Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Исследования, представленные здесь была поддержана Charles River.

<ol>
	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

Все авторы работы Charles River рад, основным поставщиком животных серологические тестирования и реагентов.

Процесс тестирования MFIA очень эффективно, требуется меньше оборудования и меньшие объемы реагента и образца, чем традиционные тесты singleplex. Функциональность мультиплекс система дает пользователю возможность экране одновременно для нескольких штаммов или серотипов общих агентов в лабораторных грызунов (например, коронавирус, парвовирусов и т.д.). Это также позволяет нам проектировать настроенных борта панели на основе области интересов (т.е. конкретной семьи вируса) и адаптируется к скрининга других типов биомолекул, в том числе цитокинов и других биомаркеров. Кроме того, она позволяет включать несколько внутренних тестов контроля для проверки образца и пригодности системы и тем самым обеспечить точность результатов. Они включают в себя управление ткани и IgG анти-тест сывороточных иммуноглобулинов видов (αIg) покрытием борта наборы для оценки пригодности образца. Ткани контроля борта обнаруживает неспецифического связывания сывороточного иммуноглобулина и контроля αIg шарик подтверждает, что сыворотка была добавлена ​​и содержит достаточной концентрации иммуноглобулина. Другой контроля шарик, покрытый сывороточных иммуноглобулинов видов, показывает, что меченые реагенты и анализа читатель функционируют должным образом. Другие коммерчески доступные мультиплекс формата серологические тесты (т.е. микрочипы, ИммуноКомб) не может предложить тот же уровень результатов подтверждения. Возможность сузить круг возможных источников анализа отказа до повторного тестирования может помочь следователю сэкономить время и материалы. Критические аспекты MFIA должны быть подтверждены перед повторением неудачного образца. Так как анализ проводится при температуре окружающей среды следует убедиться в том, что лаборатория температура составляет около 27 ° C ± 2 ° C, более высокая температура может привести к снижению, чем ожидалось, показатели для контроля и образцов. Стиральные является, пожалуй, самым важным шагом в анализе. Страхование что тест пластины правильно мыть, уничтожил и ресуспендировали может устранитьПодавляющее большинство ошибок выборки в связи с низким количеством шарик (в связи с агрегированной бусины) или недостаточно того реагента (потеряли влагу из теста пластины фильтра внизу). Мы регулярно рассчитывать 25 бусин в анализе (агент) и не обнаружили статистической разницы в результатах, считая большее количество шариков, которые также могут привести к более длительному времени для чтения пластины. Мы провели комплексные исследования проверки MFIA на несколько видов наиболее часто используемых лабораторных животных (мыши, крысы, хомяка, морской свинки и кролика), чтобы продемонстрировать диагностическую точность, воспроизводимость и надежность путем тестирования большого числа известных положительных и отрицательных образцах сыворотки и сравнивая их ELISA, IFA и MFIA результаты. Предел обнаружения (например, стандартные иммунной сыворотки концов титрование) из MFIA были сопоставимы, а в некоторых случаях превзошли те, соответствующего ELISA. Диагностическая специфичность, измеренная с SPF грызунов сыворотки, превысила 99%, общая betwee соответствияп ИФА и MFIA осуществляется на известные положительные и отрицательные сыворотки известные было больше, чем 95%. В целом, эти результаты доказали, что мультиплекс MFIA является хорошим заместителя singleplex ELISA, и пригоден для использования по назначению, т.е. в обычной серологического колоний лабораторных животных.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

Для обеспечения качества животной модели, используемые в биомедицинских исследований мы разработали ряд диагностических стратегий тестирования и методов, чтобы определить, если животные были подвержены случайным инфекционные агенты (вирусы, микоплазмы и других прихотливых микроорганизмов). Инфекции иммунокомпетентных животных, как правило, преходяще, но сыворотке антител к инфекции часто могут быть обнаружены в течение нескольких дней до нескольких недель и сохраняется на протяжении всей жизни хозяина. Серология является основной диагностической методологии лабораторных животных, которые контролируются. Исторически косвенные иммуноферментного анализа (ИФА) была основным методом скрининга для серологического. ELISA выполняется как singleplex, в которых один микробной реакции антиген-антитело измеряется на лунку. По сравнению MFIA выполняется как мультиплексированных анализа. Поскольку микросферы пришел в 100 различных наборов цветов, целых 100 различных анализов могут быть выполнены Simultaneously в одну лунку. Это новшество уменьшает количество сыворотки, реагенты и расходные материалы необходимые для рутинного тестирования в то время как увеличение количества информации, полученной от одного теста хорошо. Кроме того, мы можем включить несколько внутренних бисером контроля для проверки образца и пригодности системы и тем самым обеспечить точность результатов. Они включают в себя управление ткани и IgG анти-тест сывороточных иммуноглобулинов видов (αIg) покрытием борта наборы для оценки пригодности образца. Как и в ИФА и РИФ, ткани управления обнаруживает неспецифического связывания сывороточных иммуноглобулинов. Контроль αIg (контроль сыворотки) подтверждает, что сыворотка была добавлена ​​и содержит достаточной концентрации иммуноглобулинов IgG, в то время как контроль шарик (контроль пригодности системы), покрытые сывороточных иммуноглобулинов видов, показывает, что меченые реагенты и Luminex читателя функционируют должным образом.

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Использование Xmap микросфер Luminex корпорации технологии, мы разработали Мультиплексированный Флуорометрический иммуноферментного анализа (MFIA) для серологического различных видов лабораторных животных. MFIA представляет собой суспензию микрочипов, где антиген, управление ткани или иммуноглобулины, которые ковалентно связаны с цветными полистирольных микросфер. Метод MFIA тестирования, а также различные важные темы рассматриваются.

Мультиплексированный Флуорометрический Методология тестирования иммунологического анализа и устранение неисправностей

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Индукция и тестирование Гипоксия в культуре клеток

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

Химически заблокирован антител Microarray для мультиплексный высокой пропускной профилирования конкретных гликозилирования белков в сложных образцов

 In this study, we describe an effective protocol for use in a multiplexed high-throughput antibody microarray with glycan binding protein detection that ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

Полимеразной цепной реакции: основные протокол Plus Устранение неполадок и оптимизация стратегии

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Твердофазный синтез функционализированных Бис-пептида Использование «Безопасность Поймать« Методология

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

Разработка и использование Мультиплексированный массивы хемостата

Chemostats are continuous culture systems in which cells are grown in a tightly controlled, chemically constant environment where culture density is ...

A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

Чувствительностью и специфичностью Количественный метод определения Сыворотка Сердечная Миозина связывающий белок-C по электрохемилюминесценцию иммуноферментного

Biomarkers are becoming increasingly more  important in clinical decision-making, as well as basic science. Diagnosing  myocardial infarction (MI) is ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

Руководство по современной количественной Люминесцентная Вестерн-блоттинга с устранения неисправностей стратегий

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

Генетический штрих кода с флуоресцентных белков для мультиплексированных приложений

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Количественное экспрессии белка и совместной локализации Использование Multiplexed иммуногистохимическое окрашиванием и мультиспектральных визуализации

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

Процедура и ключей оптимизации стратегии для автоматизированной капиллярного электрофореза на основе иммуноферментного анализа метода

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...