Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
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この作品は、オーバストリート財団からの資金によってサポートされていました。

1。基本は、細胞培養に進む前に設定<ol><li> NeuroCult NSC基礎培地とNeuroCult NSC増殖サプリメントは、完全なNSC培地を作るために、それぞれ、9:1の割合で混合されています。 </li><li> 37°Cの水浴は、培地を温めるために使用されます。 </li><li>熱不活性化ウシ胎児血清（FCS）の適切な量を解凍しています。 </li><li>上皮成長因子（10μg/ mlのEGF）、リン酸塩の基本的な線維芽細胞成長因子（β-FGF 10μg/ ml...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

定義されている神経細胞集団を分離する能力（すなわち、ニューロン、アストロサイトとオリゴデンドロサイト）は、神経幹細胞の臨床応用（NSCの）に関連付けられている障害のいくつかを解決するかもしれません。まず最初に、それは完全にドナー細胞の出発人口を特徴付けるために私達が可能になります。第二に、私たちは病気の性質や段階に応じて、特定の比率で特定の細胞型または?...

<table border="1"><tr><td> 試薬の名前 </td><td> タイプ </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC基礎培地</td><td>培地</td><td>セル技術を幹</td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC増殖サプリメント</td><td>培地サプリメント</td><td>セル技術を幹</td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> 0.05％トリプシン-EDTA </td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td>ダイズトリプシン阻害因子</td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td>ペン/連鎖球菌</td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 41500-018 </td><td> HEMコンポーネント</td></tr><tr><td> * HEPES </td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> H4034 </td><td> HEMコンポーネント</td></tr><tr><td> *蒸留水</td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー</td><td>ふるい</td><td> BDファルコン</td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25フラスコ</td><td>文化ウェア</td><td> Nalge Nunc社国際</td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80フラスコ</td><td>文化ウェア</td><td> Nalge Nunc社国際</td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 mlチューブ</td><td>文化ウェア</td><td> BDファルコン</td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50mlチューブ</td><td>文化ウェア</td><td> BDファルコン</td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td>成長因子</td><td>研究開発</td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> B-FGF </td><td>成長因子</td><td>研究開発</td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>成長因子</td><td>シグマ</td><td> H4784 </td><td> PBSで再構成</td></tr><tr><td>抗PSA-NCAM-PE </td><td>抗体</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-共役マウスIgG1を</td><td>アイソタイプコントロール抗体</td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>成長因子</td><td>シグマ</td><td> H4784 </td><td> PBSで再構成</td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td>成長因子</td><td>研究開発</td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td>ポリ-L-Ornitハイン</td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>培地サプリメント</td><td>ギブコ</td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td>抗体</td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-IIIチューブリン</td><td>抗体</td><td>プロメガ</td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * HEM、ミックスMEMの1×10 Lパケットと1M HEPESの160ミリリットルを加え、蒸留水を用いて8.75 Lにボリュームをもたらす。 7.4の最終pHを設定し、4℃で保管して

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

すなわち、アストロサイト、オリゴデンドロサイトとニューロン、神経幹細胞（NSCの）神経球アッセイを用いて、中枢神経系（CNS）の三つの主要な細胞型に分化し、大規模で分離し、拡張することができます。これらの特性は、神経幹細胞や前駆細胞などの創薬スクリーニング、神経毒性および電気生理学などのin vitro試験で 、また多くの神経疾患の細胞補充療法のためのセルの貴重な再生可能エネルギー源を作る。しかし、実際には、NSCの子孫の不均一性、ニューロンおよびオリゴデンドロサイトの低生産、分化、その臨床応用を制限するには、次のアストロサイトの優位性。ここでは、蛍光活性化セルソーティング（FACS）技術を使用してマウスNSCの子孫からの未熟な神経細胞の生成とその後の精製のための新規方法論を記述します。この方法を使用して、高度に濃縮された神経前駆細胞集団は、ウィットを達成することができます任意の顕著な星状膠細胞と善意のNSC汚染ホウトベイ。手順は、NSCの子孫を単離し、フローサイトメトリー技術を使用して、その物理的（サイズと内部の複雑さ）と蛍光特性に基づいて、未熟な神経細胞の分離と濃縮に続いて神経球アッセイを使用してE14マウス神経節隆起から、拡大の分化が含まれています。全体的には、NSCの子孫を区別し、非常に未熟な神経細胞を精製単離するための神経と6-8日を生成するために5-7日かかる。

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

このビデオプロトコルは、神経幹細胞（NSC）の物理的（サイズと内部の細かさ）に基づいて、フローサイトメトリー技術を用いた蛍光特性の再生可能エネルギー源から神経前駆細胞の生成とその後の精製のための新しい方法を示します。

神経芽細胞アッセイ：フローサイトメトリーを用いて神経幹細胞の子孫を差別から神経前駆細胞の生成と濃縮のためのアッセイ

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを使用して成体マウス神経幹細胞の単離と拡大

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを使用してマウス胎児神経幹細胞培養の確立

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

神経コロニー形成細胞アッセイ：神経前駆細胞から善意の神経幹細胞を区別するアッセイ

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

ヒト多能性幹細胞からの神経堤前駆細胞のフィーダーフリー導出

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

神経細胞型の表面のためのフローサイトメトリーのプロトコルおよび細胞内抗原解析

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

セル成体マウス脳室下帯から神経幹細胞および前駆細胞の選別とその細胞周期ダイナミクスのライブイメージング

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

クローンのアッセイを用いて神経幹細胞の列挙

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

シアログリカンの代謝標識による原発神経幹および前駆細胞の細胞表面マーカーの同定

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...