Name: dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays
Uploaded: 2012-03-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

Анализ коллагеновой матрицы была разработана и улучшена работа различных исследовательских групп в течение последних двух-трех десятилетий. Подходов, описанных здесь, дофаминергических и полосатой эксплантов большую пользу от этих исследований. Кроме того, авторы хотели бы поблагодарить Asheeta Прасад за помощь в создании полосатого культурами эксплантов. Работа в лаборатории была профинансирована по правам границы Научная программа организации (премия развития карьеры), Нидерландская организация по научным исследованиям и развитию (ZonMw-VIDI и ZonMw-TOP), Europanian союза (mdDA-NeuroDev, FP7/2007-2011 , грант 222 999) (для RJP) и Нидерландская организация по научным исследованиям (TopTalent, в ERES).

1. Подготовка крысы хвост Коллаген <ol><li> Соберите 6-10 взрослых крыс хвосты (это можно хранить хвосты при -20 ° C до использования). </li><li> Замочите хвосты в 95% этаноле в течение ночи при комнатной температуре (RT). </li></ol> Препарирование крысиные хвосты (в ткани капот культура): ...

<ol>
	<li>van den Heuvel, D. M., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+connected+in+the+dopamine+system.">Getting connected in the dopamine system.</a> Prog. Neurobiol. 85, 75-93 (2008).</li><li>Lobo, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+of+striatonigral+and+striatopallidal+medium+spiny+neurons+past,+present,+and+future.">Molecular profiling of striatonigral and striatopallidal medium spiny neurons past, present, and future.</a> Int. Rev. Neurobiol. 89, 1-35 (2009).</li><li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298, 1959-1964 (2002).</li><li>Chilton, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecules+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecules mechanisms of axon guidance.</a> Dev. Biol. 292, 13-24 (2006).</li><li>Lumsden, A. G., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+effect+of+specific+target+epithelium+in+the+developing+mammalian+nervous+system.">Chemotropic effect of specific target epithelium in the developing mammalian nervous system.</a> Nature. 323, 538-539 (1986).</li><li>Tessier-Lavigne, M., Placzek, M., Lumsden, A. G., Dodd, J., Jessel, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+guidance+of+developing+axons+in+the+mammalian+central+nervous+system.">Chemotropic guidance of developing axons in the mammalian central nervous system.</a> Nature. 336, 775-778 (1988).</li><li>Kolk, S. M., Gunput, R. A., Tran, T. S., van den Heuvel, D. M., Prasad, A. A., Hellemons, A. J., Adolfs, Y., Ginty, D. D., Kolodkin, A. L., Burbach, J. P., Smidt, M. P., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+3F+is+a+bifunctional+guidance+cue+for+dopaminergic+axons+and+controls+their+fasciculation,+channeling,+rostral+growth,+and+intracortical+targeting.">Semaphorin 3F is a bifunctional guidance cue for dopaminergic axons and controls their fasciculation, channeling, rostral growth, and intracortical targeting.</a> J. Neurosci. 29, 12542-12557 (2009).</li><li>Fenstermaker, A. G., Prasad, A. A., Bechara, A., Adolfs, Y., Tissir, F., Goffinet, A., Zou, Y., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/planar+cell+polarity+signaling+controls+the+anterior-posterior+organization+of+monoaminergic+axons+in+the+brainstem.">Wnt/planar cell polarity signaling controls the anterior-posterior organization of monoaminergic axons in the brainstem.</a> J. Neurosci. 30, 16053-16064 (2010).</li><li>Arlotta, P., Molyneaux, B. J., Jabaudon, D., Yoshida, Y., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip2+controls+the+differentiation+of+medium+spiny+neurons+and+the+establishment+of+the+cellular+architecture+of+the+striatum.">Ctip2 controls the differentiation of medium spiny neurons and the establishment of the cellular architecture of the striatum.</a> J. Neurosci. 28, 622-632 (2008).</li><li>De Wit, J., Toonen, R. F., Verhage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-dependent+local+retention+of+secretory+vesicle+cargo+in+cortical+neurons.">Matrix-dependent local retention of secretory vesicle cargo in cortical neurons.</a> J. Neurosci. 29, 23-37 (2009).</li><li>G&#228;hwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+cultures:+a+technique+has+come+of+age.">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20, 471-477 (1997).</li></ol>

