Name: mouse sperm cryopreservation and recovery using the i&middot;cryo kit
Uploaded: 2011-12-12T12:00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃ‚Â·Cryo Kit at JoVE.com

המחקר המוצג כאן נתמכה על ידי צ&#39;ארלס ריבר. המחברים מודים ביותר של מודלים מהונדסים גנטית וקבוצת שירותים וצוות אמבריולוגיה לטיפול בבעלי חיים הזרקת ההורמון.

1. הזרע עכבר cryopreservation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל שורה להיות cryopreserved, להכין את הדברים הבאים לפני תחילת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 גם מנה 4-היטב עם l 240 של ערכת רו&quot;ח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 cryopreservation זרע בקש כדלקמן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את קשיות 0.25 מ&quot;ל ל 1 מזרקים מ&quot;ל עם פקק הכותנה הקרובים המזרק. ב קש כל העומס 8 ס&quot;מ (כ 160 μl) של המדיום IVF, אז 1 ס&quot;מ של אוויר. תווית קשיות עם השם של הקו להישמר. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> LN 2 צריך להיות 15 ס&quot;מ עמוק בתיבה קצף. סגור את המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים 2 עכברים זכרים מכל קו להיות cryopreserved. העכברים צריכים להיות בין 10 ל 60 שבועות. הסר את שני epididymides הזנב יחד עם הזרע הזרע של כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את epididymides לתוך מוכן בעבר רו&quot;ח המכילים גם מנה של 4 באר (שלב 1.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצץ אורך 5-7 ב יותרת האשך כל ובעדינותלסחוט כל הזרע הזרע כדי לדחוף את הזרע החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנער את התערובת רו&quot;ח יותרת האשך ביד בעדינות בטמפרטורת החדר למשך 3-5 דקות. זה יאפשר הזרע לשחות החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת קש מוכן קודם לכן, לשאוב 5 מ&quot;מ (כ 10 μl) ההשעיה הזרע ולאחר מכן 1 ס&quot;מ של אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה עם עד לסך של 15 קשיות. טען ולאטום קשיות בתוך 10 דקות להישרדות הזרע הטוב ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים חותם בשני הצדדים של הקשית בזהירות. מניחים את קשיות במכל הקפאת זרע עם הטור הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את פיפטה 1 מ&quot;ל המסופק כחלק של ערכת אל מיכל להאריך את הידית. מניחים את מיכל ב LN 2 בתיבה קצף דרך החור במכסה. אפשר את המכל לצוף אנכית ב LN 2 במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את המכל על LN2. הזרע הוא cryopreserved כעת ניתן להעביר את האחסון לטווח ארוך 2 LN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המכל לא אמור לשמש עבורלשורה הבאה עד שהוא מחומם לטמפרטורת החדר. </li></ol> 2. עכבר superovulation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדרך כלל, להשתמש נקבות עכברים צעירים בעלי רקע זהה תורמי זרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים צריך להיות ~ 12 גרם (3-4 שבועות של גיל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע זריקה intraperitoneal עם 5-10 IU של סוסה בהריון גונדוטרופין בסרום (PMSG). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן 46-48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע זריקה intraperitoneal עם 5-10 IU של גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביציות קציר 14-16 שעות לאחר ההזרקה hCG כמתואר להלן. </li></ol> 3. הזרע עכבר התאוששות IVF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני IVF, קש עבור כל צורך להפשיר, להכין את הבאים לאזן לפחות שעה אחת 37 ° C-CO 2 באינקובטור. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדגירה צלחת הזרע: האחת צלחת פטרי 35 מ&quot;מ, עם ירידה של 90 μl של המדיום זרע הטיפול (STM) מכוסה בשמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיתוך המנה: עבור אוסף הביצית מתוך מקסימום של 10 sהנקבות uperovulated, אחד 35 מ&quot;מ צלחת פטרי עם 3 מ&quot;ל של מדיום IVF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפריה חוץ גופית היטב: עבור כל קבוצה של 5 נשים superovulated עבור הפריה חוץ גופית, אחד טוב של תבשיל 4 היטב עם 500 μl של המדיום IVF (אם אתה משתמש ב 10 נקבות superovulated, למשל, תצטרך 2 בארות...) