Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
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La ricerca qui presentata è stata sostenuta da Charles River.

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	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

Tutti i lavori di autori per Charles River RADS, uno dei principali fornitori di servizi di sierologia sperimentazione animale e reagenti.

Il processo di test MFIA è altamente efficiente, richiedono meno materiale e più piccolo del campione e volumi di reagente rispetto ai test tradizionali singleplex. La funzionalità del sistema multiplex dà all&#39;utente la flessibilità di schermo contemporaneamente per più ceppi o sierotipi di agenti comuni in roditori da laboratorio (cioè Coronavirus, parvovirus, ecc). Questo ci consente anche, a progettare pannelli personalizzati tallone sulla base dell&#39;area di interesse (cioè famiglia di virus specifico) ed è adattabile a tipi di screening altre biomolecole quali citochine e altri indicatori biologici. Inoltre, ci permette di incorporare diversi saggi di controllo interno per verificare campione e idoneità sistema e quindi assicurare l&#39;accuratezza dei risultati. Questi includono il controllo di tessuti e IgG anti-immunoglobulina specie di prova del siero (αIg) rivestite insiemi di sferette per valutare l&#39;idoneità del campione. Un tessuto sfera di controllo rileva il legame non specifico di immunoglobulina siero e il controllo αIg tallone confermache il siero è stato aggiunto e contiene una concentrazione sufficiente di immunoglobulina. Un&#39;altra perla di controllo, rivestito con immunoglobuline specie siero, dimostra che i reagenti marcati e lettore di test funzionano correttamente. Altri multiplex disponibili in commercio test sierologici formato (es. microarrays, ImmunoComb) non può offrire lo stesso livello di risultato conferma. La possibilità di ridurre la possibile fonte di fallimento prima della rianalisi dosaggio può aiutare un investigatore risparmiare tempo e materiali. Aspetti critici della MFIA deve essere confermata prima di ripetere un campione fallito. Dal momento che il test è condotto a temperatura ambiente è necessario verificare che la temperatura del laboratorio è di circa 27 ° C ± 2 ° C, temperature più elevate possono portare a una riduzione di punteggi previsti per i controlli ed i campioni. Lavaggio è forse la fase più critica nel saggio. Assicurare che la piastra di prova viene adeguatamente lavati, cancellati e risospese può eliminarela maggior parte degli errori di campionamento dovuti a basso numero di tallone (per perline aggregati) o addizione del reagente insufficiente (perso per wicking su fondo piastra prova filtro). Abbiamo regolarmente contare 25 perline per dosaggio (agente) e hanno trovato alcuna differenza statistica tra i risultati contando più alto numero di perline, che porterà anche ad un tempo più lungo di lettura per la piastra. Abbiamo effettuato studi di convalida complete di MFIA su diverse specie di animali da laboratorio di uso comune (topo, ratto, criceto, cavia e coniglio), per dimostrare l&#39;accuratezza diagnostica, la riproducibilità e robustezza testando un gran numero di noti campioni di sieri positivi e negativi, e confrontando il loro ELISA, IFA e risultati MFIA. I limiti di rilevazione (cioè, standard endpoint immunitarie titolazione del siero) di MFIA erano paragonabili a, e in alcuni casi superato, quelli corrispondenti ELISA. Specificità diagnostica, misurata con roditore sieri SPF, ha superato il 99%, il betwee corrispondenza generalen ELISA e MFIA eseguita noto sieri positivi e negativo noto era superiore al 95%. In sintesi, questi risultati hanno dimostrato che MFIA multiplex è una buona alternativa al singleplex ELISA, ed è adatto per la sua destinazione d&#39;uso, ovvero in sierosorveglianza routine delle colonie di animali da laboratorio.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

Al fine di garantire la qualità dei modelli animali utilizzati nella ricerca biomedica, abbiamo sviluppato una serie di strategie di sperimentazione e dei metodi diagnostici per determinare se gli animali sono stati esposti a accidentali agenti infettivi (virus, micoplasmi, e altri microrganismi esigenti). Infezioni di animali immunocompetenti sono generalmente transitori, ma le risposte anticorpali sierici infezione spesso possono essere rilevate entro giorni o settimane e persistono per tutta la vita dell&#39;ospite. La sierologia è il metodo diagnostico primario attraverso il quale vengono monitorati animali da laboratorio. Storicamente la indiretto enzyme-linked test immunoenzimatico (ELISA) è stato il principale metodo di screening per sierosorveglianza. L&#39;ELISA è eseguita come singleplex, in cui uno microbica reazione antigene-anticorpo è misurato per pozzetto. In confronto la MFIA viene eseguita come saggio multiplex. Dal momento che le microsfere sono in 100 set di colori distinti, fino a 100 diversi test possono essere eseguiti Simultanogni cambio in una micropiastra solo bene. Questa innovazione diminuisce la quantità di siero, reagenti e prodotti monouso necessarie per il test di routine, aumentando la quantità di informazioni ottenute da un singolo test ben. Inoltre, siamo in grado di integrare molteplici sfere di controllo interno per verificare l&#39;idoneità del campione e sistema e quindi garantire l&#39;accuratezza dei risultati. Questi includono il controllo di tessuti e IgG anti-immunoglobulina specie di prova del siero (αIg) rivestite insiemi di sferette per valutare l&#39;idoneità del campione. Come in ELISA e IFA, il controllo di tessuto rileva legame non specifico di immunoglobulina sierica. Il controllo αIg (siero di controllo) conferma che il siero è stato aggiunto e contiene una concentrazione sufficiente di immunoglobuline IgG, mentre la sfera di controllo (idoneità del sistema di controllo), ricoperti di siero di immunoglobuline specie, dimostra che i reagenti marcati e Luminex lettore funzionino correttamente.

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Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Utilizzo di microsfere Luminex Corporation xMAP tecnologia, abbiamo sviluppato il immunoenzimatico Multiplexed fluorimetrico (MFIA) per sierosorveglianza di varie specie di animali da laboratorio. Il MFIA è un microarray sospensione dove antigene, controllo di tessuto o immunoglobuline sono legati covalentemente a microsfere di polistirene codice colore. Il metodo di prova MFIA così come i vari argomenti di risoluzione dei problemi è indirizzata.

Multiplex fluorimetrico Metodologia di test immunoenzimatico e risoluzione dei problemi

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

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