Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

Эта работа была поддержана финансирование от Фонда Overstreet.

1. Основная настройка Прежде чем приступить к культуре клеток <ol><li> NeuroCult НСК базальной среды и NeuroCult НСК распространения добавки смешиваются в соотношении 9:1, соответственно, сделать полный среднего НСК. </li><li> 37 ° С водяной бане используется для разогрева среды. </li><li> Соответствующее ко...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

Возможность изолировать определенный нейронных клеточных популяций (например, нейроны, астроциты и олигодендроциты) может решить некоторые из препятствий, связанных с клиническим применением нервные стволовые клетки (НСК). Во-первых, она позволяет нам в полной мере характеризуют нач?...

<table border="1"><tr><td> Название реагента </td><td> Тип </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> NeuroCult НСК базальной среды </td><td> Среда </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult НСК распространения добавки </td><td> Средняя добавка </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.05 трипсин-ЭДТА </td><td> Реагент </td><td> Гибко </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Ингибитор трипсина сои </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Реагент </td><td> Гибко </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Реагент </td><td> Гибко </td><td> 41500-018 </td><td> HEM компонент </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> H4034 </td><td> HEM компонент </td></tr><tr><td> * Вода дистиллированная </td><td> Реагент </td><td> Гибко </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Сотовые фильтр </td><td> Решето </td><td> BD Сокол </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 колбу </td><td> Культура изделия </td><td> Nalge Nunc международных </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 колбу </td><td> Культура изделия </td><td> Nalge Nunc международных </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 мл труб </td><td> Культура изделия </td><td> BD Сокол </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 мл пробирки </td><td> Культура изделия </td><td> BD Сокол </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> ЭФР </td><td> Фактор роста </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> б-FGF </td><td> Фактор роста </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Гепарин </td><td> Фактор роста </td><td> Сигма </td><td> H4784 </td><td> Восстановленная в PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Антитело </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-сопряженных мыши IgG1 </td><td> Изотип контроль антител </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Гепарин </td><td> Фактор роста </td><td> Сигма </td><td> H4784 </td><td> Восстановленная в PBS </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Фактор роста </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-OrnitХайн </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> Средний Дополнение </td><td> Гибко </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Антитело </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III тубулина </td><td> Антитело </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * Для того, чтобы HEM, смешайте 1 х 10 л пакет MEM и 160 мл 1М HEPES и довести объем до 8,75 л дистиллированной воды. Установить окончательный PH 7,4 и хранить его при температуре 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Нервные стволовые клетки (НСК) могут быть выделены и расширен в больших масштабах, используя neurosphere анализа и дифференцированы на три основных типа клеток центральной нервной системы (ЦНС), а именно астроциты, олигодендроциты и нейроны. Эти характеристики делают нейронных стволовых и прогениторных клеток бесценный возобновляемый источник клеток для лабораторного исследования, такие как наркотики, Нейротоксикология и электрофизиологии, а также для мобильных заместительной терапии при многих неврологических заболеваний. На практике, однако, неоднородность НСК потомство, низкое производство нейронов и олигодендроцитов и астроцитов преобладание после дифференциации ограничить их клинического применения. Здесь мы описываем новую методологию для создания и последующей очистки незрелых нейронов с мышиным потомством НСК активировать с помощью флуоресцентной сортировки клеток (FACS) технологии. Используя эту методологию, обогащенного нейронные популяции клеток-предшественников может быть достигнут умомHout заметного астроцитов и добросовестных загрязнения НСК. Процедура включает в себя дифференциацию НСК потомство изолированы и расширен с E14 мыши ганглиозные возвышения использованием neurosphere анализа, с последующим выделением и обогащение незрелых нервных клеток в зависимости от их физических (размер и внутреннюю сложность) и флуоресцентные свойства с помощью технологии проточной цитометрии. В целом, это занимает 5-7 дней для получения нейросферы и 6-8 дней, чтобы дифференцировать НСК потомство и изоляции высокоочищенных незрелых нервных клеток.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Это видео демонстрирует протокол новый метод генерации и последующей очистки нейронных клеток-предшественников из возобновляемых источников нервные стволовые клетки (НСК) на основе их физических (размер и внутренней детализации) и флуоресцентные свойства с помощью технологии проточной цитометрии.

Нейробластов Анализ: Анализ для создания и обогащения нейронов клетки-предшественники из Дифференцируя нейронных потомков стволовых клеток методом проточной цитометрии

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Выделение и расширение взрослой мыши нервные стволовые клетки Использование Neurosphere Пробирной

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Создание эмбриональных Мышь нейронные культуры стволовых клеток Использование Neurosphere Пробирной

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-колония Формирование анализа клеточной: Пробирной различать Добросовестный нервные стволовые клетки из нервных клеток-предшественников

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-ячейки изображения сенсорных клеток-предшественников органов в интактных Drosophila Куколки

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Выделение и культуры клеток нервного гребня из эмбриональных мышей нервной трубки

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Ф-бесплатно Вывод нервного гребня клеток-предшественников из человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Проточной цитометрии протоколы для поверхностных и внутриклеточных антиген анализ нейронных типов клеток

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Сотовый Сортировка нейронных стволовых и прогениторных клеток из взрослых мышей субвентрикулярной зоны и Live-визуализация клеточного цикла динамика

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Перечень нервных стволовых клеток, с помощью клоновых Assays

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Определение клеточных поверхностных маркеров первичных нейронных стволовых и клеток-прародителей путем метаболической маркировки сиалогликан

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...