Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
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Ce travail a été soutenu par le financement de la Fondation Overstreet.

1. Basic Set Up Avant de procéder à la culture cellulaire <ol><li> NeuroCult NSC milieu de base et les suppléments NeuroCult NSC prolifération sont mélangés à un rapport 9:1, respectivement, de faire du milieu complet NSC. </li><li> Un bain à 37 ° C est utilisée pour réchauffer le milieu. </li><li> Quantité appropriée de inactivé par la chaleur sérum de veau foetal (FCS) est décongelé. </li><li> Quantité appropriée de solutions d&#39;achat d&#39;actions du facteur de croissance, y compris le facteur...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

La capacité d&#39;isoler des populations définies de cellules neurales (neurones à savoir, astrocytes et oligodendrocytes) pourrait résoudre certains des obstacles associés à l&#39;application clinique des cellules souches neurales (CSN). Tout d&#39;abord, il nous permet de caractériser complètement la population de départ de cellules du donneur. Deuxièmement, il nous permet d&#39;utiliser un type cellulaire particulier ou une combinaison de différents types de cellules avec un rapport spécifique, en fonctio...

<table border="1"><tr><td> Nom du réactif </td><td> Type </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC moyen basal </td><td> Moyen </td><td> Technologies des cellules souches </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC suppléments prolifération </td><td> Supplément moyen </td><td> Technologies des cellules souches </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> 0,05% de trypsine-EDTA </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Inhibiteur de trypsine de soja </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> Composante HEM </td></tr><tr><td> * Les HEPES </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> Composante HEM </td></tr><tr><td> * L&#39;eau distillée </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Tamis cellulaire </td><td> Tamis </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 flacon </td><td> Culture de la céramique </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 flacon </td><td> Culture de la céramique </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 15 ml </td><td> Culture de la céramique </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 50 ml </td><td> Culture de la céramique </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Facteur de croissance </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Reconstitué dans du PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Anticorps </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> IgG1 souris PE-conjugué </td><td> Anticorps de contrôle isotypique </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Facteur de croissance </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Reconstitué dans du PBS </td></tr><tr><td> PMOrh-4 </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-Ornithine </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau foetal </td><td> Supplément moyenne </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Anticorps </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubuline </td><td> Anticorps </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * Pour faire HEM, mélange 1 sachet x L 10 du MEM et 160 ml de HEPES 1M et porter le volume à 8,75 L avec de l&#39;eau distillée. Réglez le pH final à 7,4 et le conserver à 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Les cellules souches neurales (CSN) peuvent être isolés et élargi à grande échelle, en utilisant le test neurosphères et différenciés dans les trois principaux types de cellules du système nerveux central (SNC); à savoir, les astrocytes, oligodendrocytes et des neurones. Ces caractéristiques font de souches neurales et les cellules progénitrices une source inestimable renouvelable de cellules pour des études in vitro, tels que le dépistage des drogues, neurotoxicologie et l&#39;électrophysiologie et aussi pour la thérapie de remplacement cellulaire dans de nombreuses maladies neurologiques. En pratique, cependant, l&#39;hétérogénéité de la descendance NSC, la faible production de neurones et des oligodendrocytes, les astrocytes et la prédominance de la suite de différenciation limiter leurs applications cliniques. Ici, nous décrivons une nouvelle méthodologie pour la purification de production et subséquente des neurones immatures de NSC descendance murin utilisant la fluorescence tri cellulaire (FACS) de la technologie. En utilisant cette méthodologie, une population hautement enrichi de cellules souches neuronales peuvent être atteints d&#39;espritHout toute astrocytes notable et de bonne foi la contamination NSC. La procédure comprend la différenciation des produits de filiation du NSC isolé et agrandi à partir de E14 éminences ganglionnaires de souris en utilisant le test neurosphères, suivie par l&#39;isolement et l&#39;enrichissement de cellules immatures neuronaux en fonction de leurs propriétés physiques (taille et la complexité interne) et fluorescente utilisant la technologie de cytométrie en flux. Dans l&#39;ensemble, cela prend 5-7 jours pour générer neurosphères et 6-8 jours pour différencier descendance NSC et d&#39;isoler hautement purifié des cellules neuronales immatures.

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Ce protocole vidéo démontre une nouvelle méthode pour la génération et la purification ultérieure des cellules progénitrices neuronales à partir d&#39;une source renouvelable de cellules souches neurales (CSN) en fonction de leur physique (taille et granularité interne) et les propriétés fluorescentes en utilisant la technologie de cytométrie en flux.

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et l&#39;enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

L&#39;isolement et expansion des cellules souches neurales de souris adultes utilisant le test Neurosphère

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Recherche

Neurosciences

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Établir embryonnaires de la souris culture de cellules souches neurales utilisant le test Neurosphère

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-Formant Colonie dosage cellulaire: Un test pour distinguer Bona Fide Cellules souches neuronales à partir de cellules progénitrices neurales

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

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Imagerie des cellules vivantes des cellules sensorielles de précurseurs d&#39;organes en Intact Drosophile Les chrysalides

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

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Isolement et culture de cellules de crêtes neurales de tube neural embryonnaire murin

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Dérivation sans chargeur-de cellules progénitrices de la crête neurale souches pluripotentes humaines cellules

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Cytométrie en flux pour les protocoles surface et intracellulaire Antigen analyses des types cellulaires de neurones

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Tri cellulaire des neurones cellules souches et progénitrices de la souris adulte-ventriculaire Zone et Live-imagerie de la dynamique de leur cycle cellulaire

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Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

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Identification des marqueurs de surface cellulaire des cellules neurales primaires de tige et de progéniture par l'étiquetage métabolique du sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...