Name: isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea
Uploaded: 2012-09-14T12:00:00
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Wir möchten die Grundzüge der Stem Cell Research Center FACS anerkennen und vor allem danke Jessica Scholes und Felicia Codrea für ihre Hilfe bei der Zellsortierung. Die Arbeit wurde durch CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, American Thoracic Society / COPD Foundation ATS-06-065, Das Concern Foundation, The UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center Thoracic Oncology Program / Lung Cancer SPORE, der University of California Cancer finanziert Forschung Coordinating Committee und das Gwynne Hazen Kirsche Memorial Laboratories (BG).

Outline of Steps Ein. Dissection der Luftröhre 2. Reinigung Luftröhre und Schneiden 3. Enzymverdau und Verarbeitung zu Einzelzellsuspension 4. Färbung für FACS und Sortierung 5. Verarbeitung sortierten Zellen in vivo und in vitro-Modelle Ein. Dissektion der Trachea <ol><li> Euthanize die Maus mit einer intraperitonealen Injektio...

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	<li>Bartlett, J. A., Fischer, A. J., McCray, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+functions+of+the+airway+epithelium.">Innate immune functions of the airway epithelium.</a> Contrib. Microbiol. 15, 147-163 (2008).</li><li>Finkbeiner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+and+pathology+of+tracheobronchial+glands.">Physiology and pathology of tracheobronchial glands.</a> Respir. Physiol. 118, 77-83 (1999).</li><li>Hegab, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Stem/Progenitor+Cell+Population+from+Murine+Tracheal+Submucosal+Gland+Ducts+with+Multipotent+Regenerative+Potential.">A Novel Stem/Progenitor Cell Population from Murine Tracheal Submucosal Gland Ducts with Multipotent Regenerative Potential.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Jeffery