Name: mouse sperm cryopreservation and recovery using the i&middot;cryo kit
Uploaded: 2011-12-12T12:00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃ‚Â·Cryo Kit at JoVE.com

وقد دعمت البحوث المقدمة هنا من قبل نهر تشارلز. الكتاب في غاية الامتنان للنماذج المهندسة وراثيا ومجموعة خدمات وموظفي الأجنة لرعاية الحيوان وحقن الهرمون.

1. الماوس الحيوانات المنوية الحفظ بالتبريد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل كل سطر لتكون cryopreserved ، وإعداد ما يلي قبل البداية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 جيدا طبق 4 - جيدا مع 240 لتر من اتفاق السلام الشامل طقم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 قش الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية على النحو التالي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط القش 0.25 مل إلى المحاقن 1 مل مع المكونات القطن الأقرب إلى المحقنة. في كل من القش ، وتحميل 8 سم (حوالي 160 ميكرولتر) متوسطة التلقيح الاصطناعي ، ثم 1 سم من الهواء. تسمية القش مع اسم الخط ليتم الحفاظ عليها. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن يكون LN 2 بعمق 15 سم مربع في الرغوة. إغلاق الغطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 الموت ببطء الفئران الذكور من كل سطر لتكون cryopreserved. وينبغي أن يكون بين الفئران من العمر 10 و 60 أسبوعا. إزالة epididymides two الذيلية مع الأسهر من كل الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع epididymides في المحتوية على اتفاق السلام الشامل أعدت مسبقا جيدا طبق 4 - جيدا (الخطوة 1.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تخفيضات في كل طولية 5-7 البربخ وبلطفالضغط على كل الأسهر لدفع الحيوانات المنوية خارج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يهز الخليط اتفاق السلام الشامل والبربخ باليد برفق في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق. هذا سيسمح الحيوانات المنوية تسبح بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قش أعدت سابقا ، نضح 5 ملم (حوالي 10 ميكرولتر) من نطفة ثم تعليق. 1 سم من الهواء </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذه العملية مع ما يصل الى ما مجموعه 15 القش. تحميل وختم القش في غضون 10 دقائق للبقاء على قيد الحياة أفضل الحيوانات المنوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرارة ختم كلا الجانبين من القش بعناية. وضع القش في علبة تجميد الحيوانات المنوية مع العمود الأول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق ماصة 1 مل تقديمها كجزء من مجموعة إلى علبة لتوسيع التعامل معها. ضع العلبة في LN 2 في المربع الرغوة من خلال ثقب في الغطاء. السماح بتعويم العلبة عموديا في LN 2 لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غمر العلبة في LN2. هو الآن cryopreserved الحيوانات المنوية ، ويمكن نقلها إلى التخزين الطويل الأجل 2 LN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا ينبغي أن تستخدم لاسطوانةالسطر التالي حتى يتم تسخين تصل إلى درجة حرارة الغرفة. </li></ol> 2. الماوس فرط الإباضة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عموما ، استخدام فئران شابة من خلفية نفس المانحين الحيوانات المنوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن تكون الفئران ~ 12 ز (3-4 اسابيع من العمر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحقن داخل الصفاق إجراء مع وحدة دولية من الحوامل 50-10 جونادوتروبين مصل الفرس (PMSG). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر 46-48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحقن داخل الصفاق إجراء مع وحدة دولية من 5-10 موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (HCG). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد البويضات 14-16 ساعة بعد الحقن قوات حرس السواحل الهايتية على النحو المبين أدناه. </li></ol> 3. الماوس الانتعاش الحيوانات المنوية والتلقيح الاصطناعي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التلقيح الاصطناعي ، لكل من القش لإذابة ، وإعداد ما يلي ويوازن ما لا يقل عن ساعة واحدة في حاضنة 37 2 درجة مئوية أكسيد الكربون. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق حضانة الحيوانات المنوية : واحدة طبق بيتري 35 ملم ، مع انخفاض متوسط ​​90 ميكرولتر من العلاج الحيوانات المنوية (STM) مغطاة بالنفط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الطبق : لجمع البويضة من الحد الأقصى من 10 ثانيةuperovulated الإناث ، واحدة طبق بيتري 35 ملم مع 3 مل من المتوسط ​​التلقيح الاصطناعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أطفال الأنابيب جيدا : للحصول على كل مجموعة من 5 اناث superovulated لأطفال الأنابيب ، واحدة جيدا طبق 4 جيدا مع 500 ميكرولتر من المتوسط ​​IVF (إذا كنت تستخدم 10 superovulated الإناث ، على سبيل المثال ، سوف تحتاج 2 الآبار...) