Name: intravital imaging of the mouse popliteal lymph node
Uploaded: 2012-02-08T12:00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке грантов NCI 1R01CA154656, NIAID 1R21AI092299, НИИ онкологии, Фонд святого Baldrick, в Dana фонда, Габриэль Ангел фонда и Hyundai Motors Америки &quot;Надежда на колесах» программы.

<ol>
	<li>Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-Cell+activation+by+dendritic+cells+in+the+lymph+node:+lessons+from+the+movies.">T-Cell activation by dendritic cells in the lymph node: lessons from the movies.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 675-684 (2008).</li><li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+friends+in+out-of-the-way+places:+how+cells+of+the+immune+system+get+together+and+how+they+conduct+their+business+as+revealed+by+intravital+imaging.">Making friends in out-of-the-way places: how cells of the immune system get together and how they conduct their business as revealed by intravital imaging.</a> Immunol. Rev. 221, 163-181 (2008).</li><li>Huang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+the+landscape+of+in+vivo+immunity:+insights+from+dynamic+in+situ+imaging+of+secondary+lymphoid+tissues.">Illuminating the landscape of in vivo immunity: insights from dynamic in situ imaging of secondary lymphoid tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li><li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-recognition+promotes+the+foreign+antigen+sensitivity+of+naive+T+lymphocytes.">Self-recognition promotes the foreign antigen sensitivity of naive T lymphocytes.</a> Nature. 420, 429-434 (2002).</li><li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+role+of+self-recognition+in+T+cell+responses+to+foreign+antigen.">On the role of self-recognition in T cell responses to foreign antigen.</a> Immunol. Rev. 191, 97-106 (2003).</li><li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone.">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li><li>Celli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoding+the+dynamics+of+T+cell-dendritic+cell+interactions+in+vivo.">Decoding the dynamics of T cell-dendritic cell interactions in vivo.</a> Immunol. Rev. 221, 182-187 (2008).</li><li>Mempel, T. R., Junt, T., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rulers+over+randomness:+stroma+cells+guide+lymphocyte+migration+in+lymph+nodes.">Rulers over randomness: stroma cells guide lymphocyte migration in lymph nodes.</a> Immunity. 25, 867-869 (2006).</li><li>Worbs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCR7+ligands+stimulate+the+intranodal+motility+of+T+lymphocytes+in+vivo.">CCR7 ligands stimulate the intranodal motility of T lymphocytes in vivo.</a> J. Exp. Med. 204 (3), 489-495 (2007).</li><li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=byways+and+breadcrumbs:+directing+lymphocyte+traffic+in+the+lymph+node.">byways and breadcrumbs: directing lymphocyte traffic in the lymph node.</a> Trends Immunol. 28, 346-352 (2007).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases.">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues.">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li><li>Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomous+T+cell+trafficking+examined+in+vivo+with+intravital+two-photon+microscopy.">Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).</li><li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy:+visualizing+immunity+in+context.">Intravital microscopy: visualizing immunity in context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li><li>von Andrian, U. H., Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homing+and+cellular+traffic+in+lymph+nodes.">Homing and cellular traffic in lymph nodes.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 867-878 (2003).</li><li>Bousso, P., Robey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+CD8++T+cell+priming+by+dendritic+cells+in+intact+lymph+nodes.">Dynamics of CD8+ T cell priming by dendritic cells in intact lymph nodes.</a> Nat. Immunol. 4, 579-585 (2003).</li><li>Castellino, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8++T+cells+to+sites+of+CD4++T+cell-dendritic+cell+interaction.">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li><li>Halin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking.">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 581-603 (2005).</li><li>Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrafollicular+activation+of+lymph+node+B+cells+by+antigen-bearing+dendritic+cells.">Extrafollicular activation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.