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כביסה צלחת: אחד צלחת פטרי 35 מ&quot;מ עם 3 מ&quot;ל של אשלגן סימפלקס בינוני אופטימיזציה (KSOM) לרחצה גם כל מנה 4-IVF היטב בשימוש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת תרבות: אחד 35 מ&quot;מ צלחת פטרי עם 50 טיפות של μl בינוני KSOM מכוסה שמן לתרבות עובר מבאר כל המנה IVF. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת קש מ LN 2 ומניחים אמבטיה 37 מעלות צלזיוס מים למשך 2-3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקש מן האמבט במים ולנגב כדי להסיר את עודפי המים. בצע את החיתוך הראשון קרוב בעמודה האווירית הראשונה הקרוב התקע כותנה. חותכים את קש במדיום IVF יש עדיין יהיה טור אוויר גלוי לפני הטור הזרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז לחתוך את קצה הקשית בשנות הטור econd האוויר, להיות זהיר, כדי למנוע קיצוץ טור הזרע. גזור בזווית של 45 - זה יעשה את זה הרבה יותר קל לשאוב את הזרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את ההשעיה זרע מהקצה הדיסטלי של קש עם pipettor 200 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את ההשעיה הזרע במרכז טיפת STM ו דגירה את המנה עבור 45-60 דקות 37 ° C 5% CO 2 באינקובטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הדגירה הזרע, לנתח את oviducts של הנקבות superovulated לתוך צלחת החיתוך. שימוש במחט 30 גרם או מלקחיים לקרוע כל oviduct, שחרור הביצית קומולוס-מתחמי (COCs). הימנע שומן ודם במדיום IVF כמזוהם התקשורת עושה צעדים כביסה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל oviducts היו קרועים, העברת COCs מתוך 5 נקבות לכל בארות IVF. מספר COCs המיוצר על ידי superovulation הוא זן מאוד תלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף 10-15 μl של זרע מהפריפריה הירידה STM ולדשן one IVF גם כ 14-16 שעות שלאחר inj hCGection. חזור על הפריה עבור כל שימוש היטב. ריכוז הזרע הסופי יהיה כ 1 מיליון / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coculture זרע וביציות של 4-6 שעות 37 ° C 5% CO 2 באינקובטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את העוברים עם מינימום של 2 פעמים KSOM ותרבות טיפות KSOM לפיתוח ב 37 ° C 5% CO 2 באינקובטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיעור IVF חושבה כמו שני עוברים שלב התא מתוך סה&quot;כ ביציות שימוש לאחר תרבות לילה. </li></ol> 4. נציג תוצאות זרע מ -5 זנים צ&#39;ארלס ריבר עכבר מולדת היה קפוא. יחסי להגנת הם מחושב על ידי חלוקת קפואים הערכה ערכים זרע ידי ערכים הערכה זרע טרי. יחסי הגנה על תנועתיות הזרע היו 60.2%, 81.3%, 78.6%, 66.5%, 61.0% עבור C57BL/6NCrl, 129S2/SvPasCrl, FVB / NCrl, DBA/2NCrl ו BALB / cAnNCrl, בהתאמה. יחסי הגנה תנועתיות פרוגרסיבית מהיר היו 47.3%, 69.4%, 57.0%, 52.8%, 54.1% ב C57BL/6NCrl, 129S2/SvPas<html> CRL, FVB / NCrl, DBA/2NCrl ו BALB / cAnNCrl, בהתאמה (איור 1). שיעורי הפריה חוץ גופית עם זרע קפוא מופשר היו 55.7%, 26.4%, 87.3%, 87.8% ו 26.2% ב C57BL/6NCrl, 129S2/SvPasCrl, FVB / NCrl, DBA/2NCrl ו BALB / cAnNCrl, בהתאמה (איור 2) . במשך 1.5 שנים, 49 קווי GM עכבר היו בארכיון cryopreservation על ידי הזרע. קווים אלה היו לאחר מכן התאושש בהצלחה (כפי שהוגדר על ידי חיים גורי נולד) על ידי הפריה חוץ גופית ב 4 זנים נקביים (C57BL / 6, BALB / C, DBA / 1 ו 129Sv) (איור 3). <img alt="באיור 1." src="/files/ftp_upload/3713/3713fig1.jpg" /> באיור 1. יחסי הגנה על תנועתיות הזרע ואת תנועתיות פרוגרסיבית מהיר ב עכברים <img alt="באיור 2." src="/files/ftp_upload/3713/3713fig2.jpg" /> 2. איור הפריה חוץ גופית עם זרע קפוא, מופשר של עכברים 3713fig3.jpg &quot;/&gt; באיור 3. הפריה חוץ גופית עם זרע קפוא, מופשר ב עכברים GM