Анализ коллагеновой матрицы, описанные здесь были использованы и улучшены различные лаборатории в последние десятилетия, чтобы исследовать различные аксона руководством молекул и нейронных систем (например, см. ссылки 5-8). Эти исследования показали, что этот анализ является мощным ин?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> BioWhittaker </td><td> 14-801F </td><td></td></tr><tr><td> Глютамин (200 мм) </td><td> ПАА </td><td> M11-004 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes </td><td> VWR International </td><td> 441476L </td><td></td></tr><tr><td> β-меркаптоэтанол </td><td> Merck </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Минимальные основные медиа (MEM) </td><td> Гибко </td><td> 61100-087 </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Гибко </td><td> 21103-049 </td><td></td></tr><tr><td> B27 </td><td> Гибко </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> L-15 Лейбовиц в средней </td><td> Гибко </td><td&gt; 11415-049 </td><td></td></tr><tr><td> Пенициллин, стрептомицин </td><td> Гибко </td><td> 15070-063 </td><td></td></tr><tr><td> Продлить Золото реагентов Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr><tr><td> Диализ трубы </td><td> Spectrum Labs </td><td> 132660 </td><td></td></tr><tr><td> Кролик против тирозингидроксилазы </td><td> Pel-Freez </td><td> P40101-0 </td><td></td></tr><tr><td> Кролик против Darpp32 (Н-62) </td><td> Санта-Крус </td><td> Sc-11365 </td><td></td></tr><tr><td> Мышь против βIII тубулина </td><td> Сигма </td><td> T8660 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor меченых вторичных антител </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays

Мозге дофамина (mdDA) нейронов проект по медиальной пучка переднего мозга на несколько областей, в конечном мозге, в том числе стриатуме 1. Взаимно, средних колючих нейронов в полосатом теле, которые приводят к striatonigral (прямой) путь иннервируют черной субстанции 2. Развитие этих аксонов путей зависит от комбинаторного действия множества роста аксонов и руководство в том числе сигналы молекул, которые выпущены невриты или (промежуточные) целевые регионы 3,4. Эти растворимые факторы могут быть изучены в лабораторных на mdDA культивирования и / или полосатой эксплантов в коллагеновой матрицы, которая обеспечивает трехмерную подложку для аксонов имитируя внеклеточной среде. Кроме того, коллагеновые матрицы позволяет формирование относительно стабильного градиенты белков выпущен других эксплантов или клетки помещаются в непосредственной близости (см., например, ссылки 5 и 6). Здесь мы опишем методы PURкации крысы хвост коллагена, микродиссекции дофаминергической и полосатой эксплантов, их культуры в коллаген гели и последующего иммуногистохимического и количественного анализа. Во-первых, мозг эмбриона мыши E14.5 изолированы и дофаминергической и полосатой эксплантов которые микродиссекции. Эти эксплантов затем (со) культивировали в коллагеновых гелей на покровные 48 до 72 часов в лабораторных условиях. Впоследствии аксонального проекции визуализируется использованием нейронных маркеров (например, тирозин гидроксилазы, DARPP32 или βIII тубулина) и рост аксонов и притяжения или отталкивания ответы аксона количественно. Это нейронов подготовки является полезным инструментом для лабораторного исследования клеточных и молекулярных механизмов mesostriatal и striatonigral рост аксонов и руководства в процессе разработки. С помощью этого анализа, можно также оценить другие (промежуточные) цели дофаминергической и полосатой аксонов или для проверки специфических молекулярных сигналов.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

Эксплантов из системы мозга дофамина и стриатуме используются в анализе коллагеновой матрицы для<em&gt; В пробирке</em&gt; Анализ mesostriatal и striatonigral путь развития. В данном анализе аксонального результат и рекомендации можно манипулировать и количественно. Она также может быть модифицирован для оценки других регионов или молекулярных сигналов.

Вскрытие и культуры мышь дофаминергической и стриатуме эксплантов в трехмерных Анализы коллагеновой матрице

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Разбор и культуры спаечный Нейроны из эмбриональных спинного мозга

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Разбор и культуры Чик Statoacoustic ганглия и спинного мозга при эксплантов Коллаген Гели для нейритов Анализы вырост

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Функциональный блок двигателя в культуре блюдо: Co-культуре эксплантов спинного мозга и мышечных клеток

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, культуры и анализ<em&gt; Xenopus Хепориз</em&gt; Эмбриональные ткани сетчатки

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Оценка Нейродегенеративных фенотипов<em&gt; Drosophila</em&gt; Дофаминергических нейронов, забравшись на анализы и полного Иммуноокрашивание мозга

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

Primary Culture of Mouse Dopaminergic Neurons

Первичная культура Mouse дофаминергических нейронов

Dopaminergic neurons represent less than 1% of the total number of neurons in the brain. This low amount of neurons regulates important brain functions ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Долгосрочный длительной Визуализация мыши Cochlear эксплантов

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Изоляция, культуры и долгосрочного поддержания первичного теменной дофаминергических нейронов из эмбриональных грызунов Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

Протокол трехмерной конфокальной морфометрического анализа астроцитов

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Fiber Connections of the Supplementary Motor Area Revisited: Methodology of Fiber Dissection, DTI, and Three Dimensional Documentation

Оптические соединения дополнительной моторной зоны: методология волоконного рассечения, DTI и трехмерной документации

The purpose of this study is to show the methodology for the examination of the white matter connections of the supplementary motor area (SMA) complex ...