Name: quantification of fungal colonization, sporogenesis, and production of mycotoxins using kernel bioassays
Uploaded: 2012-04-23T13:00:00
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우리는 그들의 기술 지원을 위해 브랜든 Hassett과 카를로스 오르 티즈 감사드립니다. 이 작품은 박사 마이클 Kolomiets에 NSF 교부금 IOB-0544428, IOS-0951272, 그리고 IOS-0925561에 의해 지원, 그리고 식량 농업 USDA의 국립 연구소 (NIFA), AFRI 공장 사육 및 교육 그랜트 # 2010-85117하여 -20539 Drs 있습니다. 세스 머레이, 토마스 Isakeit, 그리고 마이클 Kolomiets.

1. 옥수수 커널 Bioassay <ol><li> 두 주 전에, 문화 28의 감자 덱스 트로 오스 한천 배지 (PDA)에서 곰팡이 병원균 ° C. </li><li> 그들이 bioassay의 튜브의 바닥과 수준, 50 ML 팔콘 튜브의 위치를​​ 누워 있도록 선호 평평 비슷한 크기와 모양으로 커널을 선택합니다. 선택된 커널은 유사한 종자 연령 및 신진 대사 조성을 위해 동일한 환경에서 동시에 생산된 것이어야합니다. </li><li> 6 % 나트륨 차아 염소 산...

