Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
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私たちは、エイミー·マイヤーズと技術的なスキルとヘルプのESI Quaysonに感謝します。この作品は、NSF 0216310とジボダン社の助成金（NER）によって部分的にサポートされていました。

1。人間の茸状の味覚乳頭を得る<ol><li>湾曲した春のmicroscissorsを使用して、舌の前部の背側表面に四から八人間の茸状の味覚乳頭を削除します。 </li><li>すぐにアイソレーション·ソリューションへの場所（26 mMの炭酸水素ナトリウム、2.5mMののNaH 2 PO 4、20mMのグルコース、65 mMのNaCl、20mMの塩化カリウム、1 mM EDTAをヌクレアーゼフリー水に溶解し、濾過滅菌）。 </li></ol>...

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	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

私たちは12ヶ月の期間にまたがる、8以上の通路のために人間の茸状乳頭味から得られた細胞を維持しています。これらの培養物は、味覚受容体細胞の重要な分子的及び生理学的性質に加えて、成熟した味蕾細胞の種類にはいくつかのマーカーを発現した段階にin vitroで成熟し、その多くは新しい細胞を生成します。 gustducinと培養細胞のサブセットのPLC-β2免疫反応の存在は、この結論と...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich社</td></tr><tr><td>イスコフDMEM培地</td><td>メディアテック</td></tr><tr><td>エラスターゼ</td><td> Sigma-Aldrich社</td></tr><tr><td>プロナーゼE </td><td> Sigma-Aldrich社</td></tr><tr><td>エラスターゼ</td><td>ワージントン</td></tr><tr><td>大豆トリプシンインヒビター</td><td>ワージントン</td></tr><tr><td>コラゲナーゼタイプ1 </td><td>ワージントン</td></tr><tr><td>ラットテールコラーゲンタイプ1 </td><td> BD科学</td></tr><tr><td> AMフラ-2 </td><td>分子プローブ</td></tr><tr><td> RT-PCRのための上付き文字ファーストストランド合成システム</td><td>インビトロジェン</td></tr><tr><td>ライカTCS SP2スペクトル共焦点顕微鏡</td><td>ライカマイクロシステムズ株式会社</TD&gt; </tr><tr><td>ディスカバリー-1イメージングステーションおよびMetaMorphソフトウェア</td><td>モレキュラーデバイス</td></tr><tr><td>小さな細かいチップ鉗子と​​極細スプリングはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

味細胞は、食品中に含まれる単純な刺激と複雑な化学分子の広い範囲の検出を可能にするユニークな組織学的、分子生物学的および生理学的特性を持つ、高度に特殊化されています。ヒトでは、個々の茸状乳頭はゼロから多くの20の味蕾に含まれています。複数のセルサイクルの文化の味覚乳頭細胞を維持する能力は、これらのユニークな感覚細胞の、分子の再生、および機能的性質を特徴づけるためにかなりのユーティリティのでしょうが培養ヒトの味覚細胞のための確立されたプロトコルは、ありません。味細胞の以前の研究はげっ歯類、または組織切片1,2,3,4の半そのままの味蕾から、初代培養の外植片培養を新たに単離された細胞を使用して行われている。これらの製剤のそれぞれの利点がありますが、長期的な文化の発展は、特に味細胞の増殖とdiffeの研究に、大きなメリットを提供しているだろうrentiation。我々を含むいくつかのグループが、味細胞培養モデルの開発と確立に興味を持っています。文化の味細胞にほとんどの試みは3-5 D 5,6,7,8を超えて一般的に長続きしない細胞と、限られた可能性が報告されています。我々は最近、9齧歯類の味細胞の拡張された文化のために成功した方法を報告した。我々はここで初めて単離されたヒト茸状乳頭味細胞のin vitroの培養系の確立を報告します。生検で得られたヒト茸状乳頭由来の細胞が正常に生存率の低下なしに個以上の通路（12ヶ月）培養で維持した。細胞が成熟した味細胞の特徴多くの分子的および生理学的機能を表示します。 GustducinとホスホリパーゼCβ2、（PLC-β2）mRNAが逆転写酵素 - ポリメラーゼ連鎖反応によって、多くの細胞で検出され、配列決定によって確認した。免疫細胞化学分析では、突風の存在を実証ducinおよびPLC-β2培養味細胞における発現。培養ヒト茸状細胞は、味覚受容体とシグナル伝達経路の少なくとも一部が存在していたことを示すいくつかの味刺激の適切な濃度に応答して細胞内カルシウムの増加を示した。これらの結果は、十分な成人から味細胞が生成され、少なくとも8つの通路を維持できることを示しています。細胞の多くは、モデルの味覚システムとしての使用をサポートするために、大人の味の上皮から急性単離した細胞の生理学的および生化学的特性を保持します。このシステムは、in vitroでの準備中で哺乳類の味覚受容体細胞の増殖、分化および機能に関与するプロセスの更なる研究が可能になります。 ヒトの茸状細胞の培養を確立するために使用される人間の茸状乳頭味が見直された研究プロトコルの下で適切なインフォームドコンセント後に研究のために寄付されましたとIRB委員会によって承認されました。プロトコル（＃0934）は、シュルマンアソシエイツ機関審査委員会（株）、シンシナティ、オハイオ州によって承認されました。下記の書かれたプロトコルはOzdener らによって報告され公表されたパラメータに基づいています。 2011年10。

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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

我々は人間の茸状乳頭味細胞の長期培養を分離して維持するための再現可能なプロトコルを開発することを目的とした。生検で得られたヒト茸状乳頭由来の細胞が正常に生存率の低下なしに個以上の通路（12ヶ月）培養で維持した。

人間の茸状の味覚乳頭細胞の単離および培養

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

人間の毛包から神経堤幹細胞の単離および培養

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

マウス胚の運動ニューロンのレクチンに基づく分離と文化

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを用いたヒト多形性膠芽腫の腫瘍細胞の単離と拡大

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

ラット胚神経細胞の分離と文化：クイックプロトコル

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

マウス大脳皮質アストロサイトの単離および培養

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

胚前脳からの内皮細胞の単離および培養

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

茸乳頭の客観的な分析のためのデンバー乳頭プロトコル

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

大人のための味の好みアッセイ<em&gt;ショウジョウバエ</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

マウス梁下ゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...