Name: the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

Bu çalışma Overstreet Vakfı&#39;nın fon tarafından desteklenmiştir.

1. Temel Hücre Kültürü ile Devam Etmeden Önce Kurma <ol><li> NeuroCult NSC Bazal Orta ve NeuroCult NSC Proliferation Takviyeler tam NSC orta yapmak için, sırası ile, 9:1 oranında karıştırılmaktadır. </li><li> Bir 37 ° C&#39;de su banyosu orta ısınması için kullanılır. </li><li> Isıyla inaktive fetal buzağı serumu (FCS), uygun miktarda çözdürüldü. </li><li> Epidermal büyüme faktörü (10 mcg / ml EGF), temel fibroblast büyüme faktörü (10 mcg / ml b-FGF) ve fosfat% 0.2 heparin solüsyo...

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

Tanımlanan sinir hücre popülasyonu izole yeteneği (yani nöron, astrositler ve oligodendrosit) nöral kök hücrelerin klinik uygulama (NSC&#39;lerde) ile ilişkili bazı engelleri çözebilir. İlk olarak, tamamen donör hücrelerinin başlangıç ​​nüfusu karakterize mümkün kılmaktadır. İkincisi, bizim hastalığın doğasına ve aşama bağlı olarak, belirli bir oranı ile, belirli bir hücre tipinde ya da farklı hücre tipleri bir kombinasyonunu kullanmak için olanak sağlar. Son olarak, zenginleşt...

<table border="1"><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Bazal Orta </td><td> Orta </td><td> Kök Hücre Teknolojileri </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Proliferation Takviyeler </td><td> Orta takviyesi </td><td> Kök Hücre Teknolojileri </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.05 tripsin-EDTA </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Soya tripsin inhibitörü </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> HEM bileşeni </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> HEM bileşeni </td></tr><tr><td> * Damıtılmış su </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre süzgeç </td><td> Elek </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 şişesi </td><td> Kültür ware </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 şişesi </td><td> Kültür ware </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml&#39;lik tüplere </td><td> Kültür ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml&#39;lik tüplere </td><td> Kültür ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> PBS içinde yeniden </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Antikor </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-Konjuge fare IgG1 </td><td> Izotip kontrolü antikoru </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> PBS içinde yeniden </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poli-L-OrnitHine </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Fötal Buzağı Serumu </td><td> Orta Supplement </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Antikor </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubulin </td><td> Antikor </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * HEM, mix 1 x MEM 10 L paket ve 1M HEPES 160 ml yapmak ve distile su kullanılarak 8.75 L ses getirmek için. 7.4 &#39;e ayarlanır ve nihai PH 4 ° C&#39;de depolamak

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Nöral kök hücreler (NSC&#39;lerde) izole ve genişletilebilir büyük ölçekli, neurosphere testi kullanılarak ve merkezi sinir sistemi (MSS) üç ana hücre tiplerine diferansiye; yani, astrositler, oligodendrosit ve nöronlar. Bu özellikler nöral kök ve progenitör hücreler, uyuşturucu taraması, neurotoxicology ve elektrofizyoloji gibi in vitro çalışmalar ve birçok nörolojik hastalıklarda hücre replasman tedavisi için kullanılması için hücre paha biçilmez bir yenilenebilir kaynak haline getiriyor. Ancak pratikte, MGK döl, nöronlar ve oligodendrosit düşük üretim ve farklılaşma klinik uygulamaları sınırlamak takip astrositlerin baskın heterojen. Burada, floresans aktive hücre ayırma (FACS) teknolojisi kullanılarak mürin NSC soyu ile olgunlaşmamış nöronların kuşak ve sonraki temizleme için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemi kullanarak, zenginleştirilmiş nöronal progenitör hücre popülasyonu zekâ elde edilebilirherhangi bir fark astrosit ve iyi niyetli MGK kirlenme olduğu görüldü. Prosedürü MGK döl izole ve akım sitometri teknolojisini kullanarak fiziksel (boyut ve iç karmaşıklık) ve floresan özelliklerine göre olgunlaşmamış nöronal hücrelerin izolasyonu ve zenginleşmesi ile takip neurosphere testi kullanılarak E14 fare ganglionik tubera, genişletilmiş farklılaşma içerir. Genel olarak, MGK döl ayırt etmek neurospheres ve 6-8 gün üretmek için 5-7 gün sürer ve çok olgunlaşmamış nöronal hücrelerin saf izole.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC&#39;lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Sinir Hücresi Tipleri Yüzey Akış Sitometri Protokolleri ve Hücre içi Antijen Analizleri

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Primer Nöral Kök ve Progenitor Hücrelerinin Hücre Yüzey Belirteçlerinin Sialoglycan'ın Metabolik Etiketlemesi ile Belirlenmesi

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...