<ol>
	<li>Tada, N., Sato, M., Yamanoi, J., Mizorogi, T., Kasai, K., Ogawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+in+the+presence+of+raffinose+and+glycerol.">Cryopreservation of mouse spermatozoa in the presence of raffinose and glycerol.</a> J. Reprod. Fertil. 89, 511-516 (1990).</li><li>Yokoyama, M., Akiba, H., Katsuki, M., Nomura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+normal+young+following+transfer+of+mouse+embryos+obtained+by+in+vitro+fertilization+using+cryopreserved+spermatozoa.">Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization using cryopreserved spermatozoa.</a> Jikken Dobutsu. 39, 125-128 (1990).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Young, A. F., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+of+cryopreserved+mouse+spermatozoa+affected+by+temperature+of+collection+and+rate+of+thawing.">Motility of cryopreserved mouse spermatozoa affected by temperature of collection and rate of thawing.</a> Cryobiology. 35, 46-52 (1997).</li><li>Thornton, C. E., Brown, S. D., Glenister, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+numbers+of+mice+established+by+in+vitro+fertilization+with+cryopreserved+spermatozoa:+implications+and+applications+for+genetic+resource+banks,+mutagenesis+screens,+and+mouse+backcrosses.">Large numbers of mice established by in vitro fertilization with cryopreserved spermatozoa: implications and applications for genetic resource banks, mutagenesis screens, and mouse backcrosses.</a> Mamm. Genome. 10, 987-992 (1999).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fertilization+with+cryopreserved+inbred+mouse+sperm.">In vitro fertilization with cryopreserved inbred mouse sperm.</a> Biol. Reprod. 63, 1774-1780 (2000).</li><li>Liu, L., Nutter, L. M., Law, N., McKerlie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+freezing+and+in+vitro+fertilization+in+three+substrains+of+C57BL/6+mice.">Sperm freezing and in vitro fertilization in three substrains of C57BL/6 mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48, 39-43 (2009).</li><li>Nakagata, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+and+in+vitro+fertilization.">Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.</a> Methods. Mol. Biol. 693, 57-73 (2011).</li><li>Mazur, P., Koshimoto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+intracellular+ice+formation+the+cause+of+death+of+mouse+sperm+frozen+at+high+cooling+rates.">Is intracellular ice formation the cause of death of mouse sperm frozen at high cooling rates.</a> Biol. Reprod. 66, 1485-1490 (2002).</li><li>Jin, B., Yamasaki, C., Yamada, N., Seki, S., Valdez, D. M., Kasai, M., Edashige, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+by+which+mouse+spermatozoa+are+injured+during+freezing.">The mechanism by which mouse spermatozoa are injured during freezing.</a> J. Reprod. Dev. 54, 265-269 (2008).</li><li>Visconti, P. E., Westbrook, V. A., Chertihin, O., Demarco, I., Sleight, S., Diekman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+signaling+pathways+involved+in+sperm+acquisition+of+fertilizing+capacity.">Novel signaling pathways involved in sperm acquisition of fertilizing capacity.</a> J. Reprod. Immunol. 53, 133-150 (2002).</li><li>Ostermeier, G. C., Wiles, M. V., Farley, J. S., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserving,+distributing+and+managing+genetically+modified+mouse+lines+by+sperm+cryopreservation.">Conserving, distributing and managing genetically modified mouse lines by sperm cryopreservation.</a> PLoS ONE. 3, e2792-e2792 (2008).</li></ol>