</a> Science. 312, 1672-1676 (2006).</li><li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+extended+vision+for+dynamic+high-resolution+intravital+immune+imaging.">An extended vision for dynamic high-resolution intravital immune imaging.</a> Semin. Immunol. 17, 431-441 (2005).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Последние достижения в высоком разрешении на месте методы визуализации, особенно 2P-LSM, были сопровождается ростом интереса к изучению динамических сотовой поведение в естественных условиях. Техника визуализации 4D на подколенной Л.Н. живой мыши позволяет такие анализы в динамическое поведение иммунных клеток в тканях бесперебойное микро-среды. Использование 2P-МНК с несколькими детекторами, охватывающих весь видимый спектр позволяет одновременно изображения сбора данных нескольких клеточных популяций. Это теперь может быть достигнута за счет использования в естественных условиях клетки конкретного флуоресцентных мышей репортер (например, Убиквитин-EGFP, RFP-или-eCFP) в сочетании с использованием приемных передачи дифференциально помечены клеточных популяций с использованием органических флуоресцентных красителей клеток (например, CFSE , Snarf-1 и ячеек Tracker оранжевый) для изучения клеточных механизмов и функций в LN. В дополнение к прямому наблюдению взаимодействия с дифференциально гусеничныхлокоть населения, мультиплекс данных изображений может подвергаться дальнейшему анализу с помощью коммерчески доступных изображений программное обеспечение для обработки программ (например, Imaris, BitPlane Inc) для дальнейшего выяснения поведения клеток и функции. Широкий спектр возможностей существует для изучения клеточных механизмов взаимодействия с использованием их в естественных условиях и в кремнии методами. Основным ограничением экспериментальный подход, описанный здесь, технической сложности, присущие операции подход. Этот метод требует упорных тренировок, чтобы ознакомиться с соответствующей анатомии и точные технические процедуры и навыки в соответствии с требованиями этого протокола. Еще больше осложняет факторы включают трудности в сведении к минимуму повреждение тканей при исследовании Л.Н., оптимизация ткани стабильность во время съемки, а также предотвращение теплового и лазерного повреждения LN до и во время съемки экспериментов. Возмущение в любой из этих факторов приведет к менее чем оптимальным лимфатическихocyte подвижность и, следовательно, мешают правильной интерпретации изображений в результате анализа данных.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Реагенты</strong</td&gt;<td<strong&gt; О компании</strong</td&gt;<td<strong&gt; Номер по каталогу</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Изофлюран, USP</td&gt;<td&gt; Корпорация Baxter Healthcare</td&gt;<td&gt; NDC 10019-773-60</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vetbond</td&gt;<td&gt; 3M</td&gt;<td&gt; 1469SB</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Наира - лосьон для удаления волос</td&gt;<td&gt; Наира</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS, 1X</td&gt;<td&gt; CellGro</td&gt;<td&gt; 21-040-CV</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Грелки</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Отопительные панели контроллера</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Воздушные и O<sub&gt; 2</sub</td&gt;<td&gt; Airgas</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Датчик температуры</td&gt;<td&gt; Гарвардского аппарата</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Пинцет Дюмон # 5</td&gt;<td&gt; World Precision Instruments, Inc</td&gt;<td&gt; 14 101</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Щипцы, Грефе Iris, 7 см изогнутый</td&gt;<td&gt; World Precision Instruments, Inc</td&gt;<td&gt; 14 141</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ножницы</td&gt;<td&gt; Roboz хирургические инструменты Ко, Inc</td&gt;<td&gt; RS-5880</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Обложка 100x20 мм стеклянной посуде культуры клеток</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 70165-102</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Обложка 100x20 мм полистирола блюдо культуре клеток</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 430167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Бетадин раствор (10% Povidine-йод раствор для наружного применения)</td&gt;<td&gt; Purdue продукты, LP</td&gt;<td&gt; NDC 67618-150-08</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

