Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

אנו מודים איימי מאיירס Quayson ESI עבור כישורים טכניים ועזרה. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי NSF 0216310 ו Givaudan Inc מענק (נר).

1. קבלת גבשושיות האדם טעם Fungiform <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר 07:56 fungiform האדם גבשושיות הטעם מפני השטח הגבי של החלק הקדמי של הלשון באמצעות microscissors האביב מעוגלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום מיד פתרון הבידוד (26 mM NaHCO 3, 2.5 מ&quot;מ לאא 2 PO ...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

אנו שומרים על התאים המתקבלים גבשושיות fungiform האדם טעם כבר למעלה מ 8 קטעים, פורש תקופה של 12 חודשים. תרבויות אלה לייצר תאים חדשים, שרבים מהם לפירעון במבחנה לשלב שבו הם מביעים סמנים שונים של בוגרים ניצן סוגים הטעם סלולריים, בנוסף תכונות מולקולריות ופיזיולוגיות המפתח ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscove של DMEM בינוני </td><td> MediaTech </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> וורטינגטון </td></tr><tr><td> סויה מעכב טריפסין </td><td> וורטינגטון </td></tr><tr><td> Collagenase סוג 1 </td><td> וורטינגטון </td></tr><tr><td> זנב עכברוש קולגן סוג 1 </td><td> BD למדעים </td></tr><tr><td> פורעה-2 בבוקר </td><td> בדיקות מולקולריות </td></tr><tr><td> עילי סטרנד ראשון סינתזה מערכת RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> הלייקה TCS SP2 מיקרוסקופ Confocal Spectral </td><td> Leica Microsystems בע&quot;מ </TD&gt; </tr><tr><td> גילוי-1 הדמיה התחנה Metamorph תוכנה </td><td> התקנים מולקולריים </td></tr><tr><td> קטנים עדין עצה ו מלקחיים נוספות מספריים נאים של אביב </td><td> מדע כלים עדינים </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

תאים הטעם הם מאוד מיוחדים, עם מאפיינים ייחודיים, היסטולוגית מולקולריות ופיזיולוגיות המאפשרים זיהוי של מגוון רחב של גירויים פשוטים ומולקולות כימיות מורכבות הכלולים מזונות. ב האדם גבשושיות, fungiform הפרט להכיל מאפס עד כמה שרק 20 בלוטות הטעם. אין פרוטוקול מבוסס תאים אנושיים culturing הטעם, אם כי היכולת לשמור על גבשושיות הטעם התאים בתרבית תאים במשך מחזורים רבים תהיה התועלת רבה לאפיון תכונות מולקולריות, רגנרטיבית, ופונקציונלי של תאים אלה ייחודיים חושיות. מחקרים קודמים של תאים הטעם היה לעשות שימוש טרי תאים מבודדים בתרבות העיקרי, תרבויות explant של מכרסמים, או חצי שלמות בלוטות הטעם של פרוסות רקמה 1,2,3,4. למרות כל ההכנות הללו יש יתרונות, פיתוח לטווח ארוך תרבויות היתה יכולה לספק יתרונות משמעותיים, במיוחד מחקרים של התא טעם שגשוג differentiation. מספר קבוצות, כולל שלנו, היה מעוניין בפיתוח והקמת תא מודלים טעם ותרבות. רוב הניסיונות תאים הטעם תרבות דיווחו על יכולת הקיום מוגבל, עם תאים בדרך כלל לא מעבר שנמשך 3-5 ד 5,6,7,8. אנחנו לאחרונה דווח על שיטה מוצלחת לתרבות המורחבת של טעם תאים מכרסמים 9. אנחנו כאן לדווח לראשונה על הקמת במערכת התרבות חוץ גופית עבור מבודדים תאים אנושיים הטעם fungiform גבשושיות. תאים מאדם fungiform גבשושיות מתקבל על ידי ביופסיה נשמרו בהצלחה במשך יותר משמונה קטעים (12 חודשים) בתרבות ללא אובדן הכדאיות. תאים מוצגים תכונות מולקולריות ופיזיולוגיים רבים האופייניים לתאי הטעם בוגרים. Gustducin ו phospholipase C β2, (PLC-β2) mRNA התגלו תאים רבים מהתגובה transcriptase-פולימראז הפוך שרשרת ואושרו על ידי סידור. ניתוח Immunocytochemistry הפגינו נוכחות של משבducin ו PLC-β2 ביטוי בתאים בתרבית הטעם. בתרבית תאים fungiform אדם גם הציגו עליות סידן תוך תאי בתגובה ריכוזים מתאימים של גירויים הטעם מספר המצביעים על כך קולטני הטעם, לפחות בחלק מן המסלולים איתות נכחו. תוצאות אלו מצביעות על כך מספיק תאים הטעם של בני אדם בוגרים יכול להיות שנוצר ומתוחזק על לפחות שמונה קטעים. רבים מן התאים לשמור על מאפיינים פיזיולוגיים ביוכימיים של תאים מבודדים בחריפות מן האפיתל טעם מבוגר כדי לתמוך השימוש בהם כמערכת מודל טעם. מערכת זו תאפשר מחקרים נוספים של התהליכים המעורבים בידול התפשטות, והתפקוד של תאים קולטני הטעם של יונקים לקראת במבחנה. האדם גבשושיות fungiform טעם בשימוש להקמת התרבות האנושית תא fungiform נתרמו לחקר בעקבות הסכמה מדעת נכונה תחת פרוטוקולים מחקר נבדקוואושרה על ידי ועדת IRB. פרוטוקול (# 0934) אושרה על ידי שולמן Associates מוסדי סקירה עמוד Inc, סינסינטי, אוהיו. בפרוטוקול נכתב מתחת מבוסס על פרמטרים שפורסמו שדווחו על ידי Ozdener et al. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

המטרה היא לפתח פרוטוקול לשחזור לבידוד ושמירה לטווח ארוך של תרבויות אנושיות הטעם תאים fungiform גבשושיות. תאים מאדם fungiform גבשושיות מתקבל על ידי ביופסיה נשמרו בהצלחה במשך יותר משמונה קטעים (12 חודשים) בתרבות ללא אובדן הכדאיות.

בידוד והתרבות של האדם בחוש הטעם תאים Fungiform גבשושיות

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

לקטינים מבוססי בידוד תרבות Motoneurons עכבר עובריים

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

בידוד הרחבת האדם multiforme Glioblastoma גידול תאים שימוש Assay Neurosphere

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

בידוד והתרבות של תאי האנדותל מהמוח הקדמי עוברי

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

דנבר גבשושיות פרוטוקול לניתוח אובייקטיבי של Fungiform גבשושיות

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Assay העדפות טעם למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

בידוד והתרבות של תאי גזע בוגרים עצביים מאזור העכבר Subcallosal

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...