המחברים הם עובדים של צ&#39;ארלס ריבר, יצרנית ערכת הזה.

מאז שנת 1990, הקפאת הזרע בסיסי באמצעות פרוטוקול raffinose 18% ו 3% חלב רזה הוכח אמין זנים רבים של עכברים מספר רב של קווי העכבר כבר cryopreserved 1,2,3,4,5,6,7. הגורמים העיקריים לנזק לתאי זרע במהלך הקפאת תהליך ההפשרה קושרו עם היווצרות קרח 8,9 ו - 10 מינים חמצן תגובתי. תוספת של נוגדי רדיקלים חופשיים, כגון חומצות אמינו, וסוכני צמצום, כגון monothioglycerol, במדיום הקפאת נחקר והוכח באופן משמעותי להגדיל את שיעור הפריה חוץ גופית עם זרע קפוא מופשר של זנים טהורים כולל C57BL / 6 11,6. בפרוטוקול הנוכחי, פיתחנו חדש אני cryo • ערכת cryopreservation זרע העכבר על ידי אופטימיזציה של רו&quot;ח בסיסית עם נוגדי חמצון זמינים מסחרית חוסמי קרח על ידי שינוי הקפאת זרע הליך ההפריה החוץ גופית. הגנה יחסי של תנועתיות הזרע(&gt; 60%) ו תנועתיות פרוגרסיבית מהירה (&gt; 45%) נצפו במשך הזרע של חמישה זנים טהורים עכבר קפוא עם • אני cryo הערכה. 2 תאים העובר בשלב התפתחות שיעור עם זרע קפוא מופשר ב 5 זנים טהורים העכבר היה שיפור ניכר בהשוואה לזו עם בסיסי רו&quot;ח 11,6. במהלך השימוש בערכה, המשתמש יוצר ההשעיה זרע מרוכז על ידי הקפאת זרע של 2 גברים על כל שורה. על ידי הקפאה רק 15 קשיות התהליך הוא מהיר, קל תופסת פחות מקום אחסון לאחסון קצר או לטווח ארוך. רוב הפעמים, קווי העכבר ניתן לשחזר על ידי הפשרת רק 1 או 2 קשיות.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<th>
				Materials</th>
			<th>
				Supplier</th>
			<th>
				Catalogue number</th>
			<th>
				Comments</th>
		</tr>
		<tr>
			<td>CPA</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STM</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF medium</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 ml plastic straw</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sperm freezing canister</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cane and goblet</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Provided with kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5310</td>
			<td>Should be embryo tested</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KSOM medium</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MR-106-D</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351008</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat sealer</td>
			<td>ABTEC</td>
			<td>TISH-200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well multidish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>73521-424</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&deg;C + 5% CO2 incubator</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LN2 storage system</td>
			<td>Various</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&deg;C water bath</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89032-196</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hCG</td>
			<td>Intervet</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>EMDChemicals</td>
			<td>367222</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1cc syringe w/ 26G 3/8 needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD309625</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5602</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge &frac12; needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6802</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5135, RS-5110, RS-5005</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse sperm cryopreservation and recovery using the i&middot;cryo kit

