Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
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여기에 제시된 연구는 찰스 강 (Charles River)에 의해 지원되었다.

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	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

찰스 강 (Charles River) 래드, 동물 혈청학 시험 서비스와 시약의 주요 공급자에 대한 모든 작가 작동합니다.

MFIA 테스트 과정은 전통적인 singleplex 테스트보다 장비와 작은 샘플 및 시약 볼륨을 필요로하는, 매우 효율적입니다. 멀티 플렉스 시스템의 기능은 사용자에게 실험실 동물에 공통 에이전트의 여러 변종 또는 serotypes (즉, Coronavirus, parvoviruses 등)를 동시에 상영 할 수있는 유연성을 제공합니다. 이것은 또한 관심을 (예 : 특정 바이러스의 가족)의 영역에 따라 맞춤 비드 패널을 설계하기 위해 우리가 할 수 있으며 크린 시토 킨 및 기타 생체 분자 등의의 심사 다른 유형에 적용 할 수 있습니다. 또한, 우리가 샘플 및 시스템 적합성을 확인하기 위해 몇 가지 내부 통제의 assays를 통합함으로써 결과의 정확성을 보장 할 수 있습니다. 이러한 조직 제어 및 샘플 적합성을 평가하기 위해 IgG 방지 테스트 혈청 종 면역 글로불린 (αIg) 코팅 구슬 세트가 포함되어 있습니다. 조직 제어 구슬은 혈청 면역 글로불린의 비 특정 바인딩과 αIg 비드 제어 확인을 감지그 혈청을 추가하고 충분한 면역 글로불린 농도를 포함하고 있습니다. 혈청 종 면역 글로불린으로 코팅 다른 컨트롤 구슬은, 라벨 시약 및 분석 리더가 제대로 작동하고 있는지 보여줍니다. 기타 상업적으로 이용 가능한 멀티 플렉스 형식 serologic의 assays (예 : MicroArrays, ImmunoComb)는 결과 확인이 동일한 수준을 제공하지 않을 수도 있습니다. 이전 retesting에 대한 분석 실패의 가능한 소스를 좁힐 수있는 능력은 조사관 시간과 물질을 절약 할 수 있습니다. MFIA의 중요한 측면은 실패 샘플을 반복하기 전에 확인해야합니다. 검정은 주위 온도에서 실시되어 있기 때문에이 실험실 온도가 약 27 것을 확인해야합니다 ° C ± 2 ° C, 높은 온도가 컨트롤과 샘플 예상 점수보다 낮은 될 수 있습니다. 세탁은 아마도 분석에서 가장 중요한 단계입니다. 테스트 판이 제대로 씻어되어 일지, blotted 및 제거 할 수 있습니다 resuspended낮은 비드 카운트 (누적 구슬로 인해) 또는 부족 시약 추가 (테스트 판 필터 아래에서 wicking에 의해 손실)으로 인한 샘플링 오류의 대부분. 우리는 정기적으로 분석 당 25 구슬 (에이전트)를 계산하고 또한 접시 이상 읽기 시간에 이끌 비즈 높은 수를 계산하여 결과에 통계적 차이를 발견 없습니다. 우리는 알려진 긍정적이고 부정적인 혈청 샘플을 다수의 테스트하여 진단 정확성, 재현성 및 견고성을 입증하기 위해 일반적으로 사용되는 실험실 동물의 여러 종 (마우스, 쥐, 햄스터, 기니 돼지와 토끼)에 MFIA 종합 검증 연구를 수행하고,이 자신의 엘리사, IFA와 MFIA 결과를 비교. MFIA의 검출 한계 (즉, 표준 면역 혈청 적정 종점)에 비교했고, 경우에 해당 엘리사의 사람들, 능가. SPF 쥐 커로 측정 진단 특이성은 99 % 초과, 전체 통신 betweeN 엘리사와 MFIA 95 % 이상이었다 알려져 긍정적 알려진 부정적인 커 수행. 요약이 결과는 멀티 플렉스 MFIA는 singleplex 엘리사에게 좋은 대체하며, 실험실 동물 식민지의 일상 serosurveillance에서의 용도, 즉에 적합한 것을 증명.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

