Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

Dit werk werd ondersteund door financiële steun van de Overstreet Foundation.

1. Basic Set Up voor u verder gaat to Cell Cultuur <ol><li> NeuroCult NSC basismedium en NeuroCult NSC proliferatie Supplementen worden gemengd in een verhouding van 9:1, respectievelijk volledige NSC medium te maken. </li><li> Een 37 ° C waterbad gebruikt wordt om op te warmen het medium. </li><li> Geschikte warmte geïnactiveerd foetaal kalfsserum (FCS) ontdooid. </li><li> Passende hoeveelheid voorraad groeifactor oplossingen met epidermale groeifactor (EGF bij 10 ug / ml), basic fibroblastische groeifactor (b-FGF ...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

De mogelijkheid om bepaalde neurale celpopulaties te isoleren (dat wil zeggen neuronen, astrocyten en oligodendrocyten) kunnen oplossen van enkele van de belemmeringen in verband met de klinische toepassing van neurale stamcellen (NSC). Ten eerste kunnen we het volledig karakteriseren van het begin bevolking van donor cellen. Ten tweede kunnen we een bepaald celtype of een combinatie van verschillende celtypes gebruikt met een specifieke verhouding afhankelijk van de aard of fase van de ziekte. Ten slotte kan het gebrui...

<table border="1"><tr><td> Naam van het serum </td><td> Type </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC basismedium </td><td> Medium </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Proliferatie Supplementen </td><td> Medium supplement </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0,05 trypsine-EDTA </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Soja trypsine-remmer </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> HEM component </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> HEM component </td></tr><tr><td> * Gedistilleerd water </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Cell zeef </td><td> Zeef </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 kolf </td><td> Cultuur software </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 kolf </td><td> Cultuur software </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml buizen </td><td> Cultuur software </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml </td><td> Cultuur software </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EFG </td><td> Groeifactor </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Groeifactor </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Heparine </td><td> Groeifactor </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Gereconstitueerd in PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Antilichaam </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-geconjugeerde muis IgG1 </td><td> Isotype controle antilichaam </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Heparine </td><td> Groeifactor </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Gereconstitueerd in PBS </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Groeifactor </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-OrnitHine </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal Calf Serum </td><td> Medium Supplement </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Antilichaam </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubuline </td><td> Antilichaam </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * Om HEM, mix 1 x 10 L pakket van MEM en 160 ml 1 M HEPES te maken en breng het volume op 8,75 L met gedestilleerd water. Stel de uiteindelijke pH op 7,4 en het op 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Neurale stamcellen (NSC), kunnen worden geïsoleerd en uitgebreid in op grote schaal, met behulp van de neurosphere test en gedifferentieerd in de drie belangrijkste celtypes van het centrale zenuwstelsel (CZS), namelijk, astrocyten, oligodendrocyten en neuronen. Deze eigenschappen maken neurale stamcellen en stamcellen een waardevolle hernieuwbare bron van cellen voor in vitro studies zoals drug discovery, neurotoxicology en electrofysiologie en ook voor celvervangingstherapie in veel neurologische aandoeningen. In de praktijk echter, heterogeniteit van NSC nakomelingen, lage productie van neuronen en oligodendrocyten, en overheersing van astrocyten na differentiatie beperken hun klinische toepassingen. Hier wordt beschreven een nieuwe methode voor de productie en daaropvolgende zuivering van onvolwassen neuronen van knaagdier NSC nakomelingen met fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) technologie. Met behulp van deze methode kan een zeer verrijkt neuronale voorlopercellen celpopulatie worden bereikt witHout merkbare astrocyten en bonafide NSC besmetting. De procedure omvat differentiatie van NSC nakomelingen geïsoleerd en uitgebreid van E14 muis ganglion grootheden met behulp van de neurosphere test, gevolgd door isolatie en verrijking van onrijpe neuronale cellen op basis van hun fysieke (grootte en interne complexiteit) en fluorescerende eigenschappen met behulp van flowcytometrie-technologie. Over het algemeen duurt het 5-7 dagen tot neurospheres en 6-8 dagen genereren om NSC nakomelingen differentiëren en te isoleren in hoge mate gezuiverd onvolwassen neuronale cellen.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Deze video protocol geeft blijk van een nieuwe methode voor het genereren en daaropvolgende zuivering van neuronale stamcellen uit een hernieuwbare bron van neurale stamcellen (NSC) op basis van hun fysieke (grootte en interne granulariteit) en fluorescerende eigenschappen met behulp van flowcytometrie-technologie.

De Neuroblast test: een test voor de generatie en de verrijking van Neuronale stamcellen uit Onderscheidende factor voor neurale stamcellen Nakomelingen met behulp van flowcytometrie

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolatie en uitbreiding van de volwassen muis neurale stamcellen Met behulp van de Neurosphere Assay

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Tot vaststelling van Embryonale Mouse Neural Stem Cell Culture Met behulp van de Neurosphere Assay

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neurale-Colony Forming Cell-test: Een test om Bona Fide neurale stamcellen van Neural Progenitor Cellen Discrimineer

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging van zintuig voorloper cellen in Intact Drosophila Poppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Voedingsvrije Afleiding van neurale stamcellen uit humane pluripotente stamcellen

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Flowcytometrie Protocollen voor Surface en intracellulaire Antigen Analyses van Neural Cell Types

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Celsortering van neurale stamcellen en stamcellen uit de Adult Mouse subventriculaire zone en Live-beeldvorming van de celcyclus Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Opsomming van neurale stamcellen Met behulp van klonen Testen

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Identificeren van celoppervlak markeringen van primaire neurale stam en voorlopercellen door metabole labeling van Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...