Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Vi takker Aimee Myers og Esi Quayson for tekniske kvalifikationer og hjælpe. Dette arbejde blev delvist støttet af NSF 0216310 og Givaudan Inc tilskud (NER).

1. Indhentning af menneskelige Fungiform Smag Papiller <ol><li> Fjerne 07:56 human fungiform smag papiller fra den dorsale overflade af den forreste del af tungen ved hjælp af krumme fjederelementer microscissors. </li><li> Umiddelbart i en isolation opløsning (26 mM NaHCO3, 2,5 mM NaH 2PO 4, 20 mM glucose, 65 mM NaCl, 20 mM KCl og 1 mM EDTA blev opløst i nuklease-frit vand og filtersteriliseret). </li></ol> 2. Menneskelig Fungiform Smag Papiller Fordøjelse <p class=...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

Vi har fastholdt celler fra menneskelige fungiform smag papiller for over 8 passager, spænder over en periode på 12 måneder. Disse kulturer skaber nye celler, hvoraf mange modnes in vitro til den fase, hvor de udtrykker flere markører for modne smagsløg celletyper, foruden vigtige molekylære og fysiologiske egenskaber smag receptor celler. Tilstedeværelsen af ​​gustducin-og PLC-β2-immunoreaktivitet i delmængder af dyrkede celler er i overensstemmelse med denne konklusion. Vigtigst er det, nogle cel...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscoves DMEM-medium </td><td> Mediatech </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Sojabønne-trypsininhibitor </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Kollagenase type 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Rotte hale kollagen type 1 </td><td> BD Sciences </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molecular Probes </td></tr><tr><td> Superscript første streng syntese system til RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spectral konfokal mikroskop </td><td> Leica Microsystems Inc. </td&gt; </tr><tr><td> Opdagelsen-1 billeddannelse station og Metamorph software </td><td> Molecular Devices </td></tr><tr><td> Små fine spids pincet og ekstra fine forår sakse </td><td> Gode ​​Science Tools </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Smag celler er meget specialiseret, med unikke histologiske og molekylære og fysiologiske egenskaber, der tillader detektion af en lang række simple stimuli og komplekse kemiske molekyler indeholdt i fødevarer. I humant individuel fungiform papiller indeholde fra nul til så mange som 20 smagsløg. Der er ingen etableret protokol for dyrkning af humane smag celler, selv om evnen til at opretholde smagen papiller celler i kultur til flere cellecykler ville være af stor nytte til karakterisering af de molekylære, regenerative og funktionelle egenskaber af disse unikke sensoriske celler. Tidligere undersøgelser af smag celler er blevet udført under anvendelse af frisk isolerede celler i primær kultur, eksplantatkulturer fra gnavere eller semi-intakte smagsløgene i vævssnit 1,2,3,4. Selv om hver af disse præparater har fordele, vil udviklingen af ​​langsigtede kulturer har givet betydelige fordele, især for studier af smag celledeling og forskelrentiation. Flere grupper, herunder vores, har været interesseret i udvikling og etablering af smag cellekulturmodeller. De fleste forsøg på kultur smag celler har rapporteret begrænset levedygtighed, med celler typisk ikke længere varighed end 3-5 d. 5,6,7,8. Vi har for nylig rapporteret om en succesfuld metode til den udvidede kultur af gnaver smag celler 9. Vi her rapport første gang etableringen af en in vitro-kultur system til isolerede humane fungiform smag papiller celler. Celler fra menneskelige fungiform papiller opnået ved biopsi blev med succes holdt i kultur i mere end otte passager (12 måneder) uden tab af levedygtighed. Celler viste mange molekylære og fysiologiske egenskaber karakteristiske for modne smag celler. Gustducin og phospholipase C β2 (PLC-β2) mRNA blev detekteret i mange celler ved revers transkriptase-polymerasekædereaktion og bekræftet ved sekventering. Immuncytokemi analyse viste tilstedeværelsen af ​​vindstødducin og PLC-β2-ekspression i dyrkede smag celler. Dyrkede humane fungiform celler udviste også stigninger i intracellulært calcium som reaktion på passende koncentrationer af forskellige smag stimuli indikerer, at smag receptorer og i det mindste nogle af de signalveje var til stede. Disse resultater indikerer, at en tilstrækkelig smag celler fra voksne mennesker kan genereres og opretholdes i mindst otte passager. Mange af cellerne bevarer fysiologiske og biokemiske karakteristika for akut isolerede celler fra den voksne smag epitel at støtte deres anvendelse som en model smag system. Dette system vil gøre det muligt for yderligere undersøgelser af de processer, der er involveret i proliferation, differentiering og funktion af pattedyr smag receptor celler i en in vitro præparat. Menneskelig fungiform smag papiller anvendes til oprettelse af human fungiform cellekultur blev doneret til forskning efter en fyldestgørende informeret samtykke under forsknings-protokoller, der blev revideretog godkendt af IRB-udvalget. Protokollen (# 0934) blev godkendt af Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Skrevet protokol nedenfor er baseret på offentliggjorte parametre rapporteret af Ozdener et al. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Vi havde til formål at udvikle en reproducerbar protokol til at isolere og opretholde langsigtede kulturer af humane fungiform smag papiller celler. Celler fra menneskelige fungiform papiller opnået ved biopsi blev med succes holdt i kultur i mere end otte passager (12 måneder) uden tab af levedygtighed.

Isolering og dyrkning af humane Fungiform Taste papiller Celler

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolering og Kultur neuralkam stamceller fra menneskelige hårsække

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering og Udvidelse af menneskelige glioblastom multiforme tumorceller Brug af Neurosphere Assay

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolering og dyrkning af Rotte Embryonale Neurale Celler: En hurtig protokol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering og dyrkning af neurale kamceller fra embryonale Murin Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolering og Kultur Mouse Cortikale Astrocytes

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolering og dyrkning af endotelceller fra embryonale forebrain

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Denver Papillae Protokol for objektiv analyse af fungiforme Papillae

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Smag Preference Assay for Voksen<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolering og dyrkning af Voksen neurale stamceller fra mus Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...