Name: induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model
Uploaded: 2012-08-29T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

Vi står i tacksamhetsskuld till Alice Gaughan och Jiao-Jing Wang, vars enastående teknisk support, intellektuella insatser och moraliskt stöd bidrog flytta dessa studier framåt. Dessa studier stöddes av NIH bidrag AI036532 till GAH.

1. Dödlig bestrålning <ol><li> Placera upp till 10 mottagande möss i en bur microisolator kompatibel med bestrålningsanordningen som skall användas. </li><li> Bestråla i 2 lika stora doser summerande total dos (total dos = 9 cGy för BALB.B mottagare). Andra bestrålning ska vara 3 timmar efter första. Injektion skall ske mellan 4-6 timmar efter den slutliga bestrålning. Bestråla möss i antingen Cs 137 källa eller RS2, 000, bestrålningsanordningen. </li><li> Efter den andra stråldos, lagra mös...

<ol>
	<li>Cooke, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Berger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+subsets+involved+in+lethal+graft-versus-host+disease+directed+to+immunodominant+minor+histocompatibility+antigens.">T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens.</a> Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+CD8++cells+for+prevention+of+graft-versus-host+disease+after+bone+marrowtransplantation.+A+randomized+controlled+trial.">Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial.</a> Transplantation. 57, 82-87 (1994).</li><li>Korngold, R., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+markers+of+T+cells+causing+lethal+graft-vs-host+disease+to+class+I+vs+class+II+H-2+differences.">Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences.</a> Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).</li><li>Cao, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+using+labeled+donor+tissues+reveals+patterns+of+engraftment,+rejection,+and+survival+in+transplantation.">Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation.</a> Transplantation. 80, 134-139 (2005).</li><li>Asady, R. E. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-{beta}-dependent+CD103+expression+by+CD8(+)+T+cells+promotes+selective+destruction+of+the+host+intestinal+epithelium+during+graft-versus-host+disease.">TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease.</a> J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Karecla, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+E-cadherin+on+epithelial+cells+by+the+mucosal+T+cell+integrin+alpha+M290+beta+7+(alpha+E+beta+7).">Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7).</a> Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).</li><li>Cepek, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+between+epithelial+cells+and+T+lymphocytes+mediated+by+E-cadherin+and+the+alpha+E+beta+7+integrin.">Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin.</a> Nature. 372, 190-193 (1994).</li><li>Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+functional+characterization+of+a+dominant+minor+H+antigen,+H60.">The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60.</a> J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).</li></ol>

Protokollet för att inducera GVHD i möss som presenteras här är en kliniskt relevant modell för murin GVHD. Ursprungligen fastställts av Berger et al. Under 1994, är det C57BL / 6 till BALB.B stam kombination av MHC-matchas med GVHD dödlighet förmedlas av CD4-beroende, CD8 T effektorer 2, mycket liknande den vanligaste kliniska scenariot 3. Det är känt att transplantera CD8 T-celler enbart inte orsakar GVHD i denna modell, men är sjukdomsprogression betydligt sämre när både ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 12633-012 </td><td></td></tr><tr><td> Fetalt kalvserum </td><td> Invitrogen </td><td> 10439016 </td><td></td></tr><tr><td> 40 M cellfilter </td><td> BD Biosciences </td><td> 352.340 </td><td></td></tr><tr><td> CD3e-biotin </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-093-021 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-biotin mikropärlor </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-091-147 </td><td></td></tr><tr><td> CD8a mikropärlor </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-049-401 </td><td> Används för att utarma CD8 T-celler från mjälte. </td></tr><tr><td> CD8a Rening Antikropp Cocktail </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-095-236 </td><td> Används för att renaCD8 T-celler från mjälte. </td></tr><tr><td> D-Luciferin </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122.796 </td><td></td></tr></tbody></table>

induction of graft-versus-host disease and in vivo t cell monitoring using an mhc-matched murine model

