Name: isolation and culture of human fungiform taste papillae cells
Uploaded: 2012-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Biz Aimee Myers ve teknik beceri ve yardım için Esi Quayson teşekkür ederim. Bu çalışma NSF 0216310 ve GIVAUDAN Inc hibe (NER) tarafından kısmen desteklenmiştir.

1. İnsan Mantar şeklinde Tat papilla Alınması <ol><li> Kavisli yay microscissors kullanılarak dilin ön kısmının dorsal yüzeyi 4-8 insan mantarbiçim tat papilla çıkarın. </li><li> Hemen bir izolasyon çözeltisi içine yerleştirme (26 mM NaHCO 3, 2,5 mM NaH 2 PO 4, 20 mM glükoz, 65 mM NaCl, 20 mM KCI, ve 1 mM EDTA nükleaz serbest su içinde çözülür ve steril filtre). </li></ol> 2. İnsan Mantar şeklinde Tat papilla Sindirim <p class="jove_...

<ol>
	<li>Mbiene, J. P., Maccallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia.">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> J. Comp. Neurol. 377, 324-340 (1997).</li><li>Miyamoto, T., Fujiyama, R., Okada, Y., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+difference+in+amiloride-sensitivity+of+salt-induced+responses+in+mouse+non-dissociated+taste+cells.">Strain difference in amiloride-sensitivity of salt-induced responses in mouse non-dissociated taste cells.</a> Neurosci. Lett. 277, 13-16 (1999).</li><li>Caicedo, A., Jafri, M. S., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> J. Neurosci. 20, 7978-7985 (2000).</li><li>Qin, Y. M., Shi, J. Q., Zhang, G. H., Deng, S. P., Wang, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+to+obtain+cells+of+taste+buds+from+fungiform+papillae+of+mice.">A reliable method to obtain cells of taste buds from fungiform papillae of mice.</a> Acta Histochem. 112, 107-112 (2010).</li><li>Spielman, A. I., Mody, I., Brand, J. G., Whitney, G., MacDonald, J. F., Salter, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+isolating+and+patch-clamping+single+mammalian+taste+receptor+cells.">A method for isolating and patch-clamping single mammalian taste receptor cells.</a> Brain Res. 503, 326-329 (1989).</li><li>Kishi, M., Emori, Y., Tsukamoto, Y., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+rat+taste+bud+cells+that+retain+molecular+markers+for+taste+buds+and+permit+functional+expression+of+foreign+genes.">Primary culture of rat taste bud cells that retain molecular markers for taste buds and permit functional expression of foreign genes.</a> Neuroscience. 106, 217-225 (2001).</li><li>Ruiz, C. J., Stone, L. M., McPheeters, M., Ogura, T., Bottger, B., Lasher, R. S., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+rat+taste+buds+in+primary+culture.">Maintenance of rat taste buds in primary culture.</a> Chem. Senses. 26, 861-873 (2001).</li><li>Stone, L. M., Tan, S. S., Tam, P. P., Finger, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+lineage+relationships+in+taste+buds.">Analysis of cell lineage relationships in taste buds.</a> J. Neurosci. 22, 4522-4529 (2002).</li><li>Ozdener, H., Yee, K. K., Cao, J., Brand, J. G., Teeter, J. H., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+long-term+maintenance+of+rat+taste+cells+in+culture.">Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.</a> Chem. Senses. 31, 279-290 (2006).</li><li>Ozdener, M. H., Brand, J. G., Spielman, A. I., Lischka, F. W., Teeter, J. H., Breslin, P. A., Rawson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Human+Fungiform+Papillae+Cells+in+Culture.">Characterization of Human Fungiform Papillae Cells in Culture.</a> Chem. Senses. 36, 601-612 (2011).</li><li>Gomez, G., Rawson, N. E., Hahn, C. G., Michaels, R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+odorant+elicited+calcium+changes+in+cultured+human+olfactory+neurons.">Characteristics of odorant elicited calcium changes in cultured human olfactory neurons.</a> J. Neurosci. Res. 62, 737-749 (2000).</li><li>Wolozin, B., Sunderland, T., Zheng, B. B., Resau, J., Dufy, B., Barker, J., Swerdlow, R., Coon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+culture+of+neuronal+cells+from+adult+human+olfactory+epithelium.">Continuous culture of neuronal cells from adult human olfactory epithelium.</a> J. Mol. Neurosci. 3, 137-146 (1992).</li><li>Wick, N., Saharinen, P., Saharinen, J., Gurnhofer, E., Steiner, C. W., Raab, I., Stokic, D., Giovanoli, P., Buchsbaum, S., Burchard, A., Thurner, S., Alitalo, K., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomal+comparison+of+human+dermal+lymphatic+endothelial+cells+ex+vivo+and+in+vitro.">Transcriptomal comparison of human dermal lymphatic endothelial cells ex vivo and in vitro.</a> Physiol. Genomics. 17, 179-192 (2007).</li><li>Fu, L., Zhu, L., Huang, Y., Lee, T. D., Forman, S. J., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+stem+cells+from+mesenchymal+stemcells:+evidence+for+a+bipotential+stem+cell+population.">Derivation of neural stem cells from mesenchymal stemcells: evidence for a bipotential stem cell population.</a> Stem Cells Dev. 17, 1109-1121 (2008).</li><li>Sandow, S. L., Grayson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+of+isolation+and+culture:+intact+vascular+endothelium+and+BKCa.">Limits of isolation and culture: intact vascular endothelium and BKCa.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297, H1-H7 (2009).</li></ol>