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الأطباق : واحدة طبق بيتري 35 ملم مع 3 مل من البوتاسيوم المتوسط ​​البسيط الأمثل (KSOM) لغسل كل بئر من صحن IVF 4 - جيدا المستخدمة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطبق الثقافة : واحد 35 مم طبق بيتري مع 50 قطرات من ميكرولتر المتوسطة KSOM مغطاة بالنفط للثقافة الجنين من كل بئر من صحن التلقيح الاصطناعي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القش من مكان LN 2 و 37 درجة في حمام ماء C لمدة 2-3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القش من الحمام المائي ومسح لإزالة المياه الزائدة. جعل خفض الأولى بالقرب من عمود الجوية الأولى أقرب المكونات القطن. قطع القش في المدى المتوسط ​​ستكون هناك عمليات التلقيح الصناعي لا يزال عمود الهواء عمود مرئية قبل الحيوانات المنوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم قص نهاية القش في لياليecond الجوية العمود ، والحرص على تجنب قطع العمود الحيوانات المنوية. قطع بزاوية 45 -- وهذا سيجعل من الاسهل بكثير ان نضح الحيوانات المنوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح تعليق الحيوانات المنوية من نهاية القاصية من القش مع pipettor 200 ميكروليتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع تعليق الحيوانات المنوية في وسط انخفاض STM واحتضان الطبق عن 45-60 دقيقة في 37 ° C 5 ٪ CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال حضانة الحيوانات المنوية ، وتشريح ناقلة البيضات من الإناث superovulated في طبق القطع. استخدام إبرة ز 30 أو ملقط لتمزيق كل قناة البيض ، والإفراج عن المجمعات قزع - البويضة (COCs). وتجنب الدهون في الدم على المدى المتوسط ​​والتلقيح الاصطناعي وسائل الاعلام القذرة يجعل لاتخاذ خطوات اضافية الغسيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن تم تمزيق كل ناقلة البيضات ، ونقل COCs الإناث في الفترة من 5 إلى كل الآبار التلقيح الاصطناعي. عدد COCs التي تنتجها فرط الإباضة هي السلالة التي تعتمد جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الحيوانات المنوية من 10-15 ميكروليتر من هامش الانخفاض STM وتخصيبها one IVF جيدا ما يقرب من 14-16 ساعة بعد ينج قوات حرس السواحل الهايتيةection. كرر التسميد لاستخدامها بشكل جيد لكل منهما. وسوف يكون النهائي تركيز الحيوانات المنوية حوالي 1 مليون / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحيوانات المنوية والبويضات Coculture لمدة 4-6 ساعات في 37 درجة مئوية 5 ٪ CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الأجنة مع الحد الأدنى من 2 مرات والثقافة KSOM في قطرات KSOM للتنمية في 37 درجة مئوية 5 ٪ CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم احتساب معدل التلقيح الاصطناعي عن اثنين من الأجنة مرحلة الخلية من أصل مجموع البويضات بعد استخدام الثقافة بين عشية وضحاها. </li></ol> 4. ممثل النتائج تم تجميد الحيوانات المنوية من 5 سلالات نهر تشارلز الماوس الفطرية. وتحسب نسب الحماية من خلال تقسيم الحيوانات المنوية المجمدة تقييم القيم التي الطازجة القيم تقييم الحيوانات المنوية. وكانت نسب الحماية من الحيوانات المنوية على الحركة 60.2 ٪ ، 81.3 ٪ ، 78.6 ٪ ، 66.5 ٪ ، 61.0 ٪ للC57BL/6NCrl ، 129S2/SvPasCrl ، FVB / NCrl ، DBA/2NCrl وBALB / cAnNCrl ، على التوالي. وكانت نسب الحماية للحركية السريعة التقدمية 47.3 ٪ ، 69.4 ٪ ، 57.0 ٪ ، 52.8 ٪ ، 54.1 ٪ في C57BL/6NCrl ، 129S2/SvPas<html> CRL ، FVB / NCrl ، DBA/2NCrl وBALB / cAnNCrl على التوالي (الشكل 1). كانت معدلات التلقيح الاصطناعي مع مجمدة إذابة الحيوانات المنوية بنسبة 55.7 ٪ ، 26.4 ٪ ، 87.3 ٪ ، 87.8 ٪ و 26.2 ٪ في C57BL/6NCrl ، 129S2/SvPasCrl ، FVB / NCrl ، DBA/2NCrl وBALB / cAnNCrl على التوالي (الشكل رقم 2) . على مدى فترة 1.5 سنة ، وأرشفة 49 خطوط الماوس المعدلة وراثيا من قبل الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية. وكانت هذه الخطوط في وقت لاحق استعادت بنجاح (حسب تعريف الصغار يعيشون ولد) من خلال التلقيح الاصطناعي في 4 سلالات الإناث (C57BL / 6 ، BALB / ج ، ديسيبل / 1 و129Sv) (الشكل 3). <img alt="الشكل 1." src="/files/ftp_upload/3713/3713fig1.jpg" /> الشكل 1. نسب حماية الحيوانات المنوية على الحركة التقدمية والحركة السريعة في الفئران <img alt="الشكل 2." src="/files/ftp_upload/3713/3713fig2.jpg" /> الشكل 2. إخصاب في المختبر مع الحيوانات المنوية المجمدة ، المذوبة في الفئران 3713fig3.jpg &quot;/&gt; الشكل 3. التخصيب في المختبر مع مجمدة إذابة الحيوانات المنوية في الفئران المعدلة وراثيا

