Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
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Die Forschung hier vorgestellte wurde von Charles River unterstützt.

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	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

Alle Autoren arbeiten für Charles River RADS, ein führender Anbieter von Tier-Serologie Test-Dienstleistungen und Reagenzien.

Die MFIA Testprozess ist hoch effizient und erfordert weniger Ausrüstung und kleinere Probe und Reagenz Volumen als herkömmliche Singleplex Tests. Die Funktionalität des Multiplex-System gibt dem Benutzer die Flexibilität, um gleichzeitig zu screenen für mehrere Stämme oder Serotypen von gemeinsamen Agenten in Labornagetieren (dh Coronavirus, Parvoviren etc.). Dies ermöglicht es uns, maßgeschneiderte Perlen Panels basieren auf den Bereich von Interesse (zB spezifische Virus-Familie) entwerfen und ist anpassungsfähig an Screening andere Arten von Biomolekülen einschließlich Zytokine und andere Biomarker. Darüber hinaus ermöglicht es uns, mehrere interne Kontrollsystem Assays integrieren, um Probe und System Eignung zu überprüfen und dadurch sicherzustellen, die Genauigkeit der Ergebnisse. Dazu gehören Gewebe-Steuerung und IgG-Anti-Testserum Arten Immunglobulin (αIg) beschichtete Kugel-Sets zu Probe Eignung zu bewerten. Eine Gewebemarkiervorrichtung Steuerwulst erkennt unspezifische Bindung von Serum-Immunglobulin und das αIg Wulst Steuerung bestätigtdass Serum wurde hinzugefügt und enthält eine ausreichende Immunglobulin-Konzentration. Eine weitere Kontrolle Wulst mit Serum Immunglobulin Spezies beschichtet wird, zeigt, dass die markierten Reagentien und Assay Reader ordnungsgemäß funktionieren. Andere im Handel erhältliche Multiplex-Format serologischen Assays (zB Microarrays, ImmunoComb) nicht bieten diese gleiche Ergebnis Bestätigung. Die Fähigkeit zu verengen die mögliche Quelle der Assay Versagen vor Nachprüfung helfen kann ein Ermittler auf Zeit und Material zu sparen. Kritische Aspekte des MFIA sollte vor der Wiederholung einer fehlgeschlagenen Probe bestätigt werden. Da der Test bei Raumtemperatur durchgeführt wird, sollte verifiziert, dass die Temperatur etwa 27 Labor ist ° C ± 2 ° C, höhere Temperaturen führen kann als erwartet Scores für Kontrollen und Proben zu senken. Waschen ist vielleicht der wichtigste Schritt im Assay. Die Versicherung, dass die Testplatte richtig gewaschen, abgetupft und resuspendiert beseitigen könnendie überwiegende Mehrzahl der Abtastfehler aufgrund einer geringen Anzahl Wulst (aufgrund aggregierten Kügelchen) oder unzureichende Reagenzzugabe (Passwort durch Dochtwirkung aus der Testplatte Filterboden). Wir routinemäßig zählen 25 Perlen pro Assay (Agent) und haben keinen statistischen Unterschied in den Ergebnissen durch Zählen höhere Anzahl von Perlen, die auch zu einer längeren Lesezeit für die Platte führen. Wir haben umfassende Validierungsstudien MFIA auf mehrere Arten der am häufigsten verwendeten Versuchstiere (Maus, Ratte, Hamster, Meerschweinchen und Kaninchen) durchgeführt, um die diagnostische Genauigkeit, Reproduzierbarkeit und Robustheit durch das Testen einer großen Anzahl von bekannten positiven und negativen Serumproben zu demonstrieren und Vergleich ihrer ELISA, IFA und MFIA Ergebnisse. Die Nachweisgrenzen (dh Standard-Immunserum Titration Endpunkte) von MFIA vergleichbar waren, und in einigen Fällen übertroffen, wie bei entsprechenden ELISA. Diagnostische Spezifität, mit SPF Nager sera gemessen als 99%, die gesamte Korrespondenz between ELISA und MFIA durchgeführt am bekannten positiven und bekannten negativen Seren war größer als 95%. Zusammenfassend erwiesen diese Ergebnisse, dass eine gute Multiplex MFIA Stellvertreter für den ELISA ist Singleplex, und ist geeignet für die beabsichtigte Verwendung, dh in der Routine serologischen Überwachung von Versuchstieren Kolonien.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

Um die Qualität von Tiermodellen in der biomedizinischen Forschung verwendet sicherzustellen, haben wir eine Reihe von diagnostischen Tests Strategien und Methoden, um festzustellen, ob Tiere zufällige Infektionserregern (Viren, Mykoplasmen, und anderen anspruchsvollen Mikroorganismen) ausgesetzt wurden entwickelt. Infektionen von immunkompetenten Tieren im Allgemeinen vorübergehend, jedoch Serum-Antikörperantworten gegen Infektionen oft innerhalb von Tagen bis Wochen festgestellt werden und bleiben über die gesamte Lebensdauer des Wirts. Serologie ist die primäre diagnostische Methode, mit der Versuchstiere werden überwacht. Historisch die indirekter Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) ist die wichtigste Methode zur serologischen Überwachung Screening. Der ELISA ist als Singleplex durchgeführt, wobei ein mikrobielles Antigen-Antikörper-Reaktion pro Vertiefung gemessen. Im Vergleich der MFIA als gemultiplexte Assay durchgeführt. Da die Mikrokügelchen in 100 verschiedene Farbskalen kommen, können bis zu 100 verschiedene Assays simultan durchgeführt werdeneously in einem Mikrotiterplatten. Diese Innovation reduziert die Menge an Serum, Reagenzien und Verbrauchsmaterialien für Routinetests erforderlich, während die Erhöhung der Menge von Informationen aus einem einzigen Test gut erhalten. Darüber hinaus sind wir in der Lage, mehrere interne Kontrollsystem Perlen integrieren, um Probe und System Eignung zu überprüfen und dadurch sicherzustellen, die Genauigkeit der Ergebnisse. Dazu gehören Gewebe-Steuerung und IgG-Anti-Testserum Arten Immunglobulin (αIg) beschichtete Kugel-Sets zu Probe Eignung zu bewerten. Wie in den ELISA und IFA detektiert der Gewebekontrolle unspezifische Bindung von Serum-Immunglobulin. Die αIg Steuerung (Serum-Steuerung) bestätigt, dass das Serum wurde hinzugefügt und enthält eine ausreichende Immunglobulinkonzentration während die IgG-Kontrolle Wulst (System Suitability Kontrolle), mit Serum Arten Immunglobulin beschichtet, zeigt, dass die markierten Reagenzien und Luminex Leser ordnungsgemäß funktionieren.

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Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Mit Luminex Corporation xMAP-Mikrokugel-Technologie haben wir die Multiplex Fluorometric Immunoassay (MFIA) für serologischen Überwachung von verschiedenen Labors Tierarten entwickelt. Die MFIA ist eine Suspension Microarray, wo Antigen, Gewebekontrolle oder Immunglobuline kovalent an farbkodierten Polystyrol-Mikrokügelchen verbunden sind. Die MFIA Prüfverfahren sowie verschiedene Themen zur Fehlerbehebung adressiert ist.

Multiplexed Fluorometric Immunoassay Testing Methodology und Fehlerbehebung

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Biologie

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