Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

وأيد هذا البحث المقدمة هنا من نهر تشارلز.

<ol>
	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

كل عمل من الكتاب لنهر تشارلز قاعدة بيانات طلبات العودة، المزود الرئيسي للخدمات الحيوانية اختبار الأمصال والكواشف.

عملية الاختبار هو MFIA كفاءة عالية، وتتطلب أقل المعدات وعينة أصغر وحدات التخزين كاشف من اختبارات singleplex التقليدية. وظائف نظام متعدد يعطي المستخدم المرونة اللازمة لفحص في وقت واحد لسلالات متعددة الأنماط المصلية أو من وكلاء شيوعا في المختبر القوارض (أي الفيروسة المكللة، parvoviruses الخ). وهذا يتيح لنا أيضا، لتصميم لوحات مخصصة حبة استنادا إلى مجال الاهتمام (أي عائلة فيروس معين) وقابلة للتكيف مع أنواع أخرى من الجزيئات الحيوية الفرز بما في ذلك السيتوكينات والمؤشرات الحيوية الأخرى. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يتيح لنا دمج عدة فحوصات الرقابة الداخلية للتحقق من العينة ومدى ملاءمة النظام وبالتالي ضمان دقة النتائج. هذه الأنسجة على التحكم و IgG المضادة للتجارب المصل المناعي الأنواع (αIg) مجموعات حبة مغلفة لتقييم مدى ملاءمة العينة. A الأنسجة السيطرة حبة يكشف غير محددة وملزمة من المصل المناعي والسيطرة حبة αIg يؤكدتمت إضافة هذا المصل ويحتوي على تركيز الغلوبولين المناعي كافية. آخر حبة السيطرة، المغلفة مع الغلوبولين المناعي المصل الأنواع، يدل على أن وصفت والكواشف القارئ الفحص يعمل بشكل صحيح. قد المقايسات أخرى تنسيق متعدد مصلية المتاحة تجاريا (أي. ميكروأرس، ImmunoComb) لا يقدم هذا المستوى نفسه من تأكيد ذلك. يمكن القدرة على تضييق مصدرا محتملا لفشل الفحص قبل إعادة الاختبار يساعد محقق انقاذ على الوقت والمواد. ينبغي تأكيد الجوانب الحرجة للMFIA قبل تكرار عينة فشلت. منذ يجري الفحص عند درجة حرارة الغرفة وينبغي التحقق من أن درجة حرارة المختبر حوالي 27 ° C ± 2 ° C، ارتفاع درجات الحرارة يمكن أن يؤدي إلى خفض درجات من المتوقع لضوابط والعينات. غسل وربما كان أهم خطوة في الفحص. ضمان أن يتم غسلها بشكل صحيح لوحة الاختبار، ونشف معلق يمكن القضاءالغالبية العظمى من أخطاء أخذ العينات بسبب العد حبة منخفضة (بسبب الخرز المجمعة) أو غير كافية بالإضافة كاشف (فقدت من فتل من أسفل لوحة اختبار التصفية). نحن نعول بشكل روتيني 25 حبات في مقايسة (الوكيل) ولقد وجدت هناك اختلاف في النتائج الإحصائية عن طريق عد عدد أكبر من الخرز الذي سيؤدي أيضا إلى وقت أطول لقراءة اللوحة. لقد أجرينا دراسات شاملة من التحقق من صحة MFIA على عدة أنواع من الحيوانات المختبرية الشائعة الاستخدام (الفأر، الجرذ، الهامستر، والأرانب خنزير غينيا) لإثبات دقة التشخيص، استنساخ، وغلظة من خلال اختبار أعداد كبيرة من عينات المصل المعروف الإيجابية والسلبية، و مقارنة بهم ELISA، IFA والنتائج MFIA. كانت حدود الكشف (أي معيار المناعة النهاية المعايرة المصل) من MFIA مماثلة ل، وفي بعض الحالات تجاوزت تلك المقابلة من ELISA. تجاوز خصوصية التشخيص، قياس مع SPF القوارض الأمصال، 99٪، وبين هذا العام المراسلاتن أداء ELISA وMFIA على الأمصال المعروفة السلبية الإيجابية والمعروفة أكبر من 95٪. وخلاصة القول، أثبتت هذه النتائج أن MFIA متعددة هو بديل جيد لELISA singleplex، ومناسبة للالمقصود أي استخدام الروتيني للserosurveillance في المستعمرات الحيوانية المعملية.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

