Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
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1. Basic은 세포 배양을하기 전에 설정 <ol><li> NeuroCult NSC 자연적으로 흐르는 것과, 반사적으로 흐르는 중간 및 NeuroCult NSC 확산 보충제는 전체 NSC 매체를 만들기 위해, 각각 9시 1분 비율로 섞여있다. </li><li> 37 ° C의 물 목욕은 매체를 워밍업하는 데 사용됩니다. </li><li> 더위 inactivated 소태아 혈청 (FCS)의 적절한 금액은 해동됩니다. </li><li> 표피 성장 인자 (10 μg / ML에서 EGF), 기본 fibroblastic 성장 인자 (1...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

정의된 신경 세포 인구를 분리하는 기능 (즉, 뉴런, astrocytes와 oligodendrocytes)은 신경 줄기 세포의 임상 응용 (NSCs)와 관련된 방해물의 일부를 해결할 수 있습니다. 첫째, 완전히 기증자 세포의 시작 인구 특성을 우리에게 있습니다. 둘째, 우리가 질병의 특성이나 무대 상황에 따라 특정 비율로 특정 세포 유형 또는 다른 세포 유형의 조합을 사용할 수 있습니다. 마지막으로, 매우 풍부한 사전 차별화?...

<table border="1"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 유형 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC 자연적으로 흐르는 것과, 반사적으로 흐르는 중간 </td><td> 매질 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 05,700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC 확산 보조 </td><td> 중간 보충 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 05,701 </td><td></td></tr><tr><td> 0.05 % 트립신-EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 시약 </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 대두 트립신 억제제 </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> 펜 / Strep </td><td> 시약 </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> 시약 </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> 앙 구성 요소 </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> H4034 </td><td> 앙 구성 요소 </td></tr><tr><td> * 증류수 </td><td> 시약 </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> 셀 스트레이너 </td><td> 체 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 플라스크 </td><td> 문화 도자기 </td><td> Nalge Nunc 인터내셔널 </td><td> 136,196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 플라스크 </td><td> 문화 도자기 </td><td> Nalge Nunc 인터내셔널 </td><td> 178,905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ML 튜브 </td><td> 문화 도자기 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ML 튜브 </td><td> 문화 도자기 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> 성장 인자 </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> B-FGF </td><td> 성장 인자 </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 성장 인자 </td><td> 시그마 </td><td> H4784 </td><td> PBS로 재구성 </td></tr><tr><td> 안티 - PSA-NCAM-PE </td><td> 항독소 </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-복합 마우스 IgG1 </td><td> Isotype 제어 항체 </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556,029 </td><td></td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 성장 인자 </td><td> 시그마 </td><td> H4784 </td><td> PBS로 재구성 </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> 성장 인자 </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> 폴리-L-Ornithine </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> 소태아 세럼 </td><td> 중간 보충 </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> 항독소 </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III의 tubulin </td><td> 항독소 </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * 앙, 믹스 1 X MEM 10 패 패킷 및 1M HEPES 160 ML을하고 증류수를 사용하여 8.75 L로 볼륨을 이끌 것이다. 7.4로 최종 PH를 설정 및 4 ° C.에 보관

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

신경 줄기 세포 (NSCs)에 격리하고 확장 가능한 대규모 neurosphere 분석을 사용하고 중추 신경계 (CNS)의 세 가지 주요 세포 유형으로 차별, 즉, astrocytes, oligodendrocytes과 뉴런. 이러한 특성은 신경 줄기 및 전구 세포와 같은 약물 검사, neurotoxicology 및 전기 생리학 등의 체외 연구와 또한 많은 신경 질환에서 세포 대체 요법에 대한 대한 세포의 귀중한 재생 소스를 확인합니다. 그러나 실제로 NSC의 자손, 뉴런과 oligodendrocytes의 낮은 생산, 차별화 자신의 임상 응용 프로그램을 제한하는 다음과 같은 astrocytes의 우위의 이질. 여기서는 형광 활성 세포 정렬 (FACS) 기술을 이용한 murine NSC의 자손에서 미숙 뉴런의 생성 및 그 이후의 정화를위한 소설 방법론을 설명합니다. 이 방법론을 사용하여, 매우 풍부의 연결 전구 세포 인구는 지혜를 얻을 수어떠한 눈에 띄는 astrocyte와 타고난 NSC 오염을 슬프게도 인류. 절차는 NSC의 자손 격리 및 유동세포계측법 기술을 사용하여 물리적 (크기 및 내부 복잡성) 및 형광 특성을 바탕으로 미숙의 연결을 세포의 분리와 농축 다음 neurosphere 분석을 사용하여 E14 마우스 ganglionic eminences에서 확장의 분화를 포함합니다. 전반적으로, 그것은 NSC의 자손을 차별화하는 데 neurospheres 및 6~8일를 생성하는 5~7일 걸리며 매우 미숙의 연결 세포를 정화 분리.

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

이 비디오 프로토콜 유동세포계측법 기술을 사용하여 물리적 (크기 및 내부 단위) 및 형광 특성을 바탕으로 신경 줄기 세포의 재생 소스 (NSCs)에서의 연결 전구 세포의 생성과 이후의 정화를위한 소설 방법을 보여줍니다.

Neuroblast 분석 : 유동세포계측법을 사용하여 차별화 신경 줄기 세포에서 자손의 연결 전구 세포의 생성과 강화에 대한 분석

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

절연 및 Neurosphere 어세를 사용하여 성인 마우스 신경 줄기 세포의 확장

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

연구

신경과학

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

세포 어세를 형성 신경 콜로니 : 신경 전구 세포로부터 타고난 신경 줄기 세포를 차별 어세이

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

손상의 감각 오르간 전구체 세포 라이브 셀 이미징 Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

인간 다 능성에서 신경 능선 세포의 전구 세포의 공급이없는 유도는 줄기 세포

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

신경 세포 유형의 표면에 대한 유동 세포 계측법 프로토콜 및 세포 내 항원 분석

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

셀 성인 마우스 뇌실 영역에서 신경 줄기 및 전구 세포의 정렬과 세포주기 역학의 라이브 이미징

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

신경 줄기 세포의 열거 클론 세이를 이용하여

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Sialoglycan의 신진 대사 표지에 의하여 1 차적인 신경 줄기 및 전구 세포의 세포 표면 마커를 확인

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...