+guidance+cue+for+dopaminergic+axons+and+controls+their+fasciculation,+channeling,+rostral+growth,+and+intracortical+targeting.">Semaphorin 3F is a bifunctional guidance cue for dopaminergic axons and controls their fasciculation, channeling, rostral growth, and intracortical targeting.</a> J. Neurosci. 29, 12542-12557 (2009).</li><li>Fenstermaker, A. G., Prasad, A. A., Bechara, A., Adolfs, Y., Tissir, F., Goffinet, A., Zou, Y., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/planar+cell+polarity+signaling+controls+the+anterior-posterior+organization+of+monoaminergic+axons+in+the+brainstem.">Wnt/planar cell polarity signaling controls the anterior-posterior organization of monoaminergic axons in the brainstem.</a> J. Neurosci. 30, 16053-16064 (2010).</li><li>Arlotta, P., Molyneaux, B. J., Jabaudon, D., Yoshida, Y., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip2+controls+the+differentiation+of+medium+spiny+neurons+and+the+establishment+of+the+cellular+architecture+of+the+striatum.">Ctip2 controls the differentiation of medium spiny neurons and the establishment of the cellular architecture of the striatum.</a> J. Neurosci. 28, 622-632 (2008).</li><li>De Wit, J., Toonen, R. F., Verhage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-dependent+local+retention+of+secretory+vesicle+cargo+in+cortical+neurons.">Matrix-dependent local retention of secretory vesicle cargo in cortical neurons.</a> J. Neurosci. 29, 23-37 (2009).</li><li>G&#228;hwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+cultures:+a+technique+has+come+of+age.">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20, 471-477 (1997).</li></ol>

De matrix van collageen-test hier beschreven is gebruikt en verbeterd door veel verschillende laboratoria in de afgelopen decennia aan een verscheidenheid van axon begeleiding moleculen en neuronale systemen te onderzoeken (zie bijvoorbeeld referenties 5-8). Deze studies hebben aangetoond dat deze test is een krachtig instrument voor het bestuderen van de effecten en de regulatie van axon begeleiding moleculen die afgescheiden wordt door verschillende (tussen) doel weefsels. Er moet echter w...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Foetaal Calf Serum </td><td> BioWhittaker </td><td> 14 801F </td><td></td></tr><tr><td> Glutamine (200 mm) </td><td> PAA </td><td> M11-004 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes </td><td> VWR International </td><td> 441476L </td><td></td></tr><tr><td> β-mercapto </td><td> Merck </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Minimum Essential Media (MEM) </td><td> Gibco </td><td> 61100-087 </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco </td><td> 21103-049 </td><td></td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> Leibovitz&#39;s L-15 Medium </td><td> Gibco </td><td&gt; 11415-049 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilline-streptomycine </td><td> Gibco </td><td> 15070-063 </td><td></td></tr><tr><td> Verleng Gold Antifade Reagens </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr><tr><td> Dialysebuis </td><td> Spectrum Labs </td><td> 132660 </td><td></td></tr><tr><td> Rabbit anti-tyrosine hydroxylase </td><td> Pel-Freez </td><td> P40101-0 </td><td></td></tr><tr><td> Konijn anti-Darpp32 (H-62) </td><td> Santa-Cruz </td><td> Sc-11365 </td><td></td></tr><tr><td> Muis anti-βIII tubuline </td><td> Sigma </td><td> T8660 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor gelabelde secundaire antilichamen </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays

Dopaminesysteem (mdDA) neuronen project via de mediale voorhersenen bundel naar verschillende gebieden in de grote hersenen, waaronder het striatum 1. Omgekeerd, medium stekelige neuronen in het striatum die aanleiding geven tot de striatonigrale (directe) route innerveren de substantia nigra 2. De ontwikkeling van deze axon stukken is afhankelijk van de combinatorische acties van een overvloed aan axon groei en begeleiding signalen met inbegrip van moleculen die zijn vrijgegeven door neurieten of door (tussen) doel de regio&#39;s 3,4. Deze oplosbare factoren kunnen worden bestudeerd in vitro door het kweken mdDA en / of striatum explantaten een collageenmatrix met een driedimensionale substraat voor het nabootsen axons de extracellulaire omgeving zorgt. Bovendien is de collageenmatrix maakt de vorming van relatief stabiele gradiënten van eiwitten vrijgegeven door andere explantaten of cellen die in de nabijheid (zie bijvoorbeeld referenties 5 en 6). Hier beschrijven werkwijzen voor het purultieme controle van rattenstaart collageen, microdissectie van dopaminerge en het striatum explantaten, hun cultuur in collageen gels en de daarop volgende immunohistochemische en kwantitatieve analyse. Ten eerste, de hersenen van E14.5 muizenembryo&#39;s zijn geïsoleerd en dopaminerge en het striatum explantaten zijn gemicrodissecteerde. Deze explantaten worden vervolgens (co) gekweekt in collageengels op dekglaasjes 48 tot 72 uur in vitro. Vervolgens axonale projecties zijn gevisualiseerd met behulp van neuronale markers (bijvoorbeeld tyrosine hydroxylase, DARPP32 of βIII tubuline) en axongroei en aantrekkelijke of afstotende axon antwoorden worden gekwantificeerd. Deze neuronale voorbereiding is een handig hulpmiddel voor in vitro studies van de cellulaire en moleculaire mechanismen van mesostriatal en striatonigrale axongroei en begeleiding tijdens de ontwikkeling. Met deze assay, is het ook mogelijk om andere (tussen) doelen voor dopaminerge en striatum axonen beoordelen of specifieke moleculaire signalen testen.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

Explantaten de dopaminesysteem en striatum worden gebruikt in een collageenmatrix test voor het<em&gt; In vitro</em&gt; Analyse van mesostriatal en striatonigrale traject ontwikkeling. In deze test axonale uitgroei en begeleiding kan worden gemanipuleerd en gekwantificeerd. Het kan ook worden aangepast voor het beoordelen van andere regio&#39;s of moleculaire signalen.

Dissectie en Cultuur van de muis Dopaminerge en het striatum Explantaten in drie-dimensionale Collageen Matrix Assays

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Dissectie en Cultuur van Chick Statoacoustic Ganglion en Spinal Cord Explantaten in Collageen Gels voor neurietuitgroei Assays

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Een Functionele Motor-eenheid in de cultuur Dish: Co-cultuur van het ruggenmerg Explantaten-en spiercellen

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Cultuur en Analyse van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonale netvliesweefsel

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Het beoordelen Neurodegenerative Fenotypes in<em&gt; Drosophila</em&gt; Dopaminerge neuronen reduceert door Klimmen Testen en Whole Brain Immunokleuring

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

Primary Culture of Mouse Dopaminergic Neurons

Primaire Cultuur van de Muis dopaminerge neuronen

Dopaminergic neurons represent less than 1% of the total number of neurons in the brain. This low amount of neurons regulates important brain functions ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Langdurige Time Lapse Imaging van Muis Cochlear Explantaten

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Isolatie, Cultuur en onderhoud op lange termijn van de Primary mesencefale dopaminerge neuronen uit embryonale knaagdieren Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

Protocol voor drie-dimensionale confocale Morfometrische Analyse van Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Fiber Connections of the Supplementary Motor Area Revisited: Methodology of Fiber Dissection, DTI, and Three Dimensional Documentation

Fiberverbindingen van de aanvullende motorruimte herzien: Methode van vezeldissectie, DTI en driedimensionale documentatie

The purpose of this study is to show the methodology for the examination of the white matter connections of the supplementary motor area (SMA) complex ...