Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

המחקר הנוכחי נתמך על ידי צ&#39;ארלס ריבר.

<ol>
	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

כל עבודת המחברים לצ&#39;ארלס ריבר RADS, ספקית גדולה של שירותי בעלי חי סרולוגיה בדיקות וחומרים כימיים.

תהליך בדיקת MFIA הוא יעיל ביותר, ודורש פחות ציוד ומדגם קטן יותר ומגיב יותר מכרכי בדיקות singleplex מסורתיות. הפונקציונליות של המערכת זמנית נותנת למשתמש את הגמישות למסך בו זמנית לזנים מרובים או זנים של סוכנים נפוצים במכרסמי מעבדה (קורונה כלומר, parvoviruses וכו &#39;). זה גם מאפשר לנו, לעצב פנלי חרוזים מותאמים אישית המבוססים על תחומי העניין (משפחת הווירוס ספציפי אני.) וניתן להתאמה לסוגי ההקרנה אחרים של ביומולקולות כולל ציטוקינים וסמנים ביולוגיים אחרים. בנוסף, היא מאפשרת לנו לשלב כמה מבחני בקרה פנימיים כדי לוודא מדגם והתאמת מערכת ובכך להבטיח את הדיוק של תוצאות. אלה כוללים שליטת רקמות ואימונוגלובולינים IgG נגד מבחן סרום מינים (αIg) ערכות חרוזים מצופות להעריך התאמתו מדגם. רקמת שליטת חרוז מזהה מחייב הלא ספציפי של אימונוגלובולינים סרום ושליטת αIg החרוז מאשרסרום שנוסף לו ומכיל ריכוז נוגדנים מספק. שליטת חרוז אחר, מצופה באימונוגלובולינים מיני סרום, מוכיח כי החומרים כימיים שכותרתו וקורא assay מתפקדים כראוי. מבחנים אחרים זמינים מסחרי זמנית בפורמט סרולוגיות (microarrays ie., ImmunoComb) לא יכולים להציע רמה זו של אישור תוצאה. היכולת לצמצם את המקור האפשרי לכישלון בדיקה לפני הבדיקה חוזרת יכולה לעזור חוקר לחסוך בזמן וחומרים. היבטים קריטיים של MFIA צריכים להיות מאושרים לפני חזרה מדגם נכשל. מאז הבדיקה מתבצעת בטמפרטורת סביבתו יש לוודא כי טמפרטורת המעבדה היא כ 27 ° C ± 2 מעלות צלזיוס, טמפרטורות גבוהות יותר יכולות להוביל לציונים נמוכים מצפויים לפקדים ודגימות. כביסה היא אולי השלב הקריטי ביותר בבדיקה. הם מבטיחים שצלחת המבחן היא שטפה כראוי, ומחק resuspended יכול לחסלהרוב המכריע של טעויות דגימה עקב ספירה נמוכה של חרוז (עקב חרוזים צבורים) או בנוסף מגיב מספיק (אבד ידי פתילה מתחתית מסנן צלחת בדיקה). אנו שגרתי לספור 25 חרוזים לבדיקה (סוכן) ולא מצאנו כל הבדל סטטיסטי בתוצאות על ידי ספירת מספר גבוה יותר של חרוזים שגם יובילו לזמן לקרוא עוד על הצלחת. יש לנו מחקרים שבוצעו אימות מקיפות של MFIA בכמה מינים של חיות מעבדה בשימוש נפוץ (עכבר, חולדה, אוגר, קביה וארנב) להפגין דיוק אבחון, שחזור, וקשיחות על ידי בדיקת מספר גדול של דגימות ידועות חיוביות ושליליות בסרום, ו השוואתם ELISA, תוצאות MFIA IFA ו. את מגבלות זיהוי (כלומר, נקודתי קצה טיטרציה רגילות חיסוניות סרום) של MFIA היו דומות ל, ובמקרים מסוימים עלו, אלה של ELISA המקביל. סגולי לאבחון, למדידה עם SPF מכרסם סרה, עלה 99%; betwee ההתכתבות הכלליתn ELISA וMFIA בוצעו על סרום ידוע חיובי ושלילי ידוע היו גדול יותר מאשר 95%. לסיכום, תוצאות המחקר הוכיחו כי MFIA זמנית היא חלופי טוב singleplex ELISA, והוא מתאים לשימוש, כלומר המיועד שלו בserosurveillance השגרתי של מושבות בעלי חיים במעבדה.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

