Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
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1. बुनियादी सेल संस्कृति के लिए आगे बढ़ने से पहले सेट अप <ol><li> एक 9:01 के अनुपात में NeuroCult एनएससी बेसल मध्यम और NeuroCult एनएससी प्रसार पूरक मिश्रित कर रहे हैं, क्रमशः, पूरा एनएससी मध्यम. </li><li> 37 ° C पानी के स्नान मध्यम गर?...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

परिभाषित तंत्रिका कोशिका आबादी को अलग करने की क्षमता (यानी न्यूरॉन्स astrocytes और oligodendrocytes) के तंत्रिका स्टेम सेल के नैदानिक ​​अनुप्रयोग (एनएससी) के साथ जुड़े बाधाओं का समाधान हो सकता है. सबसे पहले, यह हमें सक्?...

<table border="1"><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> टाइप </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> NeuroCult एनएससी बेसल मध्यम </td><td> मध्यम </td><td> स्टेम सेल टेक्नोलॉजीज </td><td> 05,700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult एनएससी प्रसार की खुराक </td><td> मध्यम पूरक </td><td> स्टेम सेल टेक्नोलॉजीज </td><td> 05,701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.05 trypsin EDTA </td><td> अभिकर्मक </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> सोयाबीन trypsin अवरोध करनेवाला </td><td> अभिकर्मक </td><td> सिग्मा </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> / पेन Strep </td><td> अभिकर्मक </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * सदस्य </td><td> अभिकर्मक </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> हेम घटक </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> अभिकर्मक </td><td> सिग्मा </td><td> H4034 </td><td> हेम घटक </td></tr><tr><td> * आसुत जल </td><td> अभिकर्मक </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> सेल झरनी </td><td> छलनी </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352,340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 कुप्पी </td><td> संस्कृति के बर्तन </td><td> Nalge Nunc अंतरराष्ट्रीय </td><td> 136,196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 कुप्पी </td><td> संस्कृति के बर्तन </td><td> Nalge Nunc अंतरराष्ट्रीय </td><td> 178,905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर ट्यूबों </td><td> संस्कृति के बर्तन </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352,096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 मिलीलीटर ट्यूबों </td><td> संस्कृति के बर्तन </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352,070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> वृद्धि कारक </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> २०२८ - जैसे </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> वृद्धि कारक </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> 3139 - अमेरिकन प्लान </td><td></td></tr><tr><td> हेपरिन </td><td> वृद्धि कारक </td><td> सिग्मा </td><td> H4784 </td><td> पीबीएस में पुनर्गठित </td></tr><tr><td> विरोधी पीएसए - NCAM के पीई </td><td> प्रतिरक्षी </td><td> Miltenyi बायोटेक </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> पीई संयुग्मित माउस IgG1 </td><td> निर्धारण नियंत्रण एंटीबॉडी </td><td> बी.डी. Pharminogen </td><td> 556,029 </td><td></td></tr><tr><td> हेपरिन </td><td> वृद्धि कारक </td><td> सिग्मा </td><td> H4784 </td><td> पीबीएस में पुनर्गठित </td></tr><tr><td> HrBMP - 4 </td><td> वृद्धि कारक </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> 314 बी.पी.-010 </td><td></td></tr><tr><td> पाली - एल - Ornit केhine </td><td> अभिकर्मक </td><td> सिग्मा </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> भ्रूण बछड़ा सीरम </td><td> मध्यम अनुपूरक </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> प्रतिरक्षी </td><td> Dako </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> बी तृतीय ट्यूबिलिन </td><td> प्रतिरक्षी </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * हेम, मिश्रण 1 एक्स 10 एल सदस्य के पैकेट और 1M HEPES की 160 मिलीलीटर बनाने के लिए और 8.75 एल आसुत जल का उपयोग करने के लिए मात्रा लाने. अंतिम पीएच 7.4 सेट और यह 4 डिग्री सेल्सियस पर दुकान

