Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Vi tackar Aimee Myers och ESI Quayson för tekniska färdigheter och hjälpa. Detta arbete stöddes delvis av NSF 0216310 och Givaudan Inc bidrag (NER).

1. Skaffa Human papiller Fungiform Taste <ol><li> Avlägsna 07:56 humant papiller fungiform smak från den dorsala ytan av den främre delen av tungan med användning krökt fjäder mikrosax. </li><li> Rum omedelbart in i en isolerad lösning (26 mM NaHCOs 3, 2,5 mM NaH 2 PO 4, 20 mM glukos, 65 mM NaCl, 20 mM KCl och 1 mM EDTA upplöstes i nukleas-fritt vatten och filtersteriliseras). </li></ol> 2. Human Fungiform Smak papiller Digerering <p class="jove_conten...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

Vi har behållit celler från människa fungiform smak papiller i över 8 passager, som spänner över en period på 12 månader. Dessa kulturer genererar nya celler, av vilka många förfaller in vitro till det stadium där de uttrycker flera markörer för mogna celler smaklökar typer förutom viktiga molekylära och fysiologiska egenskaper hos celler smak receptor. Närvaro av gustducin-och PLC-β2 immunoreaktivitet i underuppsättningar av odlade celler är i överensstämmelse med denna slutsats. Viktigas...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscoves DMEM-medium </td><td> Mediatech </td></tr><tr><td> Elastas </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronas E </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastas </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Sojaböna trypsininhibitor </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Kollagenas typ 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Råttsvanskollagen typ 1 </td><td> BD Sciences </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molecular Probes </td></tr><tr><td> Upphöjd First Strand Synthesis System för RT-PCR </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spectral konfokalmikroskop </td><td> Leica Microsystems Inc. </TD&gt; </tr><tr><td> Discovery-1 avbildning station och Metamorph mjukvara </td><td> Molecular Devices </td></tr><tr><td> Små fin spets tång och extra fina saxar våren </td><td> Fina Science Tools </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Smak celler är mycket specialiserade, med unika histologiska och molekylära och fysiologiska egenskaper som medger detektering av ett brett spektrum av enkla stimuli och komplexa molekyler kemiska finns i livsmedel. I human, individuell fungiform papiller innehåller från noll till så många som 20 smaklökar. Det finns ingen etablerat protokoll för odling av humana smak celler, även om förmågan att upprätthålla celler smak papiller i kultur för flera cellcykler skulle vara av stor användbarhet för att karakterisera de molekylära, regenerativ och funktionella egenskaperna hos dessa unika sensoriska celler. Tidigare studier smak celler har gjorts med hjälp nybakade isolerade celler i primär kultur, explantatodlingarna från gnagare, eller semi-intakta smaklökar i vävnadssnitt 1,2,3,4. Även om vart och ett av dessa preparat har fördelar, skulle utvecklingen på lång sikt kulturer har gett betydande fördelar, särskilt för studier av smak celltillväxt och differentiation. Flera grupper, inklusive vår, har varit intresserade av utvecklingen och inrättandet av kultur smak cellmodeller. De flesta försök till celler kultur smak har rapporterat begränsad viabilitet, med celler normalt inte varar längre än 3-5 d. 5,6,7,8. Vi rapporterade nyligen om en framgångsrik metod för förlängd odling av celler gnagare smak 9. Vi rapporterar här för första gången inrättandet av ett in vitro odlingssystem för isolerade humana papiller fungiform smak celler. Celler från mänsklig fungiform papiller som erhållits genom biopsi framgångsrikt upprätthölls i kultur under mer än åtta passager (12 månader) utan förlust av livskraft. Celler visade många molekylära och fysiologiska egenskaper som kännetecknar mogna smak celler. Gustducin och fosfolipas C β2, (PLC-β2)-mRNA detekterades i många celler genom omvänd transkriptas-polymeras kedjereaktion och bekräftades genom sekvensering. Immunocytokemi analys påvisade närvaron av vindstötensducin och PLC-β2 uttryck i odlade celler smak. Odlade humana fungiform celler uppvisade också ökningar i intracellulärt kalcium som svar på lämpliga koncentrationer av flera smak stimuli som indikerar att smakreceptorer och åtminstone en del av de signalvägar var närvarande. Dessa resultat räcker indikerar att smak celler från vuxna människor kan skapas och upprätthållas under minst åtta passager. Många av cellerna behåller fysiologiska och biokemiska egenskaper hos akut isolerade celler från vuxna smaken epitelet för att stödja deras användning som en modell smak system. Detta system kommer att möjliggöra ytterligare studier av de processer som ingår i proliferation, differentiering och funktion av däggdjursceller smak receptor i en in vitro beredning. Human fungiform smak papiller som används för att fastställa den mänskliga kulturen fungiform cell donerade för forskning efter vederbörligt informerat samtycke i enlighet med forskning protokoll som har granskatsoch godkänts av IRB utskottet. Protokollet (# 0934) godkändes av Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Skriftligt protokoll nedan är baserad på publicerade parametrar som rapporterats av Ozdener et al. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Vi syftade till att utveckla en reproducerbar protokoll för att isolera och bibehålla långsiktiga kulturer av mänskliga papiller fungiform smak celler. Celler från mänsklig fungiform papiller som erhållits genom biopsi framgångsrikt upprätthölls i kultur under mer än åtta passager (12 månader) utan förlust av livskraft.

Isolering och kultur mänskliga papiller Fungiform smak celler

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolering och odling av neurala celler Crest härrör från mänskliga hårsäckar

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lektin-baserade isolering och odling av mus Embryonala Motoneurons

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering och utbyggnad av tumour glioblastoma multiforme celler med Neurosphere analys

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolering och kultur råttembryonala neurala celler: En snabb protokoll

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolering och odling av Mus Kortikala Astrocyter

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolering och odling av endotelceller från embryonal framhjärnan

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Denver Papiller Protokoll för objektiv analys av Fungiform Papiller

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Smak preferens analys för vuxna<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolering och kultur av vuxna neurala stamceller från mus Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...