Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Wij danken Aimee Myers en Esi Quayson voor technische vaardigheden en hulp. Dit werk werd mede ondersteund door NSF 0216310 en Givaudan Inc subsidie ​​(NER).

1. Het verkrijgen van de Mens Fungiform Smaak papillen <ol><li> Verwijder de vier tot acht menselijke fungiform smaak papillen van de dorsale zijde van het voorste gedeelte van de tong met behulp van gebogen voorjaar microscissors. </li><li> Plaats direct in een isolatie oplossing (26 mM NaHCO 3, 2,5 mM NaH 2 PO 4, 20 mM glucose, 65 mM NaCl, 20 mM KCl, en 1 mM EDTA opgelost in nuclease-vrij water en filter-gesteriliseerd). </li></ol> 2. Human Fungiform Smaak papil...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

We hebben vastgehouden aan cellen verkregen uit menselijke fungiform smaak papillen voor meer dan 8 passages, verspreid over een periode van 12 maanden. Deze culturen genereren nieuwe cellen, waarvan vele in vitro rijpen tot de fase waarin drukken zij verschillende merkers volwassen smaakknop celtypen naast belangrijke moleculaire en fysiologische eigenschappen van smaak receptor cellen. De aanwezigheid van gustducin-en PLC-β2 immunoreactiviteit in subsets van gekweekte cellen is in overeenstemming met deze co...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscove&#39;s DMEM medium </td><td> Mediatech </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Soja bonen trypsine-remmer </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Collagenase type 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Rat staart collageen type 1 </td><td> BD Wetenschappen </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molecular Probes </td></tr><tr><td> Superscript eerste streng synthese Systeem voor RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spectral confocale microscoop </td><td> Leica Microsystems Inc </td&gt; </tr><tr><td> Discovery-1 imaging station en Metamorph software </td><td> Molecular Devices </td></tr><tr><td> Kleine fijne-tip pincet en extra fijne lente schaar </td><td> Fine Science Tools </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Smaak cellen zijn zeer gespecialiseerde, met unieke histologische, moleculaire en fysiologische kenmerken die de detectie van een breed scala van eenvoudige stimuli en complexe chemische moleculen in voedsel mogelijk te maken. In de menselijke, individuele fungiform papillen bevatten van nul tot maar liefst 20 smaakpapillen. Er is geen vastgesteld protocol voor het kweken van menselijke smaak cellen, hoewel de mogelijkheid om smaak papillen cellen in cultuur te behouden voor meerdere celcycli zou van groot nut zijn voor het karakteriseren van de moleculaire, regeneratieve, en functionele eigenschappen van deze unieke zintuigcellen. Eerdere studies van smaak cellen zijn gedaan met behulp van vers geïsoleerde cellen in primaire culturen, explant culturen van knaagdieren, of semi-intacte smaakpapillen in het weefsel plakjes 1,2,3,4. Hoewel elk van deze voorbereidingen heeft voordelen, zou de ontwikkeling van lange termijn culturen hebben belangrijke voordelen, met name voor studies van smaak celproliferatie en differentiation. Verschillende groepen, waaronder de onze, zijn geïnteresseerd in de ontwikkeling en invoering van smaak celkweek modellen. De meeste pogingen tot cultuur smaak cellen hebben gemeld beperkte levensvatbaarheid, met cellen die normaal gesproken niet een duur langer dan 3-5 d 5,6,7,8. We hebben onlangs gemeld op een succesvolle methode voor de uitgebreide cultuur van knaagdieren smaak cellen 9. Wij hier melden voor de eerste keer dat de vestiging van een in vitro cultuur voor geïsoleerde menselijke fungiform smaak papillen cellen. Cellen uit menselijk fungiform papillen, verkregen uit biopsie werden met succes gehandhaafd in cultuur voor meer dan acht passages (12 maanden) zonder verlies van levensvatbaarheid. Cellen weergegeven vele moleculaire en fysiologische kenmerken vertonen van rijpe smaak cellen. Gustducin en fosfolipase C β2 (PLC-β2) mRNA gedetecteerd in vele cellen door reverse transcriptase-polymerase kettingreactie en bevestigd door sequencing. Immunocytochemie analyse toonde de aanwezigheid van Gustducin en PLC-β2 expressie in gekweekte cellen smaak. Gekweekte menselijke fungiform cellen ook verhoging van de intracellulaire calciumconcentratie te zien in reactie op geschikte concentraties van verschillende stimuli smaak geven dat smaakreceptoren en ten minste enkele van de signaalpaden aanwezig waren. Deze resultaten geven aan dat voldoende smaak cellen van volwassen mensen kunnen worden gegenereerd en onderhouden gedurende ten minste acht passages. Veel van de cellen behouden fysiologische en biochemische eigenschappen van acuut geïsoleerd cellen van de volwassen smaak epitheel om hun gebruik te ondersteunen als een model smaak-systeem. Dit systeem zal in staat stellen verdere studies van de processen die betrokken zijn bij proliferatie, differentiatie en functie van zoogdieren smaak receptor cellen in een in vitro voorbereiding. Human fungiform smaak papillen worden gebruikt voor het vaststellen van de menselijke fungiform celkweek werden geschonken voor onderzoek in goed geïnformeerde toestemming onder onderzoeksprotocollen die werden beoordeelden goedgekeurd door de IRB commissie. Het protocol (# 0934) werd goedgekeurd door Schulman Associates Institutional Review Board Inc, Cincinnati, OH. Geschreven protocol hieronder is gebaseerd op gepubliceerde parameters gerapporteerd door Ozdener et al.. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Ons doel was om een ​​reproduceerbare protocol voor het isoleren en onderhouden van lange termijn culturen van menselijke fungiform smaak papillen cellen te ontwikkelen. Cellen uit menselijk fungiform papillen, verkregen uit biopsie werden met succes gehandhaafd in cultuur voor meer dan acht passages (12 maanden) zonder verlies van levensvatbaarheid.

Isolatie en Cultuur van de Mens Fungiform Smaak papillen Cellen

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectine-based Isolatie en cultuur van de muis embryonale motoneuronen

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolatie en uitbreiding van de Mens glioblastoma multiforme tumorcellen Met behulp van de Neurosphere Assay

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolatie en Cultuur van Rat Embryonale neurale cellen: een Quick-protocol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolatie en Cultuur van de Muis Corticale Astrocyten

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolatie en Cultuur van de endotheelcellen van de embryonale voorhersenen

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Denver papillen Protocol voor objectieve analyse van Fungiform papillen

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolatie en cultuur van de volwassen neurale stamcellen van de muis Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...