Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Vi takker Aimee Myers og Esi Quayson for tekniske ferdigheter og hjelp. Dette arbeidet ble støttet delvis av NSF 0216310 og Givaudan Inc stipend (NER).

1. Innhenting Menneskelig Fungiform Taste papiller <ol><li> Fjern 07:56 menneskelig fungiform smak papillae fra framsiden av fremre del av tungen med buede våren microscissors. </li><li> Plasser umiddelbart inn en isolert løsning (26 mm 3 NaHCO, 2,5 mm NaH 2 4 PO, 20 mM glukose, 65 mM NaCl, 20 mM KCl, og 1 mm EDTA oppløst i nukleasefritt vann og filtrere sterilisert). </li></ol> 2. Menneskelig Fungiform Taste papillae Fordøyelse Menneskelig f...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

Vi har opprettholdt celler hentet fra menneskers fungiform smak papillae i over åtte passeringer, som spenner over en periode på 12 måneder. Disse kulturene generere nye celler, hvorav mange forfall in vitro til det stadiet der de uttrykker flere markører med moden smak knoppen celletyper, i tillegg til viktige molekylære og fysiologiske egenskaper smak reseptor celler. Tilstedeværelsen av gustducin-og PLC-β2 immunoreaktivitets i undergrupper av dyrkede celler er i samsvar med denne konklusjonen. Viktigs...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagensen </td><td> Firma </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscove sin DMEM Medium </td><td> MediaTech </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastase </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Soya trypsin inhibitor </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Collagenase type 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Rat hale kollagen type 1 </td><td> BD Sciences </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molekylære prober </td></tr><tr><td> Hevet Først Strand Synthesis System for RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spectral confocal mikroskop </td><td> Leica Microsystems Inc. </td&gt; </tr><tr><td> Discovery-1 bildebehandling stasjon og Metamorph programvare </td><td> Molekylære enheter </td></tr><tr><td> Små fin-tip tang og ekstra fine våren saks </td><td> Fin Science Verktøy </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Smak celler er svært spesialiserte, med unike histologiske, molekylære og fysiologiske egenskaper som tillater påvisning av et bredt spekter av enkle stimuli og komplekse kjemiske molekyler som finnes i matvarer. I menneskelig, individuell fungiform papillae inneholde fra null til så mange som 20 smaksløker. Det er ingen etablert protokoll for dyrking menneskelige smak celler, selv om evnen til å opprettholde smak papiller celler i kultur for flere celle sykluser ville være av stor nytte for å karakterisere den molekylære, regenerativ, og funksjonelle egenskapene til disse unike sanseceller. Tidligere studier av smak celler er gjort med nybakte isolerte celler i primær kultur, eksplantering kulturer fra gnagere, eller semi-intakte smaksløkene i vev skiver 1,2,3,4. Selv om hver av disse preparatene har fordeler, ville utviklingen av langsiktige kulturer har gitt betydelige fordeler, særlig for studier av smak celleproliferasjon og forskjellerrentiation. Flere grupper, blant annet vår, har vært interessert i utvikling og etablering av smak cellekultur modeller. De fleste forsøk på kultur smak celler har rapportert begrenset levedyktighet, med celler vanligvis ikke varige utover 3-5 d 5,6,7,8. Vi har nylig rapportert om en vellykket metode for den utvidede kultur gnager smak celler 9. Vi her rapporterer for første gang etableringen av en in vitro kultur system for isolerte menneskelige fungiform smak papiller celler. Celler fra menneskelig fungiform papillae fremstilt ved biopsi ble vellykket opprettholdt i kulturen for mer enn åtte passasjer (12 måneder) uten tap av levedyktighet. Celler vist mange molekylære og fysiologiske egenskaper som kjennetegner modne smak celler. Gustducin og fosfolipase C β2, (PLC-β2) mRNA ble oppdaget i mange celler ved revers transkriptase-polymerase kjedereaksjon og bekreftet av sekvensering. Immunocytochemistry analyse viste tilstedeværelse av vindkastducin og PLC-β2 uttrykk i dyrkede smak celler. Dyrkede humane fungiform celler også utstilt økninger i intracellulært kalsium i respons til passende konsentrasjoner av flere smaks stimuli som tyder på at smak reseptorer og minst noen av de signalveier var til stede. Disse resultatene indikerer at tilstrekkelig smak celler fra voksne mennesker kan genereres og opprettholdes i minst åtte passeringer. Mange av cellene beholder fysiologiske og biokjemiske egenskaper akutt isolerte celler fra voksne smak epitelet til å støtte deres bruk som en modell smak system. Dette systemet vil gjøre det mulig videre studier av de prosessene som er involvert i spredning, differensiering og funksjon av mammalske smak reseptor celler i en in vitro forberedelse. Menneskelig fungiform smak papillae brukt for å opprette menneskelig fungiform cellekultur ble donert til forskning etter riktig informert samtykke under forskning protokoller som ble anmeldtog godkjent av IRB komiteen. Protokollen (# 0934) ble godkjent av Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Skriftlig protokoll nedenfor er basert på publiserte parametere som rapporteres av Ozdener et al. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Vi ønsket å utvikle en reproduserbar protokoll for å isolere og vedlikeholde langsiktige kulturer av humane fungiform smak papiller celler. Celler fra menneskelig fungiform papillae fremstilt ved biopsi ble vellykket opprettholdt i kulturen for mer enn åtte passasjer (12 måneder) uten tap av levedyktighet.

Isolering og kultur for Human Fungiform Taste papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolasjon og kultur av neural crest stamceller fra Human Hair Follikler

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolasjon og utvidelse av Human glioblastoma multiforme kreftceller Bruke Neurosphere Assay

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolering og kultur Rat Embryonale nevrale celler: En rask protokoll

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering og kultur neural crest Celler fra Embryonic murin Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolasjon og kultur av mus Kortikale Astrocytes

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolasjon og kultur av endotelceller fra Embryonale brain

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Denver papiller Protokoll for Objective Analysis of fungiform papiller

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Smak Preference Assay for voksne<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolasjon og Culture of Adult Neural stamceller fra mus Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...