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	<li>Tsitsigiannis, D. I., Keller, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxylipins+as+developmental+and+host-fungal+communication+signals.">Oxylipins as developmental and host-fungal communication signals.</a> Trends Microbiol. 15, 109-118 (2007).</li><li>Gao, X., Shim, W. -. B., G&#246;bel, C., Kunze, S., Feussner, I., Meeley, R., Balint-Kurti, P., Kolomiets, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+a+maize+9-lipoxygenase+results+in+increased+resistance+to+fungal+pathogens+and+reduced+levels+of+contamination+with+mycotoxin+fumonisin.">Disruption of a maize 9-lipoxygenase results in increased resistance to fungal pathogens and reduced levels of contamination with mycotoxin fumonisin.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 20, 922-933 (2007).</li><li>Brodhagen, M., Tsitsigiannis, D. I., Hornung, E., Goebel, C., Feussner, I., Keller, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+oxylipin-mediated+cross-talk+in+the+Aspergillus+-+seed+pathosystem.">Reciprocal oxylipin-mediated cross-talk in the Aspergillus - seed pathosystem.</a> Mol. Microbiol. 67, 378-391 (2008).</li><li>Gao, X., Brodhagen, M., Isakeit, T., Brown, S. H., G&#246;bel, C., Betran, J., Feussner, I., Keller, N. P., Kolomiets, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+lipoxygenase+ZmLOX3+increases+susceptibility+of+maize+to+Aspergillus+spp.">Inactivation of the lipoxygenase ZmLOX3 increases susceptibility of maize to Aspergillus spp.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 22, 222-231 (2009).</li><li>Gao, X. Q., Kolomiets, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+lipids+and+oxylipins+are+crucial+signals+in+modulating+mycotoxin+production+by+fungi.">Host-derived lipids and oxylipins are crucial signals in modulating mycotoxin production by fungi.</a> Toxin Rev. 28, 79-88 (2009).</li><li>Mukherjee, M., Kim, J. -. E., Park, Y. -. S., Kolomiets, M. V., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+G+protein+signaling+in+F.+verticillioides+mediate+differential+host-pathogen+responses+on+non-viable+versus+viable+maize+kernels.">Regulators of G protein signaling in F. verticillioides mediate differential host-pathogen responses on non-viable versus viable maize kernels.</a> Mol. Plant Pathol. 12, 479-491 (2011).</li><li>Zheng, M. Z., Richard, J. L., Binder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+rapid+methods+for+the+analysis+of+mycotoxins.">A review of rapid methods for the analysis of mycotoxins.</a> Mycopathologia. 161, 261-273 (2006).</li><li>Bacon, C. W., Bennett, R. M., Hinton, D. M., Voss, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+electron+microscopy+of+Fusarium+moniliforme+within+asymptomatic+maize+kernels+and+kernels+associated+with+equine+leukoencephalomalacia.">Scanning electron microscopy of Fusarium moniliforme within asymptomatic maize kernels and kernels associated with equine leukoencephalomalacia.</a> Plant Dis. 76, 144-148 (1992).</li><li>Munkvold, G. P., Hellmich, R. L., Rice, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fumonisin+concentrations+in+kernels+of+transgenic+Bt+maize+hybrids+and+nontransgenic+hybrids.">Comparison of fumonisin concentrations in kernels of transgenic Bt maize hybrids and nontransgenic hybrids.</a> Plant Dis. 83, 130-138 (1999).</li><li>Sagaram, U. S., Shaw, B. D., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusarium+verticillioides+GAP!,+a+gene+encoding+a+putative+glycolipid-anchored+surface+protein,+participates+in+conidiation+and+cell+wall+structure+but+not+virulence.">Fusarium verticillioides GAP!, a gene encoding a putative glycolipid-anchored surface protein, participates in conidiation and cell wall structure but not virulence.</a> Microbiol. 153, 2850-2861 (2007).</li><li>Shim, W. -. B., Flaherty, J. E., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Fumonisin+B1+biosynthesis+in+maize+germ+and+degermed+kernels+by+Fusarium+verticillioides.">Comparison of Fumonisin B1 biosynthesis in maize germ and degermed kernels by Fusarium verticillioides.</a> J. Food Protect. 66, 2116-2122 (2003).</li><li>Shim, W. -. B., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+fumonisin+B1+biosynthesis+and+conidiation+in+Fusarium+verticillioides+by+a+cyclin-like+(C-type)+gene,+FCC1.">Regulation of fumonisin B1 biosynthesis and conidiation in Fusarium verticillioides by a cyclin-like (C-type) gene, FCC1.</a> Appl. Environ. Micrbiol. 67, 1607-1612 (2001).</li><li>Christensen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Conversation with: Won-Bo Shim. , (2011).</li><li>Shin, J. -. H., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+PPR1+and+PPR2,+genes+encoding+regulatory+subunits+of+protein+phosphatase+2A+in+Fusarium+verticillioides.">Characterization of PPR1 and PPR2, genes encoding regulatory subunits of protein phosphatase 2A in Fusarium verticillioides.</a> Phytopathol. 99, S119 (2009).</li><li>Breivik, O. N., Owades, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrophotometric+Semimicrodetermination+of+Ergosterol+in+Yeast.">Spectrophotometric Semimicrodetermination of Ergosterol in Yeast.</a> Yeast. Agric. and Food Chem. 5, 360-363 (1957).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; 여기에 설명된 방식은 광범위하게 테스트 및 곰팡이 식민지, sporogenesis 및 mycotoxins의 생산을위한 같지는 결과의 세대에 견고한 것으로 입증되었습니다. 또한, 이러한 방법은 mycotoxigenic 진균류 (예 : 땅콩, 밀, 면화, 피스타치오 등)과 오염에 민감한 다른 식물 종 씨앗에 적용할 수 있어야합니다. 유능한 식물 - 병원균 상호 작용 분석을 위해, 씨앗은 생명을 유지하는 것이 필수적입니다. 씨앗의 생?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> # 카탈로그 </td></tr><tr><td> 감자 덱스 트로 오스 한천 배지 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> S71659A </td></tr><tr><td> 십대 초반-20 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> BP337-100 </td></tr><tr><td> 플라스틱 배양 용기 </td><td> Sterilite </td><td> 1713LAB06 </td></tr><tr><td> 혼합하는 것 </td><td> Vicam </td><td> 20,200 </td></tr><tr><td> 24cm 세로 홈을 판 여과지 </td><td> Vicam </td><td> 31,240 </td></tr><tr><td> 1.5 μm의 유리 microfibre </td><td> Vicam </td><td> 31,955 </td></tr><tr><td> Afla 테스트 칼럼 </td><td> Vicam </td><td> G1024 </td></tr><tr><td> Afrla 테스트 개발자 </td><td> Vicam </td><td> 32,010 </td></tr><tr><td> 메탄올 </td><td> Vicam </td><td> 35,016 </td></tr><tr><td> Acetonitrile </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> AC14952-0025 </td></tr><tr><td> 에탄올 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> AC39769-0025 </td></tr><tr><td> C-18 고체 상 추출 칼럼 (준비 9월 SPE C18 열) </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> 60108-304 </td></tr><tr><td> O-phthalaldehyde (오파) </td><td> 시그마 화학 공동 </td><td> 79,760~5g </td></tr><tr><td> 붕산 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> BP168-500 </td></tr><tr><td> 나트륨 borate </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> RDCS0330500 </td></tr><tr><td> 메르 캅 토 에탄올 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> 45-000-231 </td></tr><tr><td> Shimadzu HPLC LC-20AT (펌프) </td><td> Shimadzu 과학 인 스트 루먼트 주식 회사 </td><td> LC-20AT </td></tr><tr><td> Zorbax ODS 칼럼 (4.6x150mm) </td><td> 애질런트 테크놀로지 </td><td> 443905-902 </td></tr><tr><td> Shimatzu RF-10Axl 형광 검출기 </td><td> Shimadzu 과학 인 스트 루먼트 주식 회사 </td><td> RF-10AXL </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 </td><td> 피셔 Scientifc </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> FB1 기준 </td><td> 시그마 화학 (주) </td><td> F1147-1mg </td></tr><tr><td> 클로로포름 </td><td> VWR </td><td> MK444410 </td></tr><tr><td> 0.45 음 나일론 막 (HPLC)와 13mm의 주사기 필터 </td><td> 막 생활 과학 </td><td> 4426 </td></tr><tr><td> Ergosterol </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 45480-50G-F </td></tr><tr><td> 섬광 튜브 </td><td> VWR </td><td> 66021-602 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> Vicam </td><td> G1124 </td></tr></tbody></table>

