Name: induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model
Uploaded: 2012-08-29T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

אנו חייבים תודה לאליס Gaughan ומחמם-ג&#39;ינג וואנג, שמצטיין טכניים תמיכה, הזנה רוחנית ותמיכה מוסרית היו תפקיד מרכזי במחקרים אלו נעים קדימה. מחקרים אלה נתמכו על ידי מענק NIH AI036532 לgah.

1. הקרנה קטלנית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עד 10 עכברי נמען לכלוב microisolator תואם irradiator לשמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקרין ב2 מנות שווות מסכמות מינון כולל (מנה כוללת = 9 cGy למקבלי BALB.B). הקרנה שנייה צריכה להיות 3 שעות אחרי הראשון. הזריקה אמורה להת...

<ol>
	<li>Cooke, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Berger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+subsets+involved+in+lethal+graft-versus-host+disease+directed+to+immunodominant+minor+histocompatibility+antigens.">T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens.</a> Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+CD8++cells+for+prevention+of+graft-versus-host+disease+after+bone+marrowtransplantation.+A+randomized+controlled+trial.">Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial.</a> Transplantation. 57, 82-87 (1994).</li><li>Korngold, R., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+markers+of+T+cells+causing+lethal+graft-vs-host+disease+to+class+I+vs+class+II+H-2+differences.">Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences.</a> Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).</li><li>Cao, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+using+labeled+donor+tissues+reveals+patterns+of+engraftment,+rejection,+and+survival+in+transplantation.">Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation.</a> Transplantation. 80, 134-139 (2005).</li><li>Asady, R. E. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-{beta}-dependent+CD103+expression+by+CD8(+)+T+cells+promotes+selective+destruction+of+the+host+intestinal+epithelium+during+graft-versus-host+disease.">TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease.</a> J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Karecla, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+E-cadherin+on+epithelial+cells+by+the+mucosal+T+cell+integrin+alpha+M290+beta+7+(alpha+E+beta+7).">Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7).</a> Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).</li><li>Cepek, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+between+epithelial+cells+and+T+lymphocytes+mediated+by+E-cadherin+and+the+alpha+E+beta+7+integrin.">Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin.</a> Nature. 372, 190-193 (1994).</li><li>Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+functional+characterization+of+a+dominant+minor+H+antigen,+H60.">The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60.</a> J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).</li></ol>

הפרוטוקול לגרימת GVHD בעכברים שהוצגו כאן מהווה מודל רלוונטי קליני של GVHD העכברי. הוקם במקור על ידי ברגר ואח&#39;. בשנת 1994, / 6 C57Bl לשילוב מתח BALB.B הוא MHC-תאם, עם תמותת GVHD מתווכת על ידי CD4 CD8 התלוי, גורמי אש T 2, דומים מאוד לתרחיש הקליני השכיח ביותר 3. זה ידוע כי השתלת...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 12633-012 </td><td></td></tr><tr><td> עוברי עגל בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 10439016 </td><td></td></tr><tr><td> מסננת תא 40 מיקרומטר </td><td> BD Biosciences </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> CD3e-ביוטין </td><td> Miltenyi יוטק </td><td> 130-093-021 </td><td></td></tr><tr><td> Microbeads אנטי ביוטין </td><td> Miltenyi יוטק </td><td> 130-091-147 </td><td></td></tr><tr><td> CD8a microbeads </td><td> Miltenyi יוטק </td><td> 130-049-401 </td><td> נהג לכלות CD8 תאי T מטחול. </td></tr><tr><td> קוקטייל נוגדן טיהור CD8a </td><td> Miltenyi יוטק </td><td> 130-095-236 </td><td> משמש לטיהורCD8 תאי T מטחול. </td></tr><tr><td> D-luciferin </td><td> Caliper מדעי חיים </td><td> 122796 </td><td></td></tr></tbody></table>

induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model

מחלת שתל נגד מארח (GVHD) היא המחסום להגבלת השימוש הרחב של השתלת מח עצם כטיפול מרפא למגוון ליקויים המטולוגיות. GVHD נגרם על ידי תאי T alloreactive בשלים הנמצאים במח עצם השתל שהחדירו לתוך הנמען ולגרום ניזק לאיברים מארחים. עם זאת, בעכברים, תאי T יש להוסיף לבידוד מח העצם גורמים GVHD. למרות עבודה מקיפה שנעשתה לאפיין השתלת הודעת T תא תגובות, טכנולוגיית הדמית bioluminescent היא שיטה לא פולשנית כדי לעקוב אחר דפוסי סחר בתאי ה T בגוף חי. בעקבות קרינה קטלנית, עכברי נמען מושתלים עם תאי מח עצם וsplenocytes מעכברים תורמים. תת תאי T מL2G85.B6 (עכברים הטרנסגניים שconstitutively מבטאים לוציפראז) נכללים בהשתלה. על ידי השתלת תאי T מסוים תת בלבד, אחד הוא מסוגל לעקוב אחר תת תאי T ספציפי בגוף חי,ובהתבסס על המיקום שלהם, לפתח השערות בדבר תפקידו של תת תאי T ספציפי בקידום GVHD בנקודתי זמן שונות. בהשתלת הודעת מרווחים קבועים מראש, עכברי נמען הם צלמו באמצעות מצלמת CCD IVIS Xenogen. עוצמת אור ניתן לכמת באמצעות תוכנת תמונת חיים כדי להפיק תמונה פסאודו צבע המבוססת על עוצמת פוטון (אדום = בעצמה גבוהה, סגולות = עצימות נמוכות). בין השתלה לאחר 4-7 ימים, עכברי נמען מתחילים להראות סימנים קליניים של GVHD. קוק ואח&#39;. 1 פתח שיטת ניקוד ללכמת את התקדמות מחלה המבוססת על מרקם נמען עכברי פרווה, שלמות עור, פעילות, ירידה במשקל, ויציבה. עכברים הם הבקיעו יומיים, ומורדמים כשהם הופכים לגוססים. עכברים בדרך כלל מטופלות הפכו גוססים השתלת 20-30 ימי הודעה. מודלים עכבריים הם כלים רבים ערך ללימוד אימונולוגיה של GVHD. סלקטיבי השתלת התאים T מסוים תת אלשפל לזיהוי מדוקדק של התפקידים כל תת מחזות. הלא פולשני מעקב תגובות תא T in vivo מוסיף עוד שכבה של ערך למודלים עכבריים GVHD.

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

השתלת מח עצם Murine היא טכניקה בשימוש נרחב ללמוד מנגנונים אימונולוגיים המסדירים את מחלת שתל נגד מארח בבני אדם. היכולת לעקוב אחר דפוסי סחר בתא T<em&gt; In vivo</em&gt; מאפשר ניתוח מפורט של ההתפתחות וההנצחה של תגובות תא T במחלת שתל נגד מארח.

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם של התקפת T-Cell-מכוון oligodendrocyte בפרוסות המוח חריף

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של מחסום דם-מוח באמצעות ספקטרוסקופיית עכבה: התמקדות T Cell-אנדותל אינטראקציה תא

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

אין ויוו Assay גילוי של הפונקציה Cytolytic תא T אנטיגן ספציפי באמצעות מודל החיסון

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

פרוטוקול שלפוחית היניקה לימודים אדם T-cell האחזור תגובות In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

מודל תרבות Bursal-תא ראשי לשעבר Vivo עוף ללמוד פתוגנזה וירוס מחלה זיהומית Bursal

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

כימות מבוססי Cytometry זרימה ססגוניות של המיטוכונדריה, Lysosomes בתאי T

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Determination of Regulatory T Cell Subsets in Murine Thymus, Pancreatic Draining Lymph Node and Spleen Using Flow Cytometry

קביעת קבוצות משנה תא T רגולטורי ב מאתר התימוס, הלבלב ניקוז הלימפה והטחול באמצעות Cytometry זרימה

Our immune system consists of a number and variety of immune cells including regulatory T cells (Treg) cells. Treg cells can be divided into two subsets, ...