Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
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La recherche présentée ici a été soutenu par Charles River.

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	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

Tous les auteurs travaillent pour Charles River RADS, un important fournisseur de services animaliers tests sérologiques et des réactifs.

Le processus de test MFIA est très efficace, nécessitant moins de matériel et petit échantillon et des volumes de réactifs que les tests traditionnels singleplex. La fonctionnalité du système multiplex donne à l&#39;utilisateur la possibilité de filtrer simultanément pour plusieurs souches ou sérotypes d&#39;agents communs chez les rongeurs de laboratoire (c.-à-coronavirus, les parvovirus, etc.) Cela nous permet aussi, de concevoir sur mesure des panneaux de perles basée sur la zone d&#39;intérêt (c.-famille de virus spécifique) et est adaptable à d&#39;autres types de dépistage de biomolécules incluant les cytokines et autres bio-marqueurs. En outre, il nous permet d&#39;intégrer plusieurs tests de contrôle interne pour vérifier l&#39;échantillon et de l&#39;adéquation du système et ainsi assurer l&#39;exactitude des résultats. Ceux-ci incluent le contrôle des tissus et IgG anti-immunoglobuline de test espèces sérum (αIg) recouvertes de billes d&#39;évaluer l&#39;aptitude de l&#39;échantillon. Un tissu de contrôle bourrelet détecte la liaison non spécifique des immunoglobulines de sérum et le contrôle αIg bourrelet confirmeque le sérum a été ajouté et contient une concentration suffisante d&#39;immunoglobuline. Une autre perle de contrôle, recouvert d&#39;immunoglobuline sérique espèces, démontre que les réactifs marqués et un lecteur de test fonctionnent correctement. D&#39;autres tests disponibles dans le commerce format multiplex sérologiques (c.-à MicroArrays, ImmunoComb) peuvent ne pas offrir le même niveau de résultat de confirmation. La possibilité de réduire les causes possibles de l&#39;échec d&#39;essai avant de nouveaux tests peuvent aider un enquêteur économiser du temps et des matériaux. Les aspects critiques de la MFIA doit être confirmée avant de répéter un échantillon échoué. Depuis le dosage est effectué à la température ambiante, il convient de vérifier que la température du laboratoire est d&#39;environ 27 ° C ± 2 ° C, des températures plus élevées peut entraîner une baisse de scores attendus pour les contrôles et les échantillons. Laver est peut-être l&#39;étape la plus critique dans l&#39;analyse. Assurer que la plaque d&#39;essai est bien lavé, effacé et remis en suspension peut éliminerla grande majorité des erreurs d&#39;échantillonnage dues à talon faible numération (en raison de perles agrégées) ou l&#39;ajout de réactif insuffisante (perte par effet de mèche sur fond de plaque d&#39;essai du filtre). Nous avons régulièrement compte 25 perles par dosage (agent) et n&#39;ont trouvé aucune différence statistique dans les résultats en comptant plus grand nombre de billes qui aboutira également à un plus long temps de lecture de la plaque. Nous avons effectué des études de validation complets de MFIA sur plusieurs espèces d&#39;animaux de laboratoire couramment utilisés (souris, rat, hamster, cochon Guinée et le lapin) pour démontrer la précision du diagnostic, la reproductibilité et la robustesse de tester un grand nombre de positifs et négatifs connus des échantillons de sérum et comparant leur ELISA, IFI et les résultats MFIA. Les limites de détection (c.-à-immunes critères d&#39;évaluation standards de titrage du sérum) de MFIA étaient comparables, et dans certains cas dépassé, ceux de correspondant ELISA. La spécificité diagnostique, mesurée avec des rongeurs SPF sérums, a dépassé les 99%, le betwee correspondance globalen ELISA et MFIA effectuée sur sérums négatifs connus positive et connue était supérieure à 95%. En résumé, ces résultats ont prouvé que MFIA multiplex est un autre bon test ELISA singleplex, et est adapté à l&#39;usage, c&#39;est à dire prévu dans la surveillance sérologique de routine des colonies d&#39;animaux de laboratoire.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

Pour garantir la qualité des modèles animaux utilisés en recherche biomédicale, nous avons développé un certain nombre de stratégies de tests de diagnostic et les méthodes permettant de déterminer si les animaux ont été exposés à des agents adventices infectieux (virus, les mycoplasmes et autres micro-organismes exigeants). Infections des animaux immunocompétents sont généralement transitoires, mais les réponses en anticorps sériques à l&#39;infection peuvent souvent être détectés dans les jours ou semaines et persistent pendant toute la vie de l&#39;hôte. La sérologie est la méthode de diagnostic principal par lequel les animaux de laboratoire sont surveillés. Historiquement, le-enzymatique indirecte (ELISA) a été la principale méthode de dépistage pour la surveillance sérologique. Le test ELISA est réalisé comme un singleplex, dans lequel une microbienne réaction antigène-anticorps est mesurée dans chaque puits. Dans le comparateur de MFIA est réalisée comme un essai multiplex. Depuis les microsphères venir dans 100 jeux de couleurs distinctes, pas moins de 100 différents tests peuvent être effectués simultanément dans un seul puits de microplaques. Cette innovation réduit la quantité de sérum, réactifs et consommables nécessaires pour les tests de routine, tout en augmentant la quantité d&#39;information obtenue à partir d&#39;un seul test bien. En outre, nous sommes en mesure d&#39;intégrer de multiples perles de contrôle interne pour vérifier l&#39;échantillon et de l&#39;adéquation du système et ainsi assurer l&#39;exactitude des résultats. Ceux-ci incluent le contrôle des tissus et IgG anti-immunoglobuline de test espèces sérum (αIg) recouvertes de billes d&#39;évaluer l&#39;aptitude de l&#39;échantillon. Comme dans le test ELISA et IFA, le tissu de contrôle détecte la liaison non spécifique des immunoglobulines de sérum. Le contrôle αIg (contrôle sérum) confirme que le sérum a été ajouté et contient une concentration en immunoglobuline IgG suffisante alors que le contrôle de cordon (contrôle de conformité du système), recouvert d&#39;immunoglobuline sérique espèces, démontre que les réactifs marqués et Luminex lecteur fonctionnent correctement.

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Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Grâce à la technologie Luminex Corporation microbille xMAP, nous avons développé le test immunologique multiplexée fluorométrique (MFIA) pour la surveillance de diverses espèces d&#39;animaux de laboratoire. Le MFIA est une micropuce suspension, si l&#39;antigène, le tissu de contrôle ou d&#39;immunoglobulines sont liés de façon covalente à du polystyrène code couleur microsphères. La méthode de test MFIA ainsi que diverses rubriques de dépannage est adressée.

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