Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
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यहाँ प्रस्तुत शोध चार्ल्स नदी द्वारा समर्थित किया गया.

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	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

सभी लेखकों चार्ल्स नदी rads, पशु रक्तोदकविज्ञान परीक्षण सेवाओं और अभिकर्मकों के एक प्रमुख प्रदाता के लिए काम करते हैं.

MFIA परीक्षण की प्रक्रिया अत्यधिक कुशल है, कम उपकरण और छोटे नमूना पारंपरिक singleplex परीक्षण की तुलना में और अभिकर्मक मात्रा की आवश्यकता होती है. मल्टीप्लेक्स प्रणाली की कार्यक्षमता उपयोगकर्ता के कई उपभेदों या आम एजेंटों के सीरमप्रकारों प्रयोगशाला कृन्तकों में (यानी coronavirus, parvoviruses आदि) के लिए एक साथ स्क्रीन लचीलापन देता है. यह भी हमारे लिए सक्षम बनाता है, ब्याज (ie. विशिष्ट वायरस परिवार) के क्षेत्र के आधार पर अनुकूलित मनका पैनल डिजाइन और साइटोकिन्स और अन्य biomarkers सहित biomolecules की स्क्रीनिंग के अन्य प्रकार के लिए अनुकूल है. इसके अलावा, यह हमें कई आंतरिक नियंत्रण assays को शामिल करने के लिए नमूना और प्रणाली उपयुक्तता को सत्यापित करने और इस तरह के परिणामों की शुद्धता को आश्वस्त करने के लिए अनुमति देता है. ये ऊतक नियंत्रण और आईजीजी विरोधी परीक्षण सीरम प्रजातियों (αIg) immunoglobulin लेपित मनका सेट नमूना उपयुक्तता का मूल्यांकन करने में शामिल हैं. एक ऊतक नियंत्रण मनका सीरम immunoglobulin के बंधन गैर विशिष्ट और αIg मनका नियंत्रण की पुष्टि करता है का पता लगाता हैकि सीरम जोड़ दिया गया है और एक पर्याप्त immunoglobulin एकाग्रता शामिल हैं. दूसरा नियंत्रण मनका, सीरम प्रजातियों की immunoglobulin साथ लेपित, यह दर्शाता है कि लेबल अभिकर्मकों और परख पाठक ठीक से कार्य कर रहे हैं. अन्य व्यावसायिक रूप से उपलब्ध मल्टीप्लेक्स प्रारूप serologic assays (यानी, प्रोटीन ImmunoComb) परिणाम पुष्टि की यह एक ही स्तर पर नहीं की पेशकश कर सकते हैं. परख की विफलता के संभावित स्रोत retesting करने से पहले नीचे संकीर्ण करने की क्षमता में मदद कर सकते हैं एक अन्वेषक समय और सामग्री को बचाने के. MFIA के महत्वपूर्ण पहलुओं को एक असफल नमूना दोहरा से पहले पुष्टि की जानी चाहिए. चूंकि परख परिवेश के तापमान पर आयोजित किया जाता है यह सत्यापित किया जाना चाहिए कि प्रयोगशाला तापमान लगभग 27 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस, उच्च तापमान के नियंत्रण और नमूने के लिए उम्मीद स्कोर की तुलना में कम हो सकता है. वॉशिंग शायद इस परख में सबसे महत्वपूर्ण कदम है. बीमा है कि परीक्षण प्लेट ठीक से धोया जाता है blotted, और resuspended समाप्त कर सकते हैंकम मनका (एकत्रित मोती की वजह से) गिनती या अपर्याप्त अभिकर्मक अलावा परीक्षण थाली फिल्टर नीचे से बाहर wicking द्वारा खो कारण नमूना त्रुटियों के विशाल बहुमत. हम नियमित रूप से परख प्रति 25 मोती (एजेंट) गिनती और मोती जो भी थाली के लिए एक लंबे समय तक पढ़ने के लिए समय के लिए नेतृत्व करेंगे के उच्च संख्या गिनती कर परिणाम में कोई अंतर पाया गया सांख्यिकीय. हम आमतौर पर इस्तेमाल किया प्रयोगशाला जानवरों की कई प्रजातियों (माउस, चूहा, हैम्स्टर, गिनी पिग और खरगोश) MFIA की व्यापक सत्यापन अध्ययन का प्रदर्शन किया है करने के लिए जाना जाता है सकारात्मक और नकारात्मक सीरम नमूनों की बड़ी संख्या के परीक्षण के द्वारा निदान सटीकता, reproducibility, और ruggedness प्रदर्शन, और उनके एलिसा आइएफए, और MFIA परिणाम की तुलना. MFIA का पता लगाने सीमा (यानी, मानक प्रतिरक्षा सीरम अनुमापन endpoints) के बराबर थे, और कुछ मामलों में पार कर, उन इसी एलिसा के. नैदानिक ​​विशिष्टता, एसपीएफ़ कृंतक सीरा के साथ मापा, 99% से अधिक, समग्र पत्राचार between एलिसा और MFIA ज्ञात सकारात्मक और ज्ञात नकारात्मक सीरा पर प्रदर्शन के 95% से अधिक था. संक्षेप में, इन परिणामों से साबित कर दिया कि मल्टीप्लेक्स MFIA singleplex एलिसा के लिए एक अच्छा वैकल्पिक है, और प्रयोगशाला पशु कालोनियों के नियमित serosurveillance में अपने उद्देश्य का उपयोग यानी, के लिए उपयुक्त है.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

