Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

Detta arbete stöddes genom finansiering från Overstreet Foundation.

1. Grundläggande Konfigurera innan du fortsätter to Cell Culture <ol><li> NeuroCult NSC Basal Medium och NeuroCult NSC Prolifereringssvar Supplements blandas vid ett 9:1-förhållande, respektive, för att göra fullständig NSC-medium. </li><li> En 37 ° C vattenbad användes för att värma upp mediet. </li><li> Lämplig mängd värme inaktiverat fetalt kalvserum (FCS) tinas. </li><li> Lämplig mängd av faktor stock tillväxtlösningar inkluderande epidermal tillväxtfaktor (EGF vid 10 | ig / ml), basisk fibrobla...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

Förmågan att isolera definierade neurala cellpopulationer (dvs neuroner, astrocyter och oligodendrocyter) kan lösa vissa av de hinder som är förknippade med den kliniska tillämpningen av neurala stamceller (NSC). För det första kan det för oss att fullständigt karaktärisera utgångspopulation av givarceller. För det andra möjliggör för oss att använda en speciell celltyp eller en kombination av olika celltyper med ett specifikt förhållande, beroende på naturen eller stadium av sjukdomen. Slutligen kan...

<table border="1"><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Typ </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Basal Medium </td><td> Medium </td><td> Härrör Cell Technologies </td><td> 05.700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Prolifereringssvar Kosttillskott </td><td> Mediumsupplement </td><td> Härrör Cell Technologies </td><td> 05.701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0,05 trypsin-EDTA </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Sojaböntrypsininhibitor </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> HEM komponent </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> HEM komponent </td></tr><tr><td> * Destillerat vatten </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Cellfilter </td><td> Såll </td><td> BD Falcon </td><td> 352.340 </td><td></td></tr><tr><td> T25-kolv </td><td> Kultur ware </td><td> Nalge Nunc International </td><td> 136.196 </td><td></td></tr><tr><td> T80-kolv </td><td> Kultur ware </td><td> Nalge Nunc International </td><td> 178.905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml rör </td><td> Kultur ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352.096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml rör </td><td> Kultur ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352.070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Tillväxtfaktor </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Tillväxtfaktor </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Tillväxtfaktor </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Rekonstituerades i PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Antikropp </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-konjugerat mus lgG1 </td><td> Isotypkontroll-antikropp </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556.029 </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Tillväxtfaktor </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Rekonstituerades i PBS </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Tillväxtfaktor </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-fågelskåHine </td><td> Reagens </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Fetalt kalvserum </td><td> Mediumsupplement </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Antikropp </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-lll tubulin </td><td> Antikropp </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * För att göra HEM, blanda 1 x 10 L paket MEM och 160 ml 1 M HEPES och justera volymen till 8,75 L med användning av destillerat vatten. Ställa det slutliga pH till 7,4 och förvaras vid 4 ° C.

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Neurala stamceller (NSC) kan isoleras och expanderas i stor skala, med användning av neurosfären analysen och differentieras till de tre huvudsakliga celltyperna i det centrala nervsystemet (CNS); nämligen, astrocyter, oligodendrocyter och neuroner. Dessa egenskaper gör neurala stam-och progenitorceller en ovärderlig förnybar celler för in vitro-studier som drog screening, neurotoxikologi och elektrofysiologi och också för cell substitutionsterapi hos många neurologiska sjukdomar. I praktiken har dock heterogenitet NSC avkomma, låg produktion av nervceller och oligodendrocyter och dominans astrocyter efter differentiering begränsa deras kliniska tillämpningar. Här beskriver vi en ny metod för generering och efterföljande rening av omogna nervceller från mus NSC avkommor med fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) teknik. Med denna metod kan en höganrikat neuronal stamceller population uppnås witHout någon märkbar astrocyt och bona fide NSC förorening. Förfarandet omfattar en differentiering av NSC avkommor isolerade och expanderat från E14 mus ganglieblockerande höjder med hjälp av neurosfären analysen, följt av isolering och anrikning av omogna nervceller baserat på deras fysiska (storlek och interna komplexitet) och fluorescerande egenskaper med hjälp av teknik flödescytometri. Sammantaget tar det 5-7 dagar att skapa neurosfärer och 6-8 dagar för att skilja NSC avkomma och isolera renat omogna nervceller.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Denna video protokoll visar en ny metod för generering och efterföljande rening av neuronala progenitorceller från en förnybar källa av neurala stamceller (NSC) baserat på deras fysikaliska (storlek och granularitet inre) och fluorescerande egenskaper med användning av tekniken flödescytometri.

Den Neuroblast Analys: En analys för generering och anrikning av neuronala progenitorceller från Skilja Neural Stem Cell Progeny med hjälp av flödescytometri

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering och utvidgning av den vuxna Mouse neurala stamceller Använda Neurosphere analys

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Etablera Embryonala Mus Neurala Kultur Stem Cell Använda Neurosphere analys

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-kolonibildande Cell-analys: en analys att diskriminera Bona Fide neuronala stamceller från neurala stamceller

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging av sensoriska celler orgel Precursor i intakt Drosophila Puppor

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder fria Härledning av neurallisten progenitorceller från Human pluripotenta stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Flödescytometri protokoll för Surface och intracellulära Antigen Analyser av neurala celltyper

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Cell Sortering av neurala stamceller och progenitorceller från vuxen mus subventrikulära zonen och Live-avbildning av sina cellcykeln Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Räkning av neurala stamceller Använda Klon Analyser

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Identifiera cell ytan markörer av primära neurala stamceller och stamceller genom metabolisk märkning av Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...