Name: multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting
Uploaded: 2011-12-12T13:00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Burada sunulan araştırma Charles River tarafından desteklenmiştir.

<ol>
	<li>Jacobson, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+validation+of+diagnostic+assays+for+infectious+diseases.">Principles of validation of diagnostic assays for infectious diseases.</a> Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. , 8-15 (1996).</li><li>Wright, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+standards+for+test+methods+and+reference+sera+for+diagnostic+tests+for+antibody+detection.">International standards for test methods and reference sera for diagnostic tests for antibody detection.</a> Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 17 (2), 527-533 (1998).</li><li>Pepe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction. , (2003).</li><li>Barr, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+and+interpretation+of+diagnostic+tests+for+feline+immunodeficiency+virus+infection.">Comparison and interpretation of diagnostic tests for feline immunodeficiency virus infection.</a> J. Am. Vet. Med. Assoc. 199, 1377-1381 (1991).</li></ol>

Charles River RADS, hayvan seroloji test hizmetleri ve reaktifler önemli bir sağlayıcısı için tüm yazarlar iş.

MFIA test süreci geleneksel singleplex testlerine göre daha az ekipman ve küçük numune ve reaktif hacimlerini gerektiren, son derece verimlidir. Multipleks sisteminin işlevselliği kullanıcı laboratuvar kemirgenler ortak ajanların birden fazla suşları veya serotipler (yani Coronavirüs, parvovirüsler vb) için eş zamanlı olarak taranması için esneklik sağlar. Bu da faiz (yani belirli virüs ailesi) alanında dayalı özelleştirilmiş boncuk paneller tasarımı, bize sağlar ve sitokinler ve diğer biyobelirteçlerin gibi biyomoleküllerin tarama diğer türleri uyarlanabilir. Buna ek olarak, bize örnek sistem ve uygunluk doğrulamak için çeşitli iç kontrol deneyleri birleştirmek ve böylece sonuçlarının doğruluğunu sağlamak için olanak sağlar. Bu doku, kontrol ve numune uygunluğunu değerlendirmek için IgG anti-test serumu türler immunglobulin (αIg) kaplı boncuk seti bulunmaktadır. Bir doku kontrol boncuk serum immunoglobulin spesifik olmayan bağlanma ve αIg boncuk kontrol teyit algılarserum ilave edilir ve yeterli bir immünoglobülin konsantrasyon içermemektedir. Serum immünglobulin türleri ile kaplı diğer bir kontrolü boncuk, etiketli reaktifler ve tahlil okuyucu düzgün çalıştığını gösteriyor. Diğer ticari multipleks biçimi serolojik testler (yani microarrays, ImmunoComb) sonucu teyit Bu aynı düzeyde satışa sunmamış olabilir. Önceden deneye için tahlil başarısızlık olası kaynak daraltmak için yeteneği bir araştırmacı zaman ve malzeme tasarrufu yardımcı olabilir. MFIA Kritik yönlerini başarısız bir örnek tekrarlanmadan önce teyit edilmelidir. Tahlil çevre sıcaklığında gerçekleştirilmektedir yana laboratuar sıcaklığında yaklaşık 27 olduğunu teyit edilmelidir ° C ± 2 ° C, daha yüksek sıcaklıklar kontrol ve numune için beklenen ölçüme göre daha düşük olmasına yol açan olabilir. Yıkama belki tayininde en önemli adımdır. Test plakası düzgün yıkanmış olduğundan sigorta, lekelenen ve ortadan kaldırabilir tekrar süspanseDüşük boncuk sayısı (toplu boncuk nedeniyle) veya yetersiz reaktif ekleme (testi plaka filtresi alt dışarı ıslanma tarafından kayıp) nedeniyle örnekleme hataları büyük çoğunluğu. Biz rutin tahlil başına 25 boncuk (ajan) saymak ve ayrıca plaka için uzun bir okuma zaman götürecek boncuk yüksek sayarak sonuçları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulduk. Biz bilinen pozitif ve negatif serum örneklerinde çok sayıda test ederek tanısal doğruluk, tekrarlanabilirlik ve sağlamlık göstermek için sık kullanılan laboratuar hayvanlarının çeşitli türler (Fare, Sıçan, hamster, kobay ve tavşan) üzerinde MFIA kapsamlı validasyon çalışmaları yapılmıştır ve adres Onların ELISA, IFA ve MFIA sonuçları karşılaştırarak. MFIA ve tespit limitleri (örneğin, standart immün serum titrasyon bitiş noktası) karşılaştırılabilir ve bazı durumlarda ilgili ELISA olanlar aştı. SPF kemirgen sera ile ölçülen Teşhis özgüllük,% 99 aştı; genel yazışmalar between ELISA ve MFIA% 95 daha fazlaydı bilinen pozitif ve bilinen negatif kontrol serumları uygulandı. Özetle, bu sonuçlar multipleks MFIA singleplex ELISA için iyi bir alternatif olduğunu ve laboratuvar hayvanı kolonileri rutin serosurveillance kullanım amacına, yani için uygun olduğunu kanıtladı.

multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting

Biyomedikal araştırmalarda kullanılan hayvan modellerinin kalitesini sağlamak için biz hayvanlar adventif enfeksiyöz ajanlar (mycoplasma virüsler, ve diğer titiz mikroorganizmalar) maruz kalmış olmadığını belirlemek için tanısal test stratejileri ve yöntemleri bir dizi geliştirdik. Immünkompetan hayvanların Enfeksiyonlar genellikle geçicidir, henüz enfeksiyona serum antikor yanıtları genellikle hafta için gün içinde tespit edilebilir ve konağın ömrü boyunca devam etmektedir. Seroloji laboratuvar hayvanları izlenmektedir hangi birincil tanısal yöntemdir. Tarihsel dolaylı enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) serosurveillance için temel tarama yöntemi olmuştur. ELISA bir mikrobik antijen-antikor reaksiyonu başına iyi ölçüldüğü, bir singleplex olarak gerçekleştirilir. Buna karşılık MFIA bir çoklanmış tahlil olarak gerçekleştirilir. Mikroküreler 100 farklı renk kümeleri gelir bu yana, 100 kadar farklı deneyler eş zamanlı olarak yapılabilireously tek bir mikroplak iyi. Bu yenilik de, tek bir testten elde edilen bilgi miktarını artırırken rutin testler için gerekli serum, reaktifler ve disposables miktarını azaltır. Buna ek olarak, örnek sistem ve uygunluk doğrulamak için birden fazla iç kontrol boncuk birleştirmek ve böylece sonuçlarının doğruluğunu sağlamak mümkündür. Bu doku, kontrol ve numune uygunluğunu değerlendirmek için IgG anti-test serumu türler immunglobulin (αIg) kaplı boncuk seti bulunmaktadır. ELISA ve IFA içinde olduğu gibi, doku ve serum immunoglobulin spesifik olmayan bağlanma tespit eder. ΑIg kontrol (serum kontrol) serum eklendi onaylar ve serum immünglobulin türleri ile kaplı IgG kontrol boncuk (Sistem uygunluğu kontrol), etiketli reaktifler ve Luminex okuyucu düzgün çalıştığını gösteriyor ise yeterli immünoglobulin konsantrasyonu içerir.

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting at JoVE.com

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

Luminex Corporation Xmap mikroküre teknolojisini kullanarak, çeşitli laboratuvar hayvanı türlerinin serosurveillance için Multiplexed Florometrik immunoassay (MFIA) geliştirdik. MFIA antijeni, doku kontrolü veya immünglobulin kovalent renk kodlu polistiren mikroküreler bağlantılı bir süspansiyon mikroarray olduğunu. MFIA test yöntemi hem de çeşitli giderme konularını ele almaktadır.

Multiplexed Florometrik immunoassay Test Metodolojisi ve Sorun Giderme

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Hücre Kültürü ve Hipoksi Test İndüksiyon

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray

 In this study, we describe an effective protocol for use in a multiplexed high-throughput antibody microarray with glycan binding protein detection that ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

Polimeraz Zincir Reaksiyonu: Temel Protokol Plus, Sorun ve Optimizasyon Stratejileri

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Bir Fonksiyonlu Bis-Peptid Katı Faz Sentezi Metodolojisi &quot;Güvenlik&quot; Catch Kullanımı

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

Multiplexed kemostat Diziler Tasarımı ve Kullanımı

Chemostats are continuous culture systems in which cells are grown in a tightly controlled, chemically constant environment where culture density is ...

A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

Elektrokemiluminesan immunoassay Serum Kardiyak Miyozin Bağlayıcı Protein-C belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi

Biomarkers are becoming increasingly more  important in clinical decision-making, as well as basic science. Diagnosing  myocardial infarction (MI) is ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

Sorun Giderme Stratejileri Modern Kantitatif Floresan Western Blot A Guide

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

Multiplexed Uygulamaları için Floresan Proteinleri ile Genetik Barkodlama

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Çoklanmış Immuno-histokimyasal boyanması ve Multispektral Görüntüleme kullanma Protein Ekspresyonu ve Co-lokalizasyon Kantifikasyonu

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

Yordam ve anahtar optimizasyon stratejileri için bir otomatik Kapiler elektroforetik tabanlı Immunoassay yöntemi

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...