כדי להבטיח את האיכות של מודלים של בעלי חיים המשמשים במחקר ביו פתחנו מספר האסטרטגיות ושיטות אבחון בדיקות כדי לקבוע אם בעלי חיים שנחשפו לחומרים מזהמים adventitious (וירוסים, Mycoplasma ומיקרואורגניזמים אנינים אחרים). זיהומים של מערכת חיסון בעלי חיים הם בדרך כלל חולפים, עדיין תגובות נוגדנים בסרום לזיהום לעתים קרובות ניתן להבחין בתוך ימים עד שבועות ונמשכים לכל אורך החיים של המארח. סרולוגיה היא מתודולוגיה האבחון הראשונית שבאמצעותו חיות מעבדה נמצאות תחת פיקוח. מבחינה הסטורית assay immunosorbent אנזים הצמוד העקיף (ELISA) כבר שיטת ההקרנה העיקרית לserosurveillance. ELISA מתבצעת כsingleplex, שבתגובת מיקרוביאלי 1 אנטיגן נוגדן נמדדת לטוב. בהשוואת MFIA מבוצע כבדיקת multiplexed. מאז microspheres לבוא ב100 ערכות צבעים שונות, רבים כמו 100 מבחנים שונים ניתן לבצע simultaneously בmicroplate האחת טוב. חידוש זה מקטין את הכמות בסרום, ריאגנטים ומתכלה הנדרשים לבדיקה שגרתית, תוך הגדלת כמות המידע המתקבל מבדיקה אחת טובה. בנוסף, אנו מסוגלים לשלב חרוזי בקרה פנימיים מרובים כדי לוודא מדגם והתאמת מערכת ובכך להבטיח את הדיוק של תוצאות. אלה כוללים שליטת רקמות ואימונוגלובולינים IgG נגד מבחן סרום מינים (αIg) ערכות חרוזים מצופות להעריך התאמתו מדגם. כמו בELISA וIFA, שליטת הרקמה מזהה מחייב הלא ספציפי של אימונוגלובולינים בסרום. שליטת αIg (שליטת סרום) מאשרת כי סרום כבר הוסיף ומכילה ריכוז נוגדני IgG מספיק תוך שליטת החרוז (שליטת התאמת מערכת), מצופה באימונוגלובולינים מיני סרום, מוכיח כי החומרים כימיים שהכותרת וLuminex הקורא מתפקדים כראוי.

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

שימוש בטכנולוגית microsphere Xmap של Luminex החברה, פתחתי immunoassay Fluorometric Multiplexed (MFIA) לserosurveillance של מיני בעלי חיים שונים במעבדה. MFIA הוא microarray השעיה בי אנטיגן, בקרת רקמה או נוגדנים קשורות קוולנטית לקלקר microspheres צבעים. שיטת בדיקת MFIA כמו גם נושאים שונים לפתרון בעיות מטופלות.

מתודולוגיה multiplexed Fluorometric immunoassay בדיקה ופתרון בעיות

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

אינדוקציה ובדיקה של היפוקסיה בתרבות התא

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

נוגדן microarray כימי חסומים פרופיל תפוקה גבוהה מרובב של Glycosylation חלבון מסוים בדגימות מורכבות

 In this study, we describe an effective protocol for use in a multiplexed high-throughput antibody microarray with glycan binding protein detection that ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

תגובת שרשרת פולימרז: פרוטוקול בסיסי פלוס אסטרטגיות לפתרון בעיות ואופטימיזציה

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

סינתזה שלב מוצק של פפטיד Bis פונקציונליות שימוש &quot;בטיחות תפוס&quot; מתודולוגיה

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

עיצוב ושימוש במערכי Chemostat Multiplexed

Chemostats are continuous culture systems in which cells are grown in a tightly controlled, chemically constant environment where culture density is ...

A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

שיטת Quantitation רגישה וספציפית לקביעת חלבון-C שרירן לב סרום הכבילה ידי Immunoassay Electrochemiluminescence

Biomarkers are becoming increasingly more  important in clinical decision-making, as well as basic science. Diagnosing  myocardial infarction (MI) is ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

מדריך למודרני כמותי פלורסנט המערבי סופג עם אסטרטגיות לפתרון בעיות

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

Barcoding הגנטי עם חלבונים ניאון עבור יישומי Multiplexed

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

כימות של ביטוי חלבון ו Co-לוקליזציה שימוש חיסונית-histochemical Multiplexed מכתים והדמיה Multispectral

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

הליך ואסטרטגיות אופטימיזציה מפתח שיטה אוטומטית נימי מתכלה מבוסס על Electrophoretic

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...