quantification of fungal colonization, sporogenesis, and production of mycotoxins using kernel bioassays

에 의해 입자의 썩어가는 씨앗 - 감염 곰팡이는 인간과 동물 건강에 심각한 위험을 언급하지 않기로, 시리얼 생산 세계적으로 가장 큰 경제적 어려움 중 하나가 포즈. 시리얼 생산 중에서 옥수수는 곡물 무결성 및 진균 독소의 종자 오염의 병원체 유발 손실로 인해 거의 틀림없이 가장 영향을받는 작물이다. 옥수수 재배자 및 식품 및 사료 프로세서를위한 두 가지 가장 널리 사용하고 문제가 mycotoxins는 각각 Aspergillus flavus와 Fusarium의 verticillioides 제작한 아플라톡신과 fumonisin, 수 있습니다. 분자 식물 - 병원균 상호 작용의 최근 연구에 곰팡이 감염 및 진균 독소 오염 1,2,3,4,5,6으로 식물 반응과 관련된 구체적인 메커니즘을 이해 약속을 증명하고있다. 많은 실험실이 식물 병원체 상호 작용을 연구하기 위해 커널 assays를 사용하고 있기 때문에, 서로 다른 생물 학적 매개 변수를 quantifying위한 표준화된 방법에 필요하므로,이다른 실험실에서 결과를 비교 해석될 수 있습니다. 씨앗에 대한 정량 분석​​을위한 강력하고 재현할 수단을 위해서는 곰팡이 성장, 바이오 매스 및 진균 독소 오염을 수치 인 - 실험실 커널 assays와 후속 방법을 개발했습니다. 네 소독 옥수수 커널은 곰팡이 서스펜션 (10 6)와 함께 유리 튜브 안에 주사하고 미리 정해진 기간 동안 incubated됩니다. 샘플 튜브 그러면 고성능 액체 크로마 토그래피 (HPLC), AflaTest fluorometer 방법을 사용하여 아플라톡신의 부량, 그리고 HPLC에 의한 fumonisin의 부량하여 hemocytometer, ergosterol 기반의 바이오 매스 분석하여 conidia의 열거를 위해 선택됩니다.

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Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

종자 - 감염 곰팡이에 의한 시리얼 작물의 참화 더 나은 식물 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 많은 연구 노력을하라는 메시지가있다. 실험실 환경에서 씨앗 - 곰팡이 상호 작용을 연구하기 위해, 우리는 곰팡이 복제, 바이오 매스, 그리고 커널 bioassays를 사용하여 진균 독소 오염의 부량위한 강력한 방법을 개발했다.

커널 Bioassays를 사용하여 곰팡이 콜로니, Sporogenesis 및 Mycotoxins 생산의 부량

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

의 식민지 Euprymna scolopes 오징어에 의한 장염 fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

연구

면역학 및 감염병학

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

곰팡이 병원체 Phagocytosis의 라이브 셀 비디오 현미경

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

분리, 정제 및 기능 연구 및 입양 전송 실험 쥐의 골수 호중구의 라벨링

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

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설립<em&gt; 체외</em&gt; 시스템의 세포 내 행동을 연구하는<em&gt; 칸디다 글라 브라</em&gt; 인간 THP-1 식세포에

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

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를 사용하여 폐렴 구균 식민지에서 생균제의 효과를 조사<em&gt; 체외</em&gt; 준수의 분석

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

공 초점 현미경으로 고립 된 폐포 대 식세포의 반대로 곰팡이 활동을 평가

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

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리스테리아 단세포 유전자를 사용하여 감염된 마우스에 있는 문화와 심혼 식민지에 있는 심장 세포의 세균성 침략 평가

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

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그룹 B의 쥐 모델<em&gt; 연쇄상 구균</em&gt; 질 식민

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Histological Quantification to Determine Lung Fungal Burden in Experimental Aspergillosis

조직학 정량화 폐 실험 Aspergillosis에 곰 팡이 부담을 결정 하

The quantification of lung fungal burden is critical for the determination of the relative levels of immune protection and fungal virulence in mouse ...