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

तंत्रिका स्टेम सेल (एनएससी) और अलग किया जा सकता है में विस्तार बड़े पैमाने पर, neurosphere परख का उपयोग कर और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) प्रणाली के तीन प्रमुख प्रकार की कोशिकाओं में भेदभाव, अर्थात्, astrocytes oligodendrocytes, और न्यूरॉन्स. इन विशेषताओं तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं और पूर्वपुस्र्ष को दवा स्क्रीनिंग, neurotoxicology, और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के रूप में इन विट्रो अध्ययन में और भी कई न्यूरोलॉजिकल रोगों में सेल प्रतिस्थापन उपचार के लिए के लिए एक अमूल्य कोशिकाओं के अक्षय स्रोत बनाते हैं. अभ्यास में, तथापि, एनएससी संतान, न्यूरॉन्स और oligodendrocytes का कम उत्पादन है, और भेदभाव के बाद उनके नैदानिक ​​अनुप्रयोगों सीमा astrocytes की प्रबलता की विविधता है. यहाँ, हम murine एनएससी संतान से अपरिपक्व न्यूरॉन्स प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छँटाई (FACS) तकनीक का उपयोग कर की पीढ़ी और बाद में शुद्धीकरण के लिए एक उपन्यास पद्धति का वर्णन. इस पद्धति का उपयोग करना, अत्यधिक समृद्ध neuronal पूर्वपुस्र्ष सेल आबादी बुद्धि प्राप्त किया जा सकता हैकिसी भी ध्यान देने योग्य अस्थिकणिका और प्रामाणिक एनएससी संदूषण hout. प्रक्रिया एनएससी संतान अलग और E14 माउस ganglionic neurosphere परख का उपयोग eminences, उनके (आकार और आंतरिक जटिलता) और शारीरिक फ्लोरोसेंट प्रवाह cytometry प्रौद्योगिकी का उपयोग गुण के आधार पर अलगाव और अपरिपक्व neuronal कोशिकाओं के संवर्धन के बाद से विस्तार की भिन्नता शामिल है. कुल मिलाकर, यह 5-7 दिनों के लेता है neurospheres और 6-8 दिनों उत्पन्न करने के लिए एनएससी संतान अंतर और अत्यधिक शुद्ध अपरिपक्व neuronal कोशिकाओं को अलग.

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

इस वीडियो प्रोटोकॉल पीढ़ी और neuronal पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के बाद शुद्धि तंत्रिका स्टेम सेल का एक अक्षय स्रोत (एनएससी) से उनकी शारीरिक (आकार और आंतरिक granularity) और गुण फ्लोरोसेंट प्रवाह cytometry प्रौद्योगिकी का उपयोग के आधार पर के लिए एक उपन्यास विधि को दर्शाता है.

Neuroblast परख: पीढ़ी और neuronal पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का संवर्धन फर्क तंत्रिका स्टेम सेल संतान से फ्लो का प्रयोग के लिए एक परख

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

अलगाव और वयस्क माउस तंत्रिका स्टेम सेल के विस्तार Neurosphere परख का उपयोग

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति की स्थापना Neurosphere परख का उपयोग

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

सेल परख बनाने तंत्रिका कालोनी: एक सदाशयी तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं से तंत्रिका स्टेम सेल भेदभाव की परख

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

संवेदी अंग अग्रदूत साबित कोशिकाओं के बरकरार में लाइव सेल इमेजिंग ड्रोसोफिला Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

अलगाव और भ्रूण murine तंत्रिका ट्यूब से तंत्रिका शिखा कोशिकाओं की संस्कृति

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

मानव pluripotent से तंत्रिका शिखा पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के फीडर से मुक्त व्युत्पत्ति स्टेम सेल

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

तंत्रिका कोशिका प्रकार की सतह के लिए फ्लो प्रोटोकॉल और intracellular एंटीजन विश्लेषण

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

सेल वयस्क माउस subventricular क्षेत्र से तंत्रिका स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की छंटनी और उनके सेल चक्र गतिशीलता का लाइव-इमेजिंग

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के गणन क्लोनल assays का उपयोग

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Sialoglycan के मेटाबोलिक लेबलिंग द्वारा प्राथमिक तंत्रिका स्टेम और संतति कोशिकाओं के सेल सतह मार्करों की पहचान

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...