Biz 12 aylık bir dönemi kapsayan, 8 üzerinden geçişler için insan mantarbiçim tat papilla elde edilen hücrelerin korumuştur. Bu kültürler bunlar tat reseptör hücrelerinin anahtar moleküler ve fizyolojik özelliklerine ilave olarak, olgun tat hücre tipleri birkaç belirteçler ifade burada aşama için in vitro olgunlaşması birçoğu yeni hücreler, üretir. Varlığı gustducin-ve PLC-β2 kültürlü hücrelerin alt gruplarında immünoreaktivite bu sonuç ile tutarlıdır. En önemlisi, bazı ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td></tr><tr><td> MCDB 123 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Iscove en DMEM Orta </td><td> Mediatech </td></tr><tr><td> Elastaz </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Pronazın D </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Elastaz </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Soya fasulyesi tripsin inhibitörü </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Kollajenaz tip 1 </td><td> Worthington </td></tr><tr><td> Fare kuyruk kolajeni tipi 1 </td><td> BD Bilimleri </td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Molecular Probes </td></tr><tr><td> RT-PCR için Superscript First Strand Synthesis Sistemi </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Leica TCS SP2 Spektral Konfokal Mikroskop </td><td> Leica Microsystems Inc </td&gt; </tr><tr><td> Discovery-1 görüntüleme istasyonu ve Metamorph yazılım </td><td> Molecular Devices </td></tr><tr><td> Küçük ince uçlu pens ve ekstra ince yay makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of human fungiform taste papillae cells