intravital imaging of the mouse popliteal lymph node

Лимфатические узлы (LNS) являются вторичных лимфоидных органах, которые стратегически расположенных по всему телу, чтобы обеспечить захват и представление чужеродных антигенов из периферических тканей к главному адаптивного иммунного ответа. Сопоставляются между врожденной и адаптивной иммунной реакции, LN является идеальным местом для изучения взаимодействия клеток иммунной 1,2. Лимфоциты (Т-лимфоциты, В-лимфоциты и NK клеток), дендритные клетки (ДК) и макрофаги составляют большую часть костного мозга, полученных клеточных элементов LN. Эти клетки расположены в стратегически Л.Н., чтобы эффективный надзор за себя антигенов и потенциальных чужеродных антигенов 3-5. Процесс, при котором лимфоциты успешно сталкиваются родственные антигенам является предметом интенсивных исследований в последние годы, и включает в себя интеграцию молекулярной контактов, включая антиген рецепторов, молекул адгезии, хемокинов и стромальных структур, таких как фиброзно-ретикулярной сети 2,6-12 . </p&gt; До развития высокого разрешения в режиме реального времени в естественных условиях флуоресцентного изображения, исследователи опирались на статических изображений, которые предлагает только ответы по морфологии, положение и архитектуры. Хотя эти вопросы являются основополагающими в нашем понимании иммунной поведение клетки, внутренние ограничения с этой техникой не позволяет расшифровать анализ лимфоцитов торговли и окружающей среды ключи, которые влияют на динамическое поведение клетки. В последнее время развитие прижизненный двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии (2P-МНК) позволило исследователям для просмотра динамического движения и взаимодействия отдельных клеток в живых LNS на месте 12-16. В частности, мы и другие применили этот метод к изображению сотовой поведения и взаимодействия в подколенной Л.Н., где ее компактные, плотные природа дает преимущество приобретения мультиплексирования данных на большой площади ткани с разнообразными ткани субструктур 11,17-18 . Это яВажно отметить, что эта техника предоставляет дополнительные преимущества за эксплантированных ткани методов визуализации, которые требуют нарушения крови, лимфы и, наконец, клеточной динамики системы. Кроме того, эксплантированных ткани имеют очень ограниченный промежуток времени, в которой ткань остается жизнеспособной для работы с изображениями после эксплантов. При правильной гидратации и мониторинга состояния окружающей среды животных, изображения времени могут быть существенно расширены с этой прижизненной техники. Здесь мы представляем подробный способ приготовления Л. мыши подколенной с целью проведения прижизненного изображения.

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node at JoVE.com

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Последние достижения в области 2-фотонного микроскопа позволило в режиме реального времени<em&gt; В</em&gt; Месте изображений живых тканей на животных моделях, тем самым повышая нашу способность исследовать клеточный поведения и физиологических и патологических состояниях. Здесь мы приводим препараты, необходимые для выполнения прижизненных изображений мыши подколенных лимфатических узлов.

Прижизненные изображения с помощью мыши подколенный лимфатический узел

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Прижизненные микроскопия пахового лимфатического узла

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Экс естественных изображений Т-клеток у мышей фрагменты лимфатических узлов с Широкоугольные и конфокальной Микроскопы

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Murine Superficial Lymph Node Surgery

Поверхностные мышей хирургии лимфатических узлов

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Прижизненное Визуализация Мышь Thymus использованием 2-Фотон микроскопии

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Неинвазивная оптических изображений из лимфатических сосудов от мыши

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Высоко Решено Прижизненные Полосатый-подсветка микроскопия зародышевых центров

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Выделение Мышиный лимфатических узлов стромальных клеток

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Прижизненные микроскопия Визуализация печени следующие<em&gt; Лейшмания</em&gt; Инфекция: оценка печеночного гемодинамики

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Миелоидный Выделение клеток из кожи мышей и Слив лимфатического узла После внутрикожной иммунизации с живой аттенуированной<em&gt; Plasmodium</em&gt; Спорозоиты

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...