Name: intravital imaging of the mouse popliteal lymph node
Uploaded: 2012-02-08T12:00:00
Duration: 8 min 41 s
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यह काम - NCI 1R01CA154656, 1R21AI092299 NIAID, कैंसर अनुसंधान संस्थान, सेंट Baldrick फाउंडेशन, दाना फाउंडेशन, गेबरियल एन्जिल फाउंडेशन, और अमेरिका की हुंडई &quot;आशा पर पहियों&quot; कार्यक्रम मोटर्स से अनुदान द्वारा समर्थित है.

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	<li>Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-Cell+activation+by+dendritic+cells+in+the+lymph+node:+lessons+from+the+movies.">T-Cell activation by dendritic cells in the lymph node: lessons from the movies.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 675-684 (2008).</li><li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+friends+in+out-of-the-way+places:+how+cells+of+the+immune+system+get+together+and+how+they+conduct+their+business+as+revealed+by+intravital+imaging.">Making friends in out-of-the-way places: how cells of the immune system get together and how they conduct their business as revealed by intravital imaging.</a> Immunol. Rev. 221, 163-181 (2008).</li><li>Huang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+the+landscape+of+in+vivo+immunity:+insights+from+dynamic+in+situ+imaging+of+secondary+lymphoid+tissues.">Illuminating the landscape of in vivo immunity: insights from dynamic in situ imaging of secondary lymphoid tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li><li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-recognition+promotes+the+foreign+antigen+sensitivity+of+naive+T+lymphocytes.">Self-recognition promotes the foreign antigen sensitivity of naive T lymphocytes.</a> Nature. 420, 429-434 (2002).</li><li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+role+of+self-recognition+in+T+cell+responses+to+foreign+antigen.">On the role of self-recognition in T cell responses to foreign antigen.</a> Immunol. Rev. 191, 97-106 (2003).</li><li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone.">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li><li>Celli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoding+the+dynamics+of+T+cell-dendritic+cell+interactions+in+vivo.">Decoding the dynamics of T cell-dendritic cell interactions in vivo.</a> Immunol. Rev. 221, 182-187 (2008).</li><li>Mempel, T. R., Junt, T., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rulers+over+randomness:+stroma+cells+guide+lymphocyte+migration+in+lymph+nodes.">Rulers over randomness: stroma cells guide lymphocyte migration in lymph nodes.</a> Immunity. 25, 867-869 (2006).</li><li>Worbs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCR7+ligands+stimulate+the+intranodal+motility+of+T+lymphocytes+in+vivo.">CCR7 ligands stimulate the intranodal motility of T lymphocytes in vivo.</a> J. Exp. Med. 204 (3), 489-495 (2007).</li><li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=byways+and+breadcrumbs:+directing+lymphocyte+traffic+in+the+lymph+node.">byways and breadcrumbs: directing lymphocyte traffic in the lymph node.</a> Trends Immunol. 28, 346-352 (2007).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases.">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues.">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li><li>Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomous+T+cell+trafficking+examined+in+vivo+with+intravital+two-photon+microscopy.">Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).</li><li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy:+visualizing+immunity+in+context.">Intravital microscopy: visualizing immunity in context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li><li>von Andrian, U. H., Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homing+and+cellular+traffic+in+lymph+nodes.">Homing and cellular traffic in lymph nodes.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 867-878 (2003).</li><li>Bousso, P., Robey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+CD8++T+cell+priming+by+dendritic+cells+in+intact+lymph+nodes.">Dynamics of CD8+ T cell priming by dendritic cells in intact lymph nodes.</a> Nat. Immunol. 4, 579-585 (2003).</li><li>Castellino, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8++T+cells+to+sites+of+CD4++T+cell-dendritic+cell+interaction.">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li><li>Halin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking.">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 581-603 (2005).</li><li>Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrafollicular+activation+of+lymph+node+B+cells+by+antigen-bearing+dendritic+cells.">Extrafollicular activation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.</a> Science. 312, 1672-1676 (2006).</li><li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+extended+vision+for+dynamic+high-resolution+intravital+immune+imaging.">An extended vision for dynamic high-resolution intravital immune imaging.</a> Semin. Immunol. 17, 431-441 (2005).</li></ol>

लेखकों का खुलासा कुछ भी नहीं है.

