Name: analytical techniques for assaying nitric oxide bioactivity
Uploaded: 2012-06-18T12:00:00
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Os autores gostariam de agradecer Hong Jiang, Ph.D. e Deepa Parathasarthy, MPH, BDS para a assistência técnica.

1. Coleta de Sangue Total <ol><li> Coletar sangue venoso de humanos ou de animais experimentais em ELm / tubos contendo EDTA. </li><li> Imediatamente girar sangue em uma centrífuga de bancada a 14.300 rcf (força centrífuga relativa) por 7 minutos para o preparo do plasma e dos glóbulos vermelhos pelota. </li><li> Preparar amostras de plasma para cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e detecção por quimioluminescência (CLD) análise. HPLC: Adicionar 01:01 volume de metanol frio para o plasma, ...

<ol>
	<li>Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+metabolism+and+breakdown.">Nitric oxide metabolism and breakdown.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1411, 273-289 (1999).</li><li>Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+obligatory+role+of+endothelial+cells+in+the+relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+acetycholine.">The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetycholine.</a> Nature. 288, 373-376 (1980).</li><li>Ignarro, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+relaxing+factor+produced+and+released+from+artery+and+vein+is+nitric+oxide.">Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide.</a> Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A. 84, 9265-9269 (1987).</li><li>Feelisch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concomitant+S-,+N-,+and+heme-nitrosylation+in+biological+tissues+and+fluids:+implications+for+the+fate+of+NO+in+vivo.">Concomitant S-, N-, and heme-nitrosylation in biological tissues and fluids: implications for the fate of NO in vivo.</a> FASEB J. 16, 1775-1785 (2002).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+nitric+oxide+levels+in+the+red+cell:+validation+of+tri-iodide-based+chemiluminescence+with+acid-sulfanilamide+pretreatment.">Measurement of nitric oxide levels in the red cell: validation of tri-iodide-based chemiluminescence with acid-sulfanilamide pretreatment.</a> J. Biol. Chem. 281, 26994-27002 (2006).</li><li>Angelo, M., Singel, D. J., Stamler, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+S-nitrosothiol+(SNO)+synthase+function+of+hemoglobin+that+utilizes+nitrite+as+a+substrate.">An S-nitrosothiol (SNO) synthase function of hemoglobin that utilizes nitrite as a substrate.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 8366-8371 (2006).</li><li>Bryan, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bound+NO+in+human+red+blood+cells:+fact+or+artifact.">Bound NO in human red blood cells: fact or artifact.</a> Nitric Oxide. 10, 221-228 (2004).</li><li>Feelisch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Processing+of+Nitrite+in+Hypoxia:+An+Intricate+Interplay+of+Nitric+Oxide-Generating+and+-Scavenging+Systems.">Tissue Processing of Nitrite in Hypoxia: An Intricate Interplay of Nitric Oxide-Generating and -Scavenging Systems.</a> J. Biol. Chem. 283, 33927-33934 (2008).</li><li>Bryan, N. S., Grisham, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+detect+nitric+oxide+and+its+metabolites+in+biological+samples.">Methods to detect nitric oxide and its metabolites in biological samples.</a> Free Radic. Biol. Med. 43, 645-657 (2007).</li><li>Lundberg, J. O., Weitzberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NO+generation+from+inorganic+nitrate+and+nitrite:+Role+in+physiology,+nutrition+and+therapeutics.">NO generation from inorganic nitrate and nitrite: Role in physiology, nutrition and therapeutics.</a> Arch. Pharm. Res. 32, 1119-1126 (2009).</li><li>Lundberg, J. O., Weitzberg, E., Gladwin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nitrate-nitrite-nitric+oxide+pathway+in+physiology+and+therapeutics.">The nitrate-nitrite-nitric oxide pathway in physiology and therapeutics.</a> Nat. Rev. Drug. Discov. 7, 156-157 (2008).</li></ol>

Os métodos descritos aqui para a quantificação de metabólitos do NO relevantes em vários compartimentos biológicos permitirá para o fingerprinting de NO biologia na saúde e na doença que podem ser correlacionados com as medições funcionais de NO pelo endotélio. Estes métodos requerem preparação de amostras simples, com potencial de adaptação para a produção elevada. A quantidade relativa destas moléculas pode ajudar a compreender a produção de NO e sua transformação metabólica num certo número ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> N-etilmaleimida </td><td> Thermo Scientific </td><td> 23030 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7889 </td></tr><tr><td> Ferricianeto de potássio </td><td> Fluka </td><td> 60299 </td></tr><tr><td> HPLC </td><td> Eicom Corp </td><td> ENO-20 </td></tr><tr><td> Autosampler </td><td> Alcott </td><td></td></tr><tr><td> DMT Myograph </td><td> Instrumentos AD </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab </td><td> Instrumentos AD </td><td></td></tr><tr><td> Quimioluminescente </td><td> EcoPhysics </td><td> CLD 88Y </td></tr><tr><td> Centrifugar </td><td> Eppendorf </td><td> 5415D </td></tr><tr><td> A acetilcolina </td><td> Sigma-Aldrich</td><td> A6625 </td></tr><tr><td> R-(-) Fenilefrina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6126 </td></tr></tbody></table>

