Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
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우리는 아미 마이어스 및 기술 능력과 도움 ESI의 Quayson 감사드립니다. 이 작품은 NSF 0,216,310 및 Givaudan INC 부여 (NER)에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 인간 Fungiform의 맛 용의자 구하기 <ol><li> 곡선 봄 microscissors를 사용하여 혀의 앞부분은 부분 등 부분의 표면 4-8 인간 fungiform의 맛을 용의자를 제거합니다. </li><li> 즉시 격리 솔루션에 플레이스 (26 MM NaHCO 3, 2.5 MM 아뇨 2 PO 4, 20 MM 포도당, 65 MM NaCl, 20 MM KCl, 1 밀리미터 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) nuclease없는 물속에 녹아 및 소독 필터링). </li></ol> 2. ?...

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	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

우리는 12 개월 기간을 걸치는, 8 이상의 구절에 대한 인간의 fungiform의 맛을 용의자로부터 얻은 세포를 유지했습니다. 이러한 문화들은 미각 수용체 세포의 핵심 분자 및 생리 학적 특성 이외에, 성숙한 미뢰 세포 유형의 여러 마커를 표현할 수있는 무대 체외에서 성숙 많은 중 새로운 세포를 생성합니다. 의 존재 gustducin 및 PLC-β2 교양 세포의 하위 집합에 immunoreactivity이 결론과 일치합니다. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td></tr><tr><td> Iscove의 DMEM 매체 </td><td> MediaTech </td></tr><tr><td> 엘라스타제 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td></tr><tr><td> Pronase 전자 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td></tr><tr><td> 엘라스타제 </td><td> 워딩턴 </td></tr><tr><td> 콩 콩 트립신 억제제 </td><td> 워딩턴 </td></tr><tr><td> Collagenase의 제 1 형 </td><td> 워딩턴 </td></tr><tr><td> 쥐의 꼬리 콜라겐 제 1 형 </td><td> BD 과학 </td></tr><tr><td> Fura - 오전 2시 </td><td> 분자 프로브 </td></tr><tr><td> RT-PCR을위한 윗첨자 최초 스트랜드 합성 시스템 </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2의 스펙트럼 공촛점 현미경 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 주식 회사 </TD&gt; </tr><tr><td> 디스커버리-1 영상 역과 Metamorph 소프트웨어 </td><td> 분자 장치 </td></tr><tr><td> 작은 미세 팁 포셉 및 엑스트라 봄날의 가위 </td><td> 파인 과학 도구 </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

미각 세포는 음식에 포함된 간단한 자극하고 복잡한 화학 분자의 광범위한 감지를 허용 독특한 histological, 분자 및 생리 특성으로 고도의 전문입니다. 인간, 개별 fungiform의 용의자에서 제로로부터 많은 20 등 입맛에 포함되어 있습니다. 여러 세포주기위한 문화의 맛을 용의자 세포를 유지하는 능력이 독특한 감각 세포, 분자 재생 및 기능적 특성을 특성화를 위해 상당한 유틸리티 될 비록 culturing 인간의 미각 세포에 대한 설립 프로토콜은 없습니다. 미각 세포의 이전 연구는 일차 문화, 설치류에서 explant 문화, 또는 조직 조각 1,2,3,4의 세미 그대로 입맛에 갓 고립된 세포를 사용하여 수행되었습니다. 이러한 준비는 각각 장점이 있지만, 장기적인 문화의 발전은 특히 미각 세포 증식과 diffe의 연구를 위해 상당한 이점을 제공했을rentiation. 우리를 포함하여 몇몇 그룹은, 미각 세포 배양 모델의 개발 및 구축에 관심이 있었다. 문화 미각 세포에 대한 대부분의 시도는 3-5 D 5,6,7,8 이후 일반적으로 지속하지 세포와 제한된 생존을보고했습니다. 우리는 최근 쥐 미각 세포 9 확장된 문화를위한 성공적인 방법에보고했다. 우리는 여기서 처음 격리된 인간 fungiform의 맛을 용의자 세포에 대한 체외 배양 시스템의 설립에 대해보고합니다. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다. 세포는 성숙한 미각 세포의 특징 많은 분자 및 생리 기능을 표시합니다. Gustducin 및 포스 포 라이 페이스 C β2 (PLC-β2) mRNA는 반전 transcriptase - 중합 효소 사슬 반응에 의해 여러 세포에서 감지하고 시퀀싱에 의해 확인되었다. Immunocytochemistry 분석 돌풍의 존재를 증명교양 미각 세포의 ducin 및 PLC-β2 표현. 교양 인간 fungiform 세포는 또한 미각 수용체와 신호 전달 경로 중 적어도 일부는 현재의 것을 나타내는 여러 미각 자극의 적절한 농도에 대한 응답으로 세포 내 칼슘의 증가를 전시. 이러한 결과는 충분히 성인 인간의 미각 세포가 생성하고 적어도 8 구절 지속 돼 있음을 나타냅니다. 세포의 많은 모델 맛을 시스템으로의 사용을 지원하는 성인 취향의 상피에서 심하게 격리 세포의 생리 및 생화 학적 특성을 유지합니다. 이 시스템은 체외 준비에의 포유류의 미각 수용체 세포의 증식, 분화 및 기능에 관련된 프로세스의 추가 연구를 가능하게합니다. 인간 fungiform 셀 문화 확립을 위해 사용되는 휴먼 fungiform의 맛을 용의자가 검토되었다 연구 프로토콜 아래에서 적절한 정보를 동의에 따라 연구를 위해 기증했다그리고 IRB위원회에 의해 승인했다. 프로토콜 (# 0934)는 Schulman 어소 기관 검토위원회 주식, 신시내티, OH에 의해 승인되었습니다. 아래 글 프로토콜은 Ozdener 외 의해 보고된 출판 매개 변수를 기반으로합니다. 2011 10.

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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

우리는 인간의 fungiform의 맛을 용의자 전지의 장기 문화를 분리하고 관리하기위한 재현성 프로토콜을 개발하기위한. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다.

인간 Fungiform의 맛 용의자 전지의 분리 및 문화

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

인간의 모공에서 신경 크레스트 줄기 세포의 분리와 문화

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연구

신경과학

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

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Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

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분리 및 Neurosphere 분석을 사용하여 인간 Glioblastoma의 Multiforme 종양 세포의 확장

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

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마우스 두피 Astrocytes의 분리와 문화

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Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

배아 전뇌에서 내피 세포의 분리 및 문화

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Fungiform 용의자 객관적인 분석을위한 덴버 유두 프로토콜

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

성인을위한 맛의 기본 설정 분석<em&gt; 초파리</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

마우스 뇌량 밑 영역에서의 분리 및 성인 신경 줄기 세포의 문화

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...