Vivo में गतिशील सेलुलर व्यवहार के अध्ययन में एक बढ़ती रुचि के द्वारा स्वस्थानी इमेजिंग तकनीक, विशेष रूप से 2P एल एस एम, में उच्च संकल्प में हाल के अग्रिमों के साथ है. एक जीवित माउस के जानुपृष्ठीय एलएन पर 4D इमेजिंग तकनीक undisrupted सूक्ष्म वातावरण ऊतक के भीतर प्रतिरक्षा कोशिकाओं की गतिशील व्यवहार में इस तरह के विश्लेषण की अनुमति देता है. कई पूरे दृश्य स्पेक्ट्रम फैले डिटेक्टरों के साथ 2P - एल एस एम का उपयोग एकाधिक सेल आबादी के साथ - साथ इमेजिंग डेटा संग्रह परमिट. यह अब vivo में सेल विशिष्ट फ्लोरोसेंट संवाददाता (जैसे Ubiquitin EGFP, आरएफपी, या eCFP) के विभिन्न लेबल सेल कार्बनिक फ्लोरोसेंट सेल रंगों का उपयोग कर आबादी के दत्तक हस्तांतरण का उपयोग के साथ संयुक्त चूहों में के उपयोग के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है (जैसे CFSE , SNARF-1, और ट्रैकर ऑरेंज सेल) एलएन भीतर सेलुलर तंत्र और समारोह की जांच के. इसके अलावा विभिन्न नज़र रखी ग के बीच बातचीत के प्रत्यक्ष प्रेक्षण के लिएपक्ष आबादी, मल्टीप्लेक्स इमेजिंग डाटासेट व्यावसायिक रूप से उपलब्ध इमेजिंग प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर प्रोग्राम (जैसे Imaris, BitPlane इंक) के लिए आगे सेल व्यवहार और समारोह को स्पष्ट करने के साथ आगे के विश्लेषण से गुजरना कर सकते हैं. संभावनाओं की एक विस्तृत सरणी के लिए सेलुलर बातचीत vivo में और सिलिको तकनीक में इन का उपयोग तंत्र का अध्ययन करने के लिए मौजूद है. प्रयोगात्मक दृष्टिकोण की मुख्य सीमा यहाँ वर्णित तकनीकी जटिलता सर्जरी दृष्टिकोण में निहित है. इस तकनीक प्रासंगिक शारीरिक रचना और सटीक तकनीकी प्रक्रियाओं और के रूप में इस प्रोटोकॉल के लिए आवश्यक कौशल के साथ परिचित बनने के लिए कठोर प्रशिक्षण की आवश्यकता है. आगे उलझी कारकों एलएन अन्वेषण के दौरान ऊतकों को नुकसान को कम करने में कठिनाई, इमेजिंग दौरान ऊतक स्थिरता का अनुकूलन, और पहले एलएन के लिए थर्मल और लेजर चोट को रोकने और इमेजिंग प्रयोग के दौरान शामिल हैं. इन कारकों में से किसी भी गड़बड़ी से कम इष्टतम लसीका में परिणाम होगाocyte गतिशीलता और इसलिए इमेजिंग डेटा का विश्लेषण करती है जिसके परिणामस्वरूप की उचित व्याख्या के साथ हस्तक्षेप करेगा.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; अभिकर्मक</strong</td&gt;<td<strong&gt; कंपनी</strong</td&gt;<td<strong&gt; सूचीपत्र संख्या</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurane, खासियत</td&gt;<td&gt; बैक्सटर हेल्थकेयर निगम</td&gt;<td&gt; 10019-773-60 एनडीसी</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vetbond</td&gt;<td&gt; 3M</td&gt;<td&gt; 1469SB</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdबालों को हटाने लोशन -&gt; नायर</td&gt;<td&gt; नायर</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS, 1X</td&gt;<td&gt; Cellgro</td&gt;<td&gt; 21-040-CV</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; हीटिंग पैड</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; हीटिंग पैड नियंत्रक</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; एयर और हे<sub&gt; 2</sub</td&gt;<td&gt; Airgas</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; तापमान जांच</td&gt;<td&gt; हार्वर्ड उपकरण</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; चिमटी # 5 Dumont</td&gt;<td&gt; विश्व परिशुद्धता उपकरण, इंक</td&gt;<td14,101&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; संदंश, Graefe परितारिका, 7 सेमी घुमावदार</td&gt;<td&gt; विश्व परिशुद्धता उपकरण, इंक</td&gt;<td14,141&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; कैंची</td&gt;<td&gt; Roboz सर्जिकल उपकरण कं, इंक</td&gt;<td&gt; RS-5880</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 100x20 मिमी कांच सेल संस्कृति डिश के कवर</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td70165-102&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td100x20 मिमी polystyrene सेल संस्कृति पकवान की कवर&gt;</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td430,167&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadine समाधान (10% Povidine आयोडीन सामयिक समाधान)</td&gt;<td&gt; पर्ड्यू उत्पाद, एल.पी.</td&gt;<td&gt; 67618-150-08 एनडीसी</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

intravital imaging of the mouse popliteal lymph node

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign antigens from peripheral tissues to prime the adaptive immune response. Juxtaposed between innate and adaptive immune responses, the LN is an ideal site to study immune cell interactions1,2. Lymphocytes (T cells, B cells and NK cells), dendritic cells (DCs), and macrophages comprise the bulk of bone marrow-derived cellular elements of the LN. These cells are strategically positioned in the LN to allow efficient surveillance of self antigens and potential foreign antigens3-5. The process by which lymphocytes successfully encounter cognate antigens is a subject of intense investigation in recent years, and involves an integration of molecular contacts including antigen receptors, adhesion molecules, chemokines, and stromal structures such as the fibro-reticular network2,6-12. 
Prior to the development of high-resolution real-time fluorescent in vivo imaging, investigators relied on static imaging, which only offers answers regarding morphology, position, and architecture. While these questions are fundamental in our understanding of immune cell behavior, the limitations intrinsic with this technique does not permit analysis to decipher lymphocyte trafficking and environmental clues that affect dynamic cell behavior. Recently, the development of intravital two-photon laser scanning microscopy (2P-LSM) has allowed investigators to view the dynamic movements and interactions of individual cells within live LNs in situ12-16. In particular, we and others have applied this technique to image cellular behavior and interactions within the popliteal LN, where its compact, dense nature offers the advantage of multiplex data acquisition over a large tissue area with diverse tissue sub-structures11,17-18. It is important to note that this technique offers added benefits over explanted tissue imaging techniques, which require disruption of blood, lymph flow, and ultimately the cellular dynamics of the system. Additionally, explanted tissues have a very limited window of time in which the tissue remains viable for imaging after explant. With proper hydration and monitoring of the animal's environmental conditions, the imaging time can be significantly extended with this intravital technique. Here, we present a detailed method of preparing mouse popliteal LN for the purpose of performing intravital imaging.

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Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

2-photon माइक्रोस्कोपी में हाल के अग्रिमों वास्तविक समय सक्षम है<em&gt; में</em&gt; पशु मॉडल में जीवित ऊतकों की स्वस्थानी इमेजिंग, जिससे हमारे दोनों शारीरिक और वैकृत शर्तों में सेलुलर व्यवहार की जांच करने की क्षमता को बढ़ाने. यहाँ, हम के लिए में माउस जानुपृष्ठीय लसीका नोड की intravital इमेजिंग प्रदर्शन के लिए आवश्यक तैयारी की रूपरेखा.

माउस जानुपृष्ठीय लसीका नोड के intravital इमेजिंग

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