Graft-versus-värd-sjukdom (GVHD) är den begränsande hinder för den breda användningen av benmärgstransplantation som en botande terapi för en mängd hematologiska brister. GVHD orsakas av mogna alloreaktiva T-celler närvarande i benmärgen transplantat som infunderas i mottagaren och orsakar skador på organ värd. Emellertid, i möss, måste T-celler till benmärgen inokulum att orsaka GVHD. Även omfattande arbete har gjorts för att karakterisera T-cell svar efter transplantation är bioluminescent bildteknik en icke-invasiv metod för att övervaka T mönster cell handel in vivo. Efter dödlig bestrålning, är mottagande möss transplanteras med benmärgsceller och splenocyter från donatormöss. T-cell-undergrupper från L2G85.B6 (transgena möss som konstitutivt uttrycker luciferas) ingår i transplantatet. Genom att bara transplantera vissa T-cell undergrupper är en möjlighet att spåra specifika T-celler undergrupper in vivo,och baserat på deras placering, utveckla hypoteser om betydelsen av specifika T-cell undergrupper för att främja GVHD vid olika tidpunkter. Vid förutbestämda intervaller efter transplantation är mottagande möss avbildas med en Xenogen IVIS CCD-kamera. Ljusintensiteten kan kvantifieras med hjälp av programvara Living Image för att generera en pseudo-färgbild baserad på foton intensitet (röd = hög intensitet, violett = låg intensitet). Mellan 4-7 dagar efter transplantationen, mottagande möss börja visa kliniska tecken på GVHD. Cooke et al. 1 utvecklat ett poängsystem för att kvantifiera sjukdomsprogression baserat på mottagaren möss päls textur, hud integritet, aktivitet, viktminskning, och kroppshållning. Möss gjorde dagligen och avlivades när de blir döende. Mottagare möss blivit allmänt döende 20-30 dagar efter transplantationen. Musmodeller är värdefulla verktyg för att studera immunologi GVHD. Selektivt transplantera synnerhet T-cell undergrupper albottenrekord för noggrann identifiering av rollerna varje delmängd spelar. Icke-invasivt spåra T-cellsvar in vivo lägger ytterligare ett lager av värde för murina GVHD modeller.

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model at JoVE.com

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murin benmärgstransplantation är en allmänt använd teknik för att studera immunologiska mekanismer som styr transplantat-mot-värd-sjukdom hos människor. Förmågan att övervaka T-cell mönster människohandel<em&gt; In vivo</em&gt; Möjliggör detaljerad analys av utvecklingen och bevarandet av T-cell svar under graft-versus-host sjukdom.

Induktion av transplantat-mot-värd-sjukdom och<em&gt; In Vivo</em&gt; T cell övervakning med en MHC-matchade musmodell

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retroviral Transduction av T-cell receptorer i Mus T-celler

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modell av en Oligodendrocyte styrt T-Cell Attack i akut hjärnan skivor

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induktion av murina tarminflammation med adoptiv överföring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hög</sup&gt; T-celler i möss med immunbrist

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Lårben Fönster Chamber modell för<em&gt; In Vivo</em&gt; Cell Spårning i murina benmärgs

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

En<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell av blod-hjärnbarriären Använda impedans spektroskopi: Fokus på T-cell-endotelceller interaktion

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Test för påvisande av Antigen-specifika T-cell cytolytisk funktion använder en Vaccination modell

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Ett sug Blister protokoll att studera mänsklig T-cell Recall Svaren In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kyckling primära Bursal-cellkultur modell att studera Bursal infektionssjukdom Virus patogenes

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Multicolor flöde flödescytometri-baserade kvantifiering av mitokondrier och lysosomer i T-celler

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Determination of Regulatory T Cell Subsets in Murine Thymus, Pancreatic Draining Lymph Node and Spleen Using Flow Cytometry

Bestämning av regulatoriska T-Cell Subsets i murina tymus, pankreas dränerande lymfkörtel och mjälte med flödescytometri

Our immune system consists of a number and variety of immune cells including regulatory T cells (Treg) cells. Treg cells can be divided into two subsets, ...