<ol>
	<li>Tada, N., Sato, M., Yamanoi, J., Mizorogi, T., Kasai, K., Ogawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+in+the+presence+of+raffinose+and+glycerol.">Cryopreservation of mouse spermatozoa in the presence of raffinose and glycerol.</a> J. Reprod. Fertil. 89, 511-516 (1990).</li><li>Yokoyama, M., Akiba, H., Katsuki, M., Nomura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+normal+young+following+transfer+of+mouse+embryos+obtained+by+in+vitro+fertilization+using+cryopreserved+spermatozoa.">Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization using cryopreserved spermatozoa.</a> Jikken Dobutsu. 39, 125-128 (1990).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Young, A. F., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+of+cryopreserved+mouse+spermatozoa+affected+by+temperature+of+collection+and+rate+of+thawing.">Motility of cryopreserved mouse spermatozoa affected by temperature of collection and rate of thawing.</a> Cryobiology. 35, 46-52 (1997).</li><li>Thornton, C. E., Brown, S. D., Glenister, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+numbers+of+mice+established+by+in+vitro+fertilization+with+cryopreserved+spermatozoa:+implications+and+applications+for+genetic+resource+banks,+mutagenesis+screens,+and+mouse+backcrosses.">Large numbers of mice established by in vitro fertilization with cryopreserved spermatozoa: implications and applications for genetic resource banks, mutagenesis screens, and mouse backcrosses.</a> Mamm. Genome. 10, 987-992 (1999).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fertilization+with+cryopreserved+inbred+mouse+sperm.">In vitro fertilization with cryopreserved inbred mouse sperm.</a> Biol. Reprod. 63, 1774-1780 (2000).</li><li>Liu, L., Nutter, L. M., Law, N., McKerlie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+freezing+and+in+vitro+fertilization+in+three+substrains+of+C57BL/6+mice.">Sperm freezing and in vitro fertilization in three substrains of C57BL/6 mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48, 39-43 (2009).</li><li>Nakagata, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+and+in+vitro+fertilization.">Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.</a> Methods. Mol. Biol. 693, 57-73 (2011).</li><li>Mazur, P., Koshimoto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+intracellular+ice+formation+the+cause+of+death+of+mouse+sperm+frozen+at+high+cooling+rates.">Is intracellular ice formation the cause of death of mouse sperm frozen at high cooling rates.</a> Biol. Reprod. 66, 1485-1490 (2002).</li><li>Jin, B., Yamasaki, C., Yamada, N., Seki, S., Valdez, D. M., Kasai, M., Edashige, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+by+which+mouse+spermatozoa+are+injured+during+freezing.">The mechanism by which mouse spermatozoa are injured during freezing.</a> J. Reprod. Dev. 54, 265-269 (2008).</li><li>Visconti, P. E., Westbrook, V. A., Chertihin, O., Demarco, I., Sleight, S., Diekman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+signaling+pathways+involved+in+sperm+acquisition+of+fertilizing+capacity.">Novel signaling pathways involved in sperm acquisition of fertilizing capacity.</a> J. Reprod. Immunol. 53, 133-150 (2002).</li><li>Ostermeier, G. C., Wiles, M. V., Farley, J. S., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserving,+distributing+and+managing+genetically+modified+mouse+lines+by+sperm+cryopreservation.">Conserving, distributing and managing genetically modified mouse lines by sperm cryopreservation.</a> PLoS ONE. 3, e2792-e2792 (2008).</li></ol>

