Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

עבודה זו נתמכה על ידי מימון מקרן אוברסטריט.

1. יסוד הגדרת לפני שתמשיך תרבית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> NeuroCult בינוני המל&quot;ל הבסיס, NeuroCult המל&quot;ל תוספי הפצת נשק מעורבבים ביחס של 09:01, בהתאמה, כדי להשלים בינוני המל&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 37 ° C אמבט מים משמש להתחמם בינוני. </li><li style="...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

היכולת לבודד המוגדרים אוכלוסיות תאים עצביים (כלומר נוירונים, האסטרוציטים ו oligodendrocytes) עשוי לפתור חלק מן המכשולים הקשורים ליישום קליני בתאי גזע עצביים (NSCs). ראשית, הוא מאפשר לנו לאפיין באופן מלא את האוכלוסייה המוצא של התאים התורמות. שנית, היא מאפשרת לנו להשתמש בסוג תא מ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם מגיב </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> NeuroCult המל&quot;ל בסל בינוני </td><td> בינוני </td><td> גזע התא טכנולוגיות </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult המל&quot;ל הפצת נשק תוספי </td><td> בינוני תוספת </td><td> גזע התא טכנולוגיות </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.05-EDTA טריפסין </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין סויה מעכב </td><td> מגיב </td><td> סיגמא </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> פן / סטרפטוקוקוס </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> Hem רכיב </td></tr><tr><td> * Quick HEPES </td><td> מגיב </td><td> סיגמא </td><td> H4034 </td><td> Hem רכיב </td></tr><tr><td> * מים מזוקקים </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> תא מסננת </td><td> כברה </td><td> BD פלקון </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 הבקבוק </td><td> תרבות כלי </td><td> Nalge Nunc הבינלאומי </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 הבקבוק </td><td> תרבות כלי </td><td> Nalge Nunc הבינלאומי </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 מ&quot;ל צינורות </td><td> תרבות כלי </td><td> BD פלקון </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל צינורות </td><td> תרבות כלי </td><td> BD פלקון </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> גורם הגדילה </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> ב-FGF </td><td> גורם הגדילה </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> הפרין </td><td> גורם הגדילה </td><td> סיגמא </td><td> H4784 </td><td> מחדש ב PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> נוגדן </td><td> Miltenyi BIOTEC </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-מצומדות העכבר IgG1 </td><td> Isotype נוגדנים השליטה </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> הפרין </td><td> גורם הגדילה </td><td> סיגמא </td><td> H4784 </td><td> מחדש ב PBS </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> גורם הגדילה </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> פולי-L-אורניתHine </td><td> מגיב </td><td> סיגמא </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> עגל עוברית סרום </td><td> בינוני מוסף </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> נוגדן </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III טובולין </td><td> נוגדן </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * כדי להפוך, Hem תערובת 1 x 10 L חבילת MEM ו 160 מ&quot;ל של 1M HEPES ולהביא נפח 8.75 ל &#39;באמצעות מים מזוקקים. הגדר את PH הסופי 7.4 ולאחסן אותו ב 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

בתאי גזע עצביים (NSCs) יכול להיות מבודד והוא התרחבה בקנה מידה גדול, תוך שימוש assay neurosphere הבדיל אל שלושת סוגי התאים העיקריים של מערכת העצבים המרכזית (CNS), כלומר, האסטרוציטים, oligodendrocytes נוירונים. תכונות אלו הופכות את גזע עצביים ו ובתאים מקור רב ערך מתחדשת של תאים במבחנה כגון הקרנת סמים, neurotoxicology ו electrophysiology וכן טיפול בתאי החלפת במחלות נוירולוגיות רבות. בפועל, עם זאת, ההטרוגניות של הצאצאים המל&quot;ל, ייצור נמוך של נוירונים oligodendrocytes, ואת השליטה של ​​האסטרוציטים הבאים בידול להגביל יישומים קליניים שלהם. כאן אנו מתארים מתודולוגיה חדשנית לטיהור הדור הבא של נוירונים בוגרים של הצאצאים המל&quot;ל Murine באמצעות תא הקרינה מיון מופעל (FACS) הטכנולוגיה. באמצעות מתודולוגיה זו, האוכלוסייה העשירה ביותר העצבית תא אבי ניתן להשיג שנינותHout כל astrocyte בולט וזיהום בתום לב המל&quot;ל. ההליך כולל בידול של הצאצאים המל&quot;ל מבודד והרחיב מ E14 יואילו הוד עכבר ganglionic באמצעות assay neurosphere, ואחריו בידוד והעשרה של תאים לא מפותחים על בסיס תכונות פיזיות (גודל ומורכבות פנימית) ו פלורסנט שלהם באמצעות טכנולוגיית הזרימה cytometry. בסך הכל, זה לוקח 5-7 ימים לייצר neurospheres ו 6-8 ימים כדי לבדל את הצאצאים המל&quot;ל ולבודד מטוהרים מאוד תאים עצביים מפותחים.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

זה פרוטוקול וידאו מדגים שיטה חדשה לייצור וטיהור הבאות של ובתאים עצביים ממקורות מתחדשים בתאי גזע עצביים (NSCs) מבוסס על (גרעיניות בגודל פנימי) הפיזי שלהם תכונות ניאון cytometry באמצעות טכנולוגיית הזרימה.

Assay Neuroblast: Assay לדור והעשרה של ובתאים העצבית הבחנה בין צאצאיהם גזע עצביים Cell שימוש cytometry זרימה

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

בידוד הרחבה של תאים בוגרים עכבר גזע עצביים שימוש Assay Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

הקמת עכבר עובריים גזע עצביים תרבית תאים באמצעות Assay Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

עצבית, המושבה יצירת Assay נייד: Assay להפלות בונה תאים בתום גזע עצביים מן ובתאים עצבית

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

גזירה ללא מזין של תאים עצביים קרסט אב קדמון מפלוריפוטנטיים אדם בתאי גזע

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

ניתוח cytometry זרימת פרוטוקולים למשטח והתאי Antigen של סוגי תאים עצביים

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

מיון תא של תאי גזע ועצביים ממבוגרי עכבר Subventricular האזור וחי-הדמיה של Dynamics תא המחזור שלהם

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

ספירת בתאי גזע עצביים באמצעות מבחני המשובטים

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

זיהוי סמני שטח תא של גזע עצבי ראשוני ובתאי מחולל מטבולית על ידי תיוג מטבולי של סילוגליקן

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...