Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della Fondazione Overstreet.

1. Impostazione di base prima di procedere alla coltura cellulare <ol><li> NeuroCult Media NSC basale e NeuroCult NSC supplementi proliferazione vengono miscelati con un rapporto 9:1, rispettivamente, per rendere completo supporto NSC. </li><li> A 37 ° C bagno di acqua viene utilizzata per riscaldare il mezzo. </li><li> Giusta quantità di calore inattivato siero fetale bovino (FCS) è stato scongelato. </li><li> Quantità appropriata di soluzioni crescita fotografici fattore compreso il fattore di crescita epidermic...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

La capacità di isolare definite popolazioni di cellule nervose (neuroni cioè, astrociti e oligodendrociti) potrebbe risolvere alcuni degli impedimenti connessi con l&#39;applicazione clinica delle cellule staminali neurali (NSC). In primo luogo, ci permette di caratterizzare completamente la popolazione di partenza di cellule del donatore. In secondo luogo, permette di utilizzare un particolare tipo di cellula o una combinazione di tipi di cellule diversi con un rapporto specifico, a seconda della natura o stadio dell...

<table border="1"><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Tipo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC medio basale </td><td> Medio </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC proliferazione Integratori </td><td> Supplemento media </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> 0,05% di tripsina-EDTA </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Inibitore della tripsina di soia </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> HEM componente </td></tr><tr><td> * I HEPES </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> HEM componente </td></tr><tr><td> * Acqua distillata </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Cella filtro </td><td> Setaccio </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 pallone </td><td> Cultura ware </td><td> Nalge Nunc internazionale </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 pallone </td><td> Cultura ware </td><td> Nalge Nunc internazionale </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml provette </td><td> Cultura ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml provette </td><td> Cultura ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Fattore di crescita </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Fattore di crescita </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Eparina </td><td> Fattore di crescita </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Ricostituita in PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Anticorpo </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-coniugata del mouse IgG1 </td><td> Isotype controllo dell&#39;anticorpo </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Eparina </td><td> Fattore di crescita </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Ricostituita in PBS </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Fattore di crescita </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-OrnitHine </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Di siero di vitello fetale </td><td> Supplemento media </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Anticorpo </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubulina </td><td> Anticorpo </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * Per fare HEM, mix 1 x 10 L pacchetto di MEM e 160 ml di HEPES 1M e portare il volume a 8,75 L con acqua distillata. Impostare il pH finale di 7,4 e conservarlo a 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Le cellule staminali neuronali (NSC) possono essere isolate ed espanse in larga scala, utilizzando il saggio neurosfere e differenziato in tre tipi principali di cellule del sistema nervoso centrale (CNS); vale a dire, astrociti, oligodendrociti e neuroni. Queste caratteristiche rendono staminali neurali e cellule progenitrici una preziosa fonte rinnovabile di cellule per studi in vitro, come lo screening di stupefacenti, neurotossicologia ed elettrofisiologia ed anche per la terapia di sostituzione cellulare in molte malattie neurologiche. In pratica, tuttavia, l&#39;eterogeneità della progenie NSC, bassa produzione di neuroni e oligodendrociti, e il predominio di astrociti seguenti differenziazione limitare le loro applicazioni cliniche. Qui, descriviamo una metodologia innovativa per la purificazione e la successiva generazione dei neuroni immaturi di topo nati da NSC con fluorescenza selezione delle cellule attivate (FACS), la tecnologia. Usando questa metodologia, altamente arricchito neuronale popolazione di cellule progenitrici può essere realizzato spiritoHout qualsiasi astrociti evidente e bona fide contaminazione NSC. La procedura prevede differenziazione di progenie NSC isolate ed espanse da E14 eminenze gangliari topo con il test neurosfere, seguito da isolamento e arricchimento delle cellule neuronali immature base alle loro proprietà fisiche (dimensioni e complessità interna) e fluorescente citometria di flusso tecnologia. Nel complesso, ci vogliono 5-7 giorni per generare neurosfere e 6-8 giorni per differenziare progenie NSC altamente purificato e isolare cellule neuronali immature.

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Questo protocollo video viene illustrato un nuovo metodo per la generazione e la successiva purificazione delle cellule progenitrici neuronali da una fonte rinnovabile di cellule staminali neuronali (NSC) sulla base della loro fisico (granularità e dimensione interna) e proprietà di fluorescenza usando citometria di flusso tecnologia.

Il saggio neuroblasti: un test per la generazione e arricchimento delle cellule progenitrici neuronali di differenziare i Progeny cellule staminali neurali in citometria a flusso

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolamento ed espansione della cellule staminali neurali del mouse utilizzando il saggio neurosfere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Ricerca

Neuroscienze

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Stabilire embrionali di topo Neural Stem Cell Culture del saggio di neurosfere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-formanti colonia saggio Cell: un test per discriminare Bona Fide cellule staminali neurali da cellule progenitrici neurali

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

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Live-cellula Imaging di cellule sensoriali Precursore in Organo intatto Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

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Isolamento e la coltura delle cellule della cresta neurale da Embryonic Murine tubo neurale

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Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Citometria a flusso Protocolli per superficie e intracellulare Antigen analisi di tipi di cellule neurali

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Ordinamento delle cellule staminali neurali e di cellule progenitrici del topo adulto subventricolare Zone e Live-imaging loro dinamiche del ciclo cellulare

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

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Conteggio di cellule staminali neurali L&#39;utilizzo clonali Assays

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Identificazione dei marcatori di superficie cellulare delle cellule staminali primarie e delle cellule progenitrici mediante l'etichettatura metabolica di Sialoglycan

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