Tat hücreleri gıdaların içerdiği basit uyaranlara ve karmaşık kimyasal moleküllerin geniş bir algılama izin özgü histolojik, moleküler ve fizyolojik özelliklere sahip, son derece uzmanlaşmış bulunmaktadır. İnsan, bireysel mantarbiçim papillada sıfırdan 20 kadar tat tomurcukları ihtiva etmektedir. Birden çok hücre döngüsü için kültür tat papilla hücrelerini korumak için yeteneği bu eşsiz duyusal hücrelerin, moleküler rejeneratif ve fonksiyonel özellikleri tanımlamak için önemli faydası olacaktır ancak kültür, insan tat hücreleri için oluşturulmuş protokol vardır. Tat hücrelerinin daha önceki çalışmalarda primer kültür, kemirgenler gelen eksplant kültürleri, ya da doku dilimleri 1,2,3,4 yarı sağlam tat tomurcukları taze olarak izole edilen hücreler kullanılarak yapılmıştır. Bu preparatlar, her avantajlara sahip olmakla birlikte, uzun dönem kültürlerin gelişimi, özellikle tat hücre proliferasyonu ve yönün çalışmaları için, önemli avantajlar sağladığı olacaktırentiation. Bizimki de dahil olmak üzere çeşitli gruplar, tat hücre kültürü modellerin geliştirilmesi ve kurulması ilgi olmuştur. Kültür tat hücreleri girişimleri, 3-5 d 5,6,7,8 ötesinde genellikle kalıcı değildir hücreleri ile sınırlı canlılığı bildirdin. Biz son zamanlarda kemirgen tat hücrelerinin 9 genişletilmiş kültürü için başarılı bir yöntem bildirdi. Biz burada ilk kez izole insan mantarbiçim tadı papilla hücrelerinin in vitro kültür sistemi bir kurulması için rapor. Biyopsi ile elde edilen insan mantarbiçim papilla hücreleri başarıyla canlılık kaybı olmadan daha sekiz pasajlar (12 ay) için kültüre edildi. Hücreler olgun tat hücrelerinin karakteristik birçok moleküler ve fizyolojik özellikleri görüntülenir. Gustducin ve fosfolipaz C β2, (PLC-β2) mRNA ters transkriptaz-polimeraz zincir reaksiyonu ile birçok hücre tespit ve sıralama tarafından teyit edildi. İmmünositokimya analizi bora varlığını göstermiştirKültüre tat hücrelerinde ducin ve PLC-β2 ifade. Kültürlü insan mantarbiçim hücreleri de tat reseptörleri ve sinyal yolunun en azından bazı mevcut olduğunu gösteren birçok tat uyaran Uygun konsantrasyonlarda yanıt olarak hücre içi kalsiyum artış sergiledi. Bu sonuçlar yeterli yetişkin insanlardan tat hücreleri oluşturulur ve en az sekiz geçişleri için muhafaza edilebilir olduğunu göstermektedir. Hücrelerin çoğu bir model tat sistemi olarak kullanımı desteklemek için yetişkin tadı epitelden akut izole hücrelerin fizyolojik ve biyokimyasal özelliklerini korurlar. Bu sistem, in vitro hazırlanmasında bir memeli tat reseptör hücrelerin proliferasyonu, farklılaşması ve işlevi ile ilgili işlemlerin çalışmalara sağlayacaktır. Insan mantarbiçim hücre kültürü oluşturulması için kullanılan İnsan mantarbiçim tadı papilla incelendi araştırma protokolleri altında uygun bilgilendirilmiş onam sonrasında araştırma için hibe edildive İDD komitesi tarafından onaylandı. Protokolü (# 0934) Schulman Associates Kurumsal Değerlendirme Kurulu Inc, Cincinnati, OH tarafından onaylandı. Aşağıda yazılı bir protokol Özdener ark yayınlanan parametreleri dayanmaktadır. 2011 10.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Biz insan mantarbiçim tat papilla hücrelerinin uzun süreli kültürlerde izole edilmesi ve sürdürülmesi için tekrarlanabilir bir protokol geliştirmeyi amaçladık. Biyopsi ile elde edilen insan mantarbiçim papilla hücreleri başarıyla canlılık kaybı olmadan daha sekiz pasajlar (12 ay) için kültüre edildi.

İnsan Mantar şeklinde Lezzet papilla hücrelerinin izolasyonu ve Kültürü

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Fare Embriyonik motor nöronlar lektin tabanlı İzolasyon ve Kültür

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi İnsan Glioblastoma Multiforme Tümör Hücreleri İzolasyon ve Genişleme

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Sıçan Embriyonik Nöral Hücre İzolasyonu ve Kültür: Bir Hızlı Protokol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Fare Kortikal astrositlerde İzolasyon ve Kültür

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Embriyonik ön beyin gelen Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Mantar şeklinde papilla Amaç Analizi Denver Papilla Protokolü

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Yetişkin için tat Tercihi Testi<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...