पशु जैव चिकित्सा अनुसंधान के क्षेत्र में प्रयोग किया जाता मॉडल की गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए हम नैदानिक ​​परीक्षण रणनीतियों और तरीकों के लिए निर्धारित करती है कि जानवरों के आकस्मिक संक्रामक एजेंटों (वायरस, mycoplasma, और अन्य दुराराध्य सूक्ष्मजीवों) को उजागर किया गया की एक संख्या विकसित किया है. असुरक्षित पशुओं के संक्रमण क्षणिक आम तौर पर कर रहे हैं, अभी तक संक्रमण के लिए सीरम एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं अक्सर सप्ताह के लिए दिनों के भीतर पता लगाया जा सकता है और मेजबान के जीवन भर जारी रहती है. सीरम विज्ञान प्राथमिक नैदानिक ​​पद्धति है जिसके द्वारा प्रयोगशाला पशुओं की निगरानी कर रहे हैं है. ऐतिहासिक अप्रत्यक्ष एंजाइम से जुड़ी immunosorbent परख (एलिसा) serosurveillance के लिए मुख्य स्क्रीनिंग पद्धति किया गया है. एलिसा एक singleplex के रूप में किया जाता है, जिसमें एक माइक्रोबियल प्रतिक्रिया प्रतिजन एंटीबॉडी के प्रति अच्छी तरह से मापा जाता है. तुलना में MFIA एक मल्टिप्लेक्स परख के रूप में किया जाता है. चूंकि microspheres 100 अलग रंग सेट में आते हैं, के रूप में कई के रूप में 100 विभिन्न assays simultan किया जा सकता हैeously एक एकल microplate में अच्छी तरह से. इस नवाचार सीरम अभिकर्मकों, और disposables नियमित परीक्षण के लिए आवश्यक है, जबकि एक एक अच्छी तरह से परीक्षण से प्राप्त जानकारी की राशि में वृद्धि की मात्रा घट जाती है. इसके अलावा, हम कई आंतरिक नियंत्रण के मोती को शामिल करने के लिए नमूना और प्रणाली उपयुक्तता की पुष्टि और इस तरह के परिणामों की सटीकता को आश्वस्त करने में सक्षम हैं. ये ऊतक नियंत्रण और आईजीजी विरोधी परीक्षण सीरम प्रजातियों (αIg) immunoglobulin लेपित मनका सेट नमूना उपयुक्तता का मूल्यांकन करने में शामिल हैं. एलिसा और आइएफए में के रूप में, ऊतक नियंत्रण गैर विशिष्ट सीरम immunoglobulin के बंधन का पता लगाता है. αIg नियंत्रण (सीरम नियंत्रण) की पुष्टि करता है कि सीरम जोड़ दिया गया है और एक पर्याप्त immunoglobulin एकाग्रता शामिल है, जबकि आईजीजी नियंत्रण (सिस्टम उपयुक्तता नियंत्रण) मनका, सीरम प्रजातियों immunoglobulin साथ लेपित है, यह दर्शाता है कि लेबल अभिकर्मकों और Luminex पाठक ठीक से कार्य कर रहे हैं.

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Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Luminex निगम Xmap microsphere प्रौद्योगिकी का उपयोग करना, हम विभिन्न प्रयोगशाला जानवरों की प्रजातियों के serosurveillance के लिए मल्टिप्लेक्स fluorometric immunoassay (MFIA) विकसित किया है. एक निलंबन MFIA माइक्रोएरे जहां प्रतिजन, ऊतक नियंत्रण या immunoglobulins covalently रंग कोडित polystyrene microspheres से जुड़े होते हैं. MFIA परीक्षण के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विधि विभिन्न समस्या निवारण विषयों को संबोधित किया है.

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