생물 의학 연구에 사용되는 동물 모델의 품질을 보장​​하기 위해 우리는 동물 우발적 인 전염성 대리인 (mycoplasma 바이러스, 및 기타 까다로운 미생물)에 노출 된 경우 결정하기 위해 진단 테스트 전략 및 방법의 수를 개발했습니다. 면역 적격 동물의 감염은 일반적으로 과도 있으며, 아직 감염 혈청 항체 반응은 종종 주 일 이내에 감지 할 수 있으며 호스트의 수명이 다할 때까지 유지됩니다. 혈청학은 실험실 동물 모니터링하는이 기본 진단 방법입니다. 역사적으로 간접 효소 연결된 면역 분석 (엘리사)는 serosurveillance의 주요 심사 방법이었습니다. 엘리사는 하나 미생물 항원 항체 반응은 당 잘 측정되는, singleplex으로 수행됩니다. 비교 MFIA은 멀티 플렉스 분석으로 수행됩니다. 마이크로 100 고유 한 색상 세트에 온 이후, 많은 백 등 다양한 assays는 simultan을 수행 할 수 있습니다eously 하나의 microplate에 잘. 이 혁신은 물론 하나의 실험에서 얻은 정보의 양을 증가시키는 동시에 일상적인 테스트에 필요한 혈청, 시약 및 disposables의 양을 감소시킵니다. 또한, 샘플 및 시스템 적합성을 확인하기 위해 여러 내부 통제 비즈를 통합함으로써 결과의 정확성을 보장 할 수 있습니다. 이러한 조직 제어 및 샘플 적합성을 평가하기 위해 IgG 방지 테스트 혈청 종 면역 글로불린 (αIg) 코팅 구슬 세트가 포함되어 있습니다. 엘리사와 IFA에서와 같이, 조직 제어는 혈청 면역 글로불린의 비 특정 바인딩을 감지합니다. αIg 제어 (세럼 컨트롤)은 혈청이 추가되었습니다 확인하고 혈청 종 면역 글로불린으로 코팅 IgG 제어 구슬 (시스템 적합성 컨트롤), 레이블 시약 및 Luminex 독자가 제대로 작동을 증명하는 동안 충분한 면역 글로불린 농도가 포함되어 있습니다.

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Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Luminex Corporation의 xMAP의 microsphere 기술을 사용, 우리는 다양한 실험실 동물 종의 serosurveillance에 대한 다중 Fluorometric 면역 분석법 (MFIA)를 개발했습니다. MFIA는 항원, 조직 제어 또는 면역 글로불린이 covalently 색으로 구분되는 폴리스티렌 마이크로에 연결되어 정지 microarray입니다. MFIA 테스트 방법뿐만 아니라 다양한 문제 해결 항목은 해결됩니다.

멀티 플렉스 Fluorometric 면역 분석법 테스트 방법론 및 문제 해결

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

세포 배양의 유도와 Hypoxia의 시험

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연구

생물학

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

단지 샘플의 특정 단백질 글리코 실화의 다중 높은 처리량 프로파일을위한 화학을 차단 항체 Microarray

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Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

중합 효소 사슬 반응 : 기본 프로토콜 플러스 문제 해결 및 최적화 전략

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기능화 비스 - 펩타이드의 고상 합성은 방법론 &quot;을 안전 잡아라&quot;사용

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Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

다중 Chemostat 배열의 설계 및 사용

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A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

Electrochemiluminescence의 면역에 의한 혈청 심장 마이 오신 결합 단백질-C의 결정에 대한 민감하고 구체적인 정량 방법

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Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

멀티 플렉스 애플리케이션을위한 형광 단백질 유전자 바코드

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

멀티 플렉스 면역 조직 화학적 염색 및 멀티 스펙트럼 영상을 사용하여 단백질 발현 및 공동 현지화의 정량

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

절차 및 자동화 된 모 세관 전기 이동 기반 Immunoassay 방법에 대 한 중요 한 최적화 전략

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...