لضمان جودة النماذج الحيوانية المستخدمة في البحوث الطبية الحيوية وضعنا عددا من الاستراتيجيات وطرق الاختبارات التشخيصية لتحديد ما إذا تعرضت الحيوانات للعوامل المعدية العرضي (الفيروسات، الميكوبلازما، والكائنات الحية الدقيقة الأخرى الحساسية). العدوى من الحيوانات عادة ما تكون عابرة مناعيا، ولكن استجابات الأجسام المضادة في مصل الدم في كثير من الأحيان للإصابة يمكن أن يتم الكشف عن خلال أيام إلى أسابيع وتستمر طوال حياة المضيف. الأمصال هي المنهجية الرئيسية التي يتم من خلالها تشخيص مراقبة الحيوانات المختبرية. تاريخيا كانت غير مباشرة انزيم مرتبط المناعي فحص (ELISA) طريقة الفحص الرئيسي لserosurveillance. يتم تنفيذ ELISA باعتبارها singleplex، التي قياس واحد الميكروبية تفاعل ضد مستضد لكل بئر. في المقارنة يتم تنفيذ MFIA باعتبارها مقايسة المضاعفة. منذ المجهرية تأتي في 100 مجموعة متميزة اللون، يمكن إجراء ما يصل الى 100 المقايسات مختلفة simultaneously في صفيحة ميكروسكوبية واحدة أيضا. هذا الابتكار يقلل من كمية الكواشف، المصل والمستهلكات اللازمة لاختبار روتيني مع زيادة كمية المعلومات التي تم الحصول عليها من اختبار واحد أيضا. وبالإضافة إلى ذلك، نحن قادرون على دمج عدة حبات الرقابة الداخلية للتحقق من العينة ومدى ملاءمة النظام وبالتالي ضمان دقة النتائج. هذه الأنسجة على التحكم و IgG المضادة للتجارب المصل المناعي الأنواع (αIg) مجموعات حبة مغلفة لتقييم مدى ملاءمة العينة. كما في ELISA وIFA، ومراقبة الأنسجة بالكشف غير محددة وملزمة من الغلوبولين المناعي في الدم. سيطرة αIg (مراقبة المصل) يؤكد أن تمت إضافة مصل ويحتوي على تركيز الغلوبولين المناعي كافية في حين أن السيطرة مفتش حبة (نظام التحكم ملاءمة)، المغلفة مع الغلوبولين المناعي المصل الأنواع، يدل على أن وصفت والكواشف القارئ LUMINEX يعمل بشكل صحيح.

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

باستخدام تكنولوجيا LUMINEX المؤسسة المكروية xMAP، وقد وضعنا في المقايسة المناعية تعدد في الإرسال فلوروميتريك (MFIA) لserosurveillance من مختلف أنواع الحيوانات المختبرية. وMFIA هو ميكروأري التعليق حيث ترتبط تساهميا مستضد، والأنسجة المناعية لسيطرة أو البوليسترين المجهرية مرمزة. وتناولت طريقة اختبار MFIA وكذلك الموضوعات المختلفة استكشاف الأخطاء وإصلاحها.

اختبار المقايسة المناعية المضاعفة فلوروميتريك المنهجية واستكشاف الأخطاء وإصلاحها

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

التعريفي واختبار نقص الأكسجة في الثقافة خلية

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

كيميائيا سدت [ميكروأري] لتحديد ملامح عالية الإنتاجية من تعدد في الإرسال ارتباط بالغليكوزيل بروتين معين في عينات مجمع

 In this study, we describe an effective protocol for use in a multiplexed high-throughput antibody microarray with glycan binding protein detection that ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

تفاعل البلمرة سلسلة: البروتوكول الأساسي زائد استراتيجيات حل المشكلات والتحسين

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

الصلبة التجميعي المرحلة من الببتيد البس Functionalized استخدام &quot;سلامة الصيد&quot; منهجية

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

تصميم واستخدام المصفوفات ناظم كيميائي تعدد في الإرسال

Chemostats are continuous culture systems in which cells are grown in a tightly controlled, chemically constant environment where culture density is ...

A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

Biomarkers are becoming increasingly more  important in clinical decision-making, as well as basic science. Diagnosing  myocardial infarction (MI) is ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

دليل لمودرن الكمية نيون الغربية التنشيف مع استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

المتوازية الوراثية مع نيون البروتينات للتطبيقات المضاعفة

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

الكميات التعبير البروتين والتعاون التعريب عن طريق تعدد المناعية النسيجية تلطيخ والمتعددة الأطياف التصوير

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

إجراءات واستراتيجيات التحسين الرئيسية لأسلوب الآلي المناعة شعرية المستندة إلى الغرواني الكهربي

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...