אלפי החדשה שונה גנטית (GM) זנים של עכברים שנוצרו מאז כניסתו של טכנולוגיות transgenesis ו בנוקאאוט. רבים מהם בעלי ערך קיים רק בבעלי חיים, בלי תוכנית גיבוי למקרה חירום. Cryopreservation של עוברים יכולים לספק גיבוי זה, אבל הוא יקר, יכול להיות תהליך ארוך, ובדרך כלל דורש מספר רב של בעלי חיים להצלחה. מאז גילויו כי זרע העכבר ניתן cryopreserved בהצלחה עם סוכן cryoprotective בסיסי (רו&quot;ח) המורכב raffinose 18% ו 3% חלב רזה, cryopreservation הזרע הפך הליך מקובל וחסכוני עבור אחסון, הפצה ההתאוששות של אלו זנים בעלי ערך . כאן אנו מדגימים פיתח אני • ערכת cryo עבור cryopreservation זרע העכבר. הזרע של חמישה זנים נפוץ בשימוש של עכברים טבועה הוקפאו באמצעות ערכת התאושש לאחר מכן. הגנה יחס גבוה של תנועתיות הזרע (&gt;60%) ו תנועתיות פרוגרסיבית מהירה (&gt; 45%) לעומת לשלוט (בסיסי רו&quot;ח) נראו עבור זרע קפוא עם ערכת זה 5 זנים עכבר מולדת. בשלב שני התא עובר התפתחות לאחר הפריה חוץ גופית עם הזרע התאוששה היה שיפור עקבי בכל 5 זנים העכבר נבדק. במשך 1.5 שנים, 49 קווי GM עכבר היו בארכיון ידי cryopreservation זרע עם • אני cryo ערכת והתאושש מאוחר יותר על ידי הפריה חוץ גופית.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃ‚Â·Cryo Kit at JoVE.com

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

כאן אנו מדגימים את החדש שפותח אני • ערכת cryo עבור cryopreservation זרע העכבר. שני תאים בשלב התפתחות העובר עם זרע קפוא מופשר השתפר באופן עקבי 5 זנים עכבר עם השימוש בערכה זו. במשך 1.5 שנים, 49 קווי עכבר מהונדסים גנטית היו בארכיון ידי cryopreservation זרע עם • אני cryo ערכה ולאחר מכן התאושש בהצלחה על ידי הפריה חוץ גופית.

הזרע עכבר cryopreservation ושחזור באמצעות · אני cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

טיהור פלסמיד דנ&quot;א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit

Plasmid DNA purification from E. coli is a core technique for molecular cloning. Small scale purification (miniprep) from less than 5 ml of bacterial ...

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

אימונוהיסטוכימיה: מדורים פרפין שימוש ABC Vectastain קיט מ וקטור Labs

Immunohistochemistry (IHC) is a valuable technique utilized to localize/visualize protein expression in a mounted tissue section using specific ...

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

הפקת RNA מן התאים Neuroprecursor שימוש Bio-Rad סך RNA Kit

Rapid Genotyping of Mouse Tissue Using Sigma's Extract-N-Amp Tissue PCR Kit

Genotyping מהיר של רקמות באמצעות עכבר חלץ-N-Amp רקמות סיגמא של ערכת ה-PCR

Genomic detection of DNA via PCR amplification and detection on an electrophoretic gel is a standard way that the genotype of a tissue sample is ...

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

איסוף cryopreservation של ביציות ועוברים אוגר עכבר

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

שיטת תפוקה גבוהה עבור cryopreservation זרע דג הזברה במבחנה הפריה

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

באמצעות מערכת GELFREE 8100 ההיפוך חלוקה על ההיפוך חלוקה משקל מבוסס מולקולרית עם שלב החילוץ נוזלי

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation של עוברי עכברים ידי Vitrification אתילן גליקול מבוסס

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

הערכת זרע דגים באמצעות תוכנה, התקני קירור

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...