analytical techniques for assaying nitric oxide bioactivity

O óxido nítrico (NO) é um radical livre diatômico que é extremamente curta duração em sistemas biológicos (menos de 1 segundo no sangue circulante) 1. NO pode ser considerada uma das moléculas de sinalização mais importantes produzidos no nosso corpo, regulando as funções essenciais, incluindo mas não limitado a regulação da pressão arterial, a resposta imune e comunicação neural. Portanto, sua detecção precisa e quantificação, em matrizes biológicas é crucial para entender o papel do NO na saúde e na doença. Com tal meia vida um curto fisiológica de NO, estratégias alternativas para a detecção dos produtos de reacção de NO bioquímica têm sido desenvolvidos. A quantificação dos metabólitos do NO relevantes em vários compartimentos biológicos fornece informação valiosa no que diz respeito ao método in vivo a produção de NO a biodisponibilidade, e metabolismo. Basta provar um único compartimento, tais como sangue ou plasma nem sempre pode fornecer uma avaliação precisa do bo todody NO estado, particularmente em tecidos. A possibilidade de comparar o sangue com tecidos selecionados em animais de experimentação ajudará a ponte entre a ciência básica ea medicina clínica, na medida do utilitário de diagnóstico e prognóstico de NO biomarcadores na saúde e na doença. Portanto, a extrapolação do plasma ou do sangue para os tecidos estado NO específicos de interesse não é mais uma abordagem válida. Como resultado, os métodos de continuar a ser desenvolvido e validado que permitem a detecção e quantificação de NO e NO-produtos afins / metabolitos em múltiplos compartimentos de animais experimentais in vivo. O paradigma estabelecido de NO bioquímica da produção de NO sintases a ativação de guanilato ciclase solúvel (GCs) à oxidação eventual a nitrito (NO 2 -) e nitrato (NO 3 -) pode representar apenas parte de NO de efeitos in vivo. A interacção de metabolitos de NO e NO-derivada com tióis proteicos, aminas secundárias, e metais para formar S-nitrosothióis (RSNOs), N-nitrosaminas (RNNOs), e nitrosilo-heme representam respectivamente cGMP-independentes efeitos de NO e são susceptíveis tão importante como fisiologicamente activação de sGC pelo NO. Uma compreensão verdadeira de NO na fisiologia é derivado a partir de experiências in vivo de amostragem compartimentos múltiplos simultaneamente. O óxido nítrico metodologia (NO) é uma ciência complexa e muitas vezes confuso e o foco de muitos debates e discussão sobre NO bioquímica. A elucidação de novos mecanismos e vias de sinalização envolvendo NÃO depende de nossa capacidade de, especificamente, de forma seletiva e sensível detectar e quantificar todas as informações relevantes e NÃO NO produtos e metabólitos em matrizes biológicas complexas. Aqui, nós apresentamos um método para a análise rápida e sensível de nitrito e nitrato por HPLC, bem como a detecção de NO livre em amostras biológicas utilizando in vitro de quimioluminescência ozono com base com derivitazation química para determinar a fonte molecular de NO, bem como ex vivo comMiografia banho de órgãos.

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Analytical Techniques for Assaying Nitric Oxide Bioactivity

A produção endógena de óxido nítrico (NO) regula uma grande variedade de funções biológicas. Está se tornando cada vez mais claro que a ruptura ou desregulagem de sinalização NO base está envolvida em muitas doenças humanas. Os métodos para quantificar relevante metabólitos podem fornecer novos biomarcadores de diagnóstico ou de prognóstico para a doença humana.

Técnicas Analíticas para ensaiar Bioatividade Óxido Nítrico

Nitric oxide (NO) is a diatomic free radical that is extremely short lived in biological systems (less than 1 second in circulating blood)1. NO may be ...

Research

JoVE Journal

Medicine

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Medicina

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Técnicas de Processamento de Olhos implantados com uma prótese de retina para análise histopatológica localizada

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Experimental and Imaging Techniques for Examining Fibrin Clot Structures in Normal and Diseased States

Técnicas Experimentais e de imagem para o exame de Estruturas do coágulo de fibrina em normais e doentes Unidos

Fibrin is an extracellular matrix protein that is responsible for maintaining the structural integrity of blood clots. Much research has been done on ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Técnicas de processamento Olhos implantados com uma Retinal Prosthesis para localizada análise histopatológica: Parte 2 Epirretiniana implantes com tachas da retina

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Análise otimizada de<em&gt; In Vivo</em&gt; e<em&gt; In Vitro</em&gt; A esteatose hepática

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Synthesis, Characterization, and Application of Superparamagnetic Iron Oxide Nanoprobes for Extrapulmonary Tuberculosis Detection

Síntese, Caracterização e Aplicação de Nanoprobes superparamagnéticos de óxido de ferro para detecção de tuberculose extrapulmonar

A molecular imaging probe comprising superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoparticles and Mycobacterium tuberculosis surface antibody (MtbsAb) was ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Detecção baseada em plaquetas de óxido nítrico no sangue, medindo-se a fosforilação VASP

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Nanopartículas de óxido de ferro revestido de Polyethyleneimine como um veículo para a entrega de RNA de interferência pequeno para macrófagos In Vitro e In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

Ressonância magnética cardíaca para avaliação de suspeita de trombo cardíaco: técnicas convencionais e emergentes

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

Rastreamento de células-tronco mesenchymal rotuladas por óxido de ferro superparamagnético usando ressonância magnética após parto intranasal em um modelo de urina de urina de lesão cerebral traumática

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...