Name: induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model
Uploaded: 2012-08-29T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

Vi står i gjeld til Alice Gaughan og Jiao-Jing Wang som fremragende teknisk støtte, intellektuell input, og moralsk støtte var instrumental i å flytte disse studiene fremover. Disse studiene ble støttet av NIH stipend AI036532 til GAH.

1. Dødelig bestråling <ol><li> Plasser opptil 10 mottaker mus inn en microisolator bur forenlig med irradiator skal brukes. </li><li> Irradiate i to like doser summere total dose (total dose = 9 CGY for BALB.B mottakere). Andre bestråling bør være 3 timer etter første. Injeksjon bør skje mellom 4-6 timer etter siste bestråling. Strålebehandling mus i enten Cs 137 kilde eller RS2, 000, irradiator. </li><li> Etter de andre stråledosegrenser, lagre mus i microisolator bur med forsurede vann inntil ti...

<ol>
	<li>Cooke, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Berger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+subsets+involved+in+lethal+graft-versus-host+disease+directed+to+immunodominant+minor+histocompatibility+antigens.">T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens.</a> Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+CD8++cells+for+prevention+of+graft-versus-host+disease+after+bone+marrowtransplantation.+A+randomized+controlled+trial.">Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial.</a> Transplantation. 57, 82-87 (1994).</li><li>Korngold, R., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+markers+of+T+cells+causing+lethal+graft-vs-host+disease+to+class+I+vs+class+II+H-2+differences.">Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences.</a> Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).</li><li>Cao, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+using+labeled+donor+tissues+reveals+patterns+of+engraftment,+rejection,+and+survival+in+transplantation.">Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation.</a> Transplantation. 80, 134-139 (2005).</li><li>Asady, R. E. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-{beta}-dependent+CD103+expression+by+CD8(+)+T+cells+promotes+selective+destruction+of+the+host+intestinal+epithelium+during+graft-versus-host+disease.">TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease.</a> J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Karecla, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+E-cadherin+on+epithelial+cells+by+the+mucosal+T+cell+integrin+alpha+M290+beta+7+(alpha+E+beta+7).">Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7).</a> Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).</li><li>Cepek, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+between+epithelial+cells+and+T+lymphocytes+mediated+by+E-cadherin+and+the+alpha+E+beta+7+integrin.">Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin.</a> Nature. 372, 190-193 (1994).</li><li>Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+functional+characterization+of+a+dominant+minor+H+antigen,+H60.">The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60.</a> J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).</li></ol>

Protokollen for å indusere GVHD hos mus som presenteres her representerer en klinisk relevant modell av murine GVHD. Opprinnelig etablert av Berger et al. I 1994, er den C57BL / 6 i BALB.B belastning kombinasjon MHC-matchet, med GVHD dødelighet mediert av CD4 avhengige, CD8 T effektbokser 2, høyt ligner den vanligste kliniske scenario 3. Det er kjent at transplantasjonen CD8 T-celler alene ikke forårsaker GvHD i denne modellen, men er sykdomsprogresjon signifikant verre når både CD4 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på Reagens </td><td> Selskapet </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 12633-012 </td><td></td></tr><tr><td> Kalvefosterserum </td><td> Invitrogen </td><td> 10439016 </td><td></td></tr><tr><td> 40 pM Cell Sil </td><td> BD Biosciences </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> CD3e-Biotin </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-093-021 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Biotin mikroperler </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-091-147 </td><td></td></tr><tr><td> CD8a mikroperler </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-049-401 </td><td> Brukes til å utarme CD8 T-celler fra milt. </td></tr><tr><td> CD8a Rensing Antistoff Cocktail </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-095-236 </td><td> Brukes til å renseCD8 T-celler fra milt. </td></tr><tr><td> D-Luciferin </td><td> Målepunktet Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr></tbody></table>

induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model

Transplantat-mot-vert-sykdom (GVHD) er den begrensende barriere til allsidig bruk av benmargstransplantasjon som kurativ terapi for en rekke hematologiske mangler. GVHD er forårsaket av modne alloreactive T-celler til stede i benmargen pode som er tilført i mottakeren og skade vert organer. Men i mus, må T-celler legges til benmargen inokulatet å føre GVHD. Selv om omfattende arbeid har blitt gjort for å karakterisere T celle responser etter transplantasjon, er bioluminescent bildeteknologi en ikke-invasiv metode for å overvåke T celle trafficking mønstre in vivo. Etter dødelig bestråling, er mottaker mus transplantert med benmargceller og splenocyttene fra donor mus. T celle undergrupper fra L2G85.B6 (transgene mus som konstitutivt uttrykker luciferase) er inkludert i transplantasjon. Ved kun transplantere visse T-celle-undergrupper, er man i stand til å spore spesifikke T celle undergrupper in vivo,og basert på deres sted, utvikle hypoteser for den rolle spesifikke T celle undergrupper i fremme GVHD ved forskjellige tidspunkter. På forhåndsbestemte intervaller etter transplantasjon, er mottaker mus avbildes ved hjelp av en Xenogen IVIS CCD-kamera. Lysintensiteten kan kvantifiseres ved hjelp levende bilde programvare for å generere en pseudo-fargebilde basert på foton intensitet (rød = høy intensitet, fiolett = lav intensitet). Mellom 4-7 dager etter transplantasjon, mottaker mus begynner å vise kliniske tegn på GVHD. Cooke et al. 1 utviklet et poengsystem for å kvantifisere sykdomsprogresjon basert på mottakeren mus pels tekstur, hud integritet, aktivitet, vekttap, og holdning. Mus scoret daglig, og avlives når de blir døende. Mottaker mus generelt blitt døende 20-30 dager etter transplantasjon. Murine modeller er verdifulle verktøy for å studere immunologi GVHD. Selektivt transplantere bestemt T-celle undergrupper allows for forsiktig identifisering av rollene hver undergruppe spiller. Non-invasiv sporing T celle responser in vivo legger et lag av verdi til murine GVHD modeller.

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine benmargstransplantasjon er en mye brukt teknikk for å studere immunologiske mekanismer som styrer graft-versus-host sykdom hos mennesker. Muligheten til å overvåke T celle trafficking mønstre<em&gt; In vivo</em&gt; Tillater detaljert analyse av utviklingen og opprettholdelse av T celle responser under graft-versus-host sykdom.

Induksjon av transplantat-mot-vert-sykdom og<em&gt; In Vivo</em&gt; T Cell overvåking ved hjelp av en MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modell av en oligodendrocyte styrt T-Cell angrep i akutt hjerneskiver

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induksjon av murine tarmbetennelse etter adoptiv overføring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Høy</sup&gt; T-celler i immundefekte mus

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Vindu Chamber modell for<em&gt; I Vivo</em&gt; Cell sporing i Murine Bone Marrow

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

en<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell av blod-hjernebarrieren Bruke impedansspektroskopi: En Fokus på T Cell-endotelceller Interaksjon

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

I Vivo Analysen for påvisning av Antigen-spesifikke T-celle Cytolytic funksjon med en vaksinasjon modell

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

En suge blemme protokoll å studere Human T-celle tilbakekalling svar i Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kylling primære Bursal-celle kultur modell å studere Bursal infeksjonssykdommer Virus patogenesen

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Flerfarget flyt cytometri-baserte kvantifisering av mitokondrier og lysosomer i T-celler

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Determination of Regulatory T Cell Subsets in Murine Thymus, Pancreatic Draining Lymph Node and Spleen Using Flow Cytometry

Fastsettelse av regulatoriske T-celle delsett i Murine Thymus, bukspyttkjertelen drenering lymfeknute og milt bruker flowcytometri

Our immune system consists of a number and variety of immune cells including regulatory T cells (Treg) cells. Treg cells can be divided into two subsets, ...