الكتاب والعاملين في نهر تشارلز ، صانع هذه المجموعة.

منذ عام 1990 ، وقد ثبت تجميد الحيوانات المنوية باستخدام بروتوكول الأساسية رافينوز 18 ٪ و 3 ٪ الحليب الخالي من الدسم يمكن الاعتماد عليها في كثير من سلالات الفئران وجرى cryopreserved عدد كبير من خطوط الماوس 1،2،3،4،5،6،7. وقد ارتبطت الأسباب الرئيسية لتلف خلايا الحيوانات المنوية خلال عملية التجميد والذوبان مع تشكيل الجليد 8،9 و 10 أنواع الاكسجين التفاعلية. وقد تم التحقيق مع مكملات الزبالين الجذور الحرة ، مثل الأحماض الأمينية ، والحد من العوامل ، مثل monothioglycerol ، في المتوسط ​​، وتجميد ثبت أن زيادة كبيرة في معدل التلقيح الاصطناعي مع مجمدة إذابة الحيوانات المنوية في السلالات الفطرية بما في ذلك 6 / C57BL 11،6. في هذا البروتوكول ، وضعنا انا جديد • كرو عدة لحفظ بالبرودة الحيوانات المنوية الماوس عن طريق الاستفادة المثلى من اتفاقية السلام الشامل الأساسية مع المواد المضادة للاكسدة المتاحة تجاريا وحاصرات الجليد وعن طريق تعديل تجميد الحيوانات المنوية وإجراء عمليات التلقيح الصناعي. نسب الحماية من الحيوانات المنوية على الحركةشوهد (&gt; 60 ٪) والحركة التقدمية السريع (&gt; 45 ٪) لسلالات الحيوانات المنوية من خمس الماوس الفطرية المجمدة مع عدة أنا كرو •. وتحسنت بشكل ملحوظ في مرحلة الجنين 2 - الخلية معدل التنمية مع الحيوانات المنوية المجمدة ، المذوبة في سلالات الفأر 5 الفطرية مقارنة ذلك مع اتفاق السلام الشامل الأساسية 11،6. في استخدام عدة ، المستخدم بإنشاء تعليق الحيوانات المنوية التي تتركز في الفترة من 2 تجميد الحيوانات المنوية للذكور كل سطر. إلا بنسبة لا تتجاوز 15 قش تجميد عملية سريعة وسهلة وتشغل أقل مساحة التخزين لتخزين قصيرة أو طويلة الأجل. في معظم الأحيان ، يمكن استرداد الماوس عن طريق خطوط ذوبان فقط 1 أو 2 القش.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<th>
				Materials</th>
			<th>
				Supplier</th>
			<th>
				Catalogue number</th>
			<th>
				Comments</th>
		</tr>
		<tr>
			<td>CPA</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STM</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF medium</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 ml plastic straw</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sperm freezing canister</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cane and goblet</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5310</td>
			<td>Should be embryo tested</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KSOM medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MR-106-D</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351008</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat sealer</td>
			<td>ABTEC</td>
			<td>TISH-200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well multidish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>73521-424</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&deg;C + 5% CO2 incubator</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LN2 storage system</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&deg;C water bath</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89032-196</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hCG</td>
			<td>Intervet</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>EMDChemicals</td>
			<td>367222</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1cc syringe w/ 26G 3/8 needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD309625</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5602</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge &frac12; needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6802</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5135, RS-5110, RS-5005</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse sperm cryopreservation and recovery using the i&middot;cryo kit

وقد أنشئت الآلاف من السلالات الجديدة وراثيا (GM) من الفئران المعدلة منذ ظهور تكنولوجيات transgenesis وخروج المغلوب. العديد من هذه الحيوانات موجودة فقط في قيمة الحيوانات الحية ، مع عدم وجود خطة احتياطية في حال الطوارئ. الحفظ بالتبريد الأجنة يمكن أن توفر هذه النسخة الاحتياطية ، ولكن مكلفة ، يمكن أن تكون الإجراءات المطولة ، ويتطلب عادة عددا كبيرا من الحيوانات من أجل النجاح. منذ اكتشاف الحيوانات المنوية التي يمكن الماوس cryopreserved بنجاح مع وكيل واق من البرد الأساسية (CPA) ، ويتألف من 18 رافينوز ٪ و 3 ٪ الحليب الخالي من الدسم ، وأصبح الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية إجراء مقبولا وفعالا من حيث التكلفة لحفظها وتوزيعها واسترداد قيمة هذه السلالات . هنا علينا أن نظهر أنا وضعت حديثا مجموعة كرو • لحفظ بالبرودة الحيوانات المنوية الماوس. وتم تجميد الحيوانات المنوية من خمس سلالات شائعة الاستخدام من الفئران الفطرية باستخدام هذه المجموعة ، ثم تعافى. نسب أعلى للحماية من الحيوانات المنوية على الحركة (&gt;واعتبرت 60 ٪) والحركة التقدمية السريع (&gt; 45 ٪) بالمقارنة مع التحكم (الأساسية CPA) عن الحيوانات المنوية المجمدة مع هذه المجموعة في 5 السلالات الفطرية الماوس. وتحسنت اثنين الجنين مرحلة التطوير الخلية بعد التلقيح الاصطناعي مع الحيوانات المنوية المستردة باستمرار في جميع سلالات الفأر 5 فحصها. على مدى فترة 1.5 سنة ، وأرشفة 49 خطوط الماوس المعدلة وراثيا من قبل الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية مع عدة أنا • كرو واستردادها في وقت لاحق من خلال التلقيح الاصطناعي.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃ‚Â·Cryo Kit at JoVE.com

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

نحن هنا لشرح أنني وضعت حديثا مجموعة كرو • لحفظ بالبرودة الحيوانات المنوية الماوس. وتحسن اثنين من الخلية في مرحلة تطور الجنين مع مجمدة إذابة الحيوانات المنوية باستمرار في سلالات الفأر 5 مع استخدام هذا الطقم. على مدى فترة 1.5 سنة ، وأرشفة 49 خطوط الماوس المعدلة وراثيا عن طريق الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية مع عدة كرو • أنا في وقت لاحق واستعاد بنجاح من خلال التلقيح الاصطناعي.

الماوس حفظ بالبرودة والانتعاش الحيوانات المنوية باستخدام · لقد كرو كيت

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

تنقية DNA البلازميد من المستعمرات البكتيرية باستخدام Miniprep Qiagen كيت

Plasmid DNA purification from E. coli is a core technique for molecular cloning. Small scale purification (miniprep) from less than 5 ml of bacterial ...

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

المناعية : أقسام البارافين باستخدام ABC Vectastain مجموعة من مختبرات المتجهات

Immunohistochemistry (IHC) is a valuable technique utilized to localize/visualize protein expression in a mounted tissue section using specific ...

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

استخراج خلايا الحمض النووي الريبي من Neuroprecursor باستخدام بيو راد إجمالي RNA كيت

Rapid Genotyping of Mouse Tissue Using Sigma's Extract-N-Amp Tissue PCR Kit

التنميط الجيني السريع من الأنسجة باستخدام الماوس سيغما استخراج - N - PCR الأمبير الأنسجة كيت

Genomic detection of DNA via PCR amplification and detection on an electrophoretic gel is a standard way that the genotype of a tissue sample is ...

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

جمع والحفظ بالتبريد من البويضات والأجنة الهامستر ماوس

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

أسلوب الإنتاجية العالية للحصول على الحيوانات المنوية الحفظ بالتبريد واسماك الزرد في المختبر التسميد

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

باستخدام نظام التقطير GELFREE 8100 لتقطير الوزن الجزيئي وبناء مع مرحلة الانتعاش السائل

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

الحفظ بالتبريد من أجنة الفئران التي التزجيج جلايكول الإثيلين ، واستنادا

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

تقييم الحيوانات المنوية الأسماك باستخدام برامج وأجهزة التبريد

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...