Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
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Wir bedanken uns bei Aimee Myers und ESI Quayson für technische Kompetenz und Hilfe. Diese Arbeit wurde zum Teil durch NSF 0216310 und Givaudan Inc Zuschuss (NER) unterstützt.

1. Gewinnung von humanen pilzförmigen Papillen Geschmack <ol><li> Nehmen Sie vier Minuten vor acht Menschen pilzförmige Papillen Geschmack von der Dorsalfläche des vorderen Teils der Zunge mit gebogenen Feder Mikroschere. </li><li> Unmittelbar in eine isolierte Lösung (26 mM NaHCO 3, 2,5 mM NaH 2 PO 4, 20 mM Glucose, 65 mM NaCl, 20 mM KCl und 1 mM EDTA in der Nuclease-freiem Wasser und sterilfiltriert). </li></ol> 2. Menschliche pilzförmige Papillen Geschmack...

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	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. 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G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

Wir haben Zellen aus menschlichen pilzförmige Papillen Geschmack für über 8 Passagen erhalten gepflegt, über einen Zeitraum von 12 Monaten. Diese Kulturen generieren neue Zellen, von denen viele in-vitro-Reifung auf die Bühne, wo sie mehrere Marker von reifen Geschmacksknospe Zelltypen, zum Ausdruck bringen zusätzlich zu den wichtigsten molekularen und physiologischen Eigenschaften der Geschmack Rezeptorzellen. Die Anwesenheit von Gustducin-und PLC-β2 Immunreaktivität in Teilmengen von kultivierten Zell...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscove-DMEM-Medium </td><td> MediaTech </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Sojabohnen-Trypsininhibitor </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Collagenase Typ 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Rattenschwanz-Collagen Typ 1 </td><td> BD Sciences </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molecular Probes </td></tr><tr><td> Superscript First Strand Synthesis System für RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spectral Konfokalmikroskop </td><td> Leica Microsystems Inc. </td&gt; </tr><tr><td> Discovery-Imaging-1-Station und Software Metamorph </td><td> Molecular Devices </td></tr><tr><td> Kleine feine Spitze Pinzette und Schere Frühjahr extra fein </td><td> Fine Science Tools </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Geschmack Zellen sind hoch spezialisierte, mit einzigartigen histologischen, molekularen und physiologischen Eigenschaften, die den Nachweis einer Vielzahl von einfachen und komplexen Reize chemische Moleküle in Nahrungsmitteln enthalten ermöglichen. In der menschlichen, individuellen fungiformen Papillen enthalten von null bis zu 20 Geschmacksknospen. Es gibt keine festgelegten Protokoll zur Kultivierung von Zellen menschlichen Geschmack, obwohl die Fähigkeit, Geschmack Papillen Zellen in Kultur für mehrere Zyklen Zelle aufrechtzuerhalten wäre von großem Nutzen für die Charakterisierung der molekularen, regenerative und funktionellen Eigenschaften dieser einzigartigen Sinneszellen sein. Frühere Studien des Geschmacks-Zellen wurden unter Verwendung frisch isolierten Zellen in Primärkultur, Explantatkulturen von Nagern, oder semi-intakten Geschmacksnerven in Gewebeschnitten 1,2,3,4. Obwohl jedes dieser Präparate hat Vorteile, wäre die Entwicklung von langfristigen Kulturen erhebliche Vorteile zur Verfügung gestellt haben, insbesondere für Studien des Geschmacks Zellproliferation und verschierenzierung. Mehrere Gruppen, einschließlich der unsrigen, waren interessiert an der Entwicklung und Etablierung von Zellkultur-Modellen Geschmack. Die meisten Versuche, Kultur Geschmack Zellen haben begrenzte Lebensfähigkeit berichtet, die mit Zellen in der Regel nicht dauerhaft über 3-5 d 5,6,7,8. Vor kurzem berichteten wir auf ein erfolgreiches Verfahren für die verlängerte Kultur von Nagetier Geschmack Zellen 9. Wir berichten hier zum ersten Mal die Etablierung eines in vitro-Kultur-System für isolierte menschliche Zellen pilzförmige Papillen Geschmack. Zellen aus menschlichen fungiformen Papillen durch Biopsie gewonnen wurden erfolgreich in der Kultur mehr als acht Durchgängen (12 Monate) aufrecht erhalten, ohne Verlust der Lebensfähigkeit. Zellen zeigten viele molekulare und physiologische Merkmale charakteristisch für reife Geschmack Zellen. Gustducin und Phospholipase C β2, (PLC-β2) mRNA wurden in vielen Zellen durch reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion festgestellt und bestätigt durch Sequenzierung. Immunzytochemie Analyse zeigte die Anwesenheit von Böducin und PLC-β2-Expression in kultivierten Zellen Geschmack. Kultivierte humane fungiformes Zellen zeigten auch Erhöhung des intrazellulären Calcium in Reaktion auf die entsprechenden Konzentrationen von mehreren Geschmacksreize anzeigt, dass Geschmacksrezeptoren und wenigstens einige der Signalwege vorhanden waren. Diese Ergebnisse zeigen, dass genügend Geschmack Zellen von erwachsenen Menschen erzeugt und aufrechterhalten werden für mindestens acht Passagen. Viele der Zellen behalten physiologischen und biochemischen Merkmale von akut isolierten Zellen aus dem erwachsenen Geschmack Epithel auf ihre Verwendung als Modell Geschmack zu unterstützen. Dieses System ermöglicht weitere Untersuchungen der Prozesse in der Proliferation, Differenzierung und Funktion von Säuger-Zellen-Rezeptor-Geschmack in einem In-vitro-Herstellung beteiligt. Menschliche pilzförmige Papillen Geschmack für den Aufbau menschlicher fungiformen Zellkultur verwendet wurden, für die Forschung nach einer ordnungsgemäßen Einwilligung unter Forschung Protokolle, die gespendet wurden bewertetund durch den IRB Ausschuss genehmigt. Das Protokoll (# 0934) wurde von Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH genehmigt. Geschrieben Protokoll unten auf der veröffentlichten Parameter durch Ozdener et al basiert. 2011 10.

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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Wir wollten eine reproduzierbare Protokoll für die Isolierung und die Pflege langfristiger Kulturen von humanen pilzförmigen Papillen Geschmack Zellen zu entwickeln. Zellen aus menschlichen fungiformen Papillen durch Biopsie gewonnen wurden erfolgreich in der Kultur mehr als acht Durchgängen (12 Monate) aufrecht erhalten, ohne Verlust der Lebensfähigkeit.

Isolierung und Kultivierung humaner Zellen pilzförmige Papillen Geschmack

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolation und Kultur von Neural Crest Stem Cells aus menschlichen Haarfollikeln

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Forschung

Neurowissenschaften

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectin-basierte Isolierung und Kultivierung von embryonalen Maus-Motoneuronen

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Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolation und Expansion der menschlichen Glioblastoma multiforme Tumorzellen unter Verwendung der Neurosphäre Assay

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Isolierung und Kultivierung von embryonalen Ratten-Nervenzellen: ein Quick-Protokoll

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Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolierung und Kultivierung von Zellen der Neuralleiste aus embryonalen murinen Neuralrohr

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolierung und Kultivierung von Endothelzellen aus dem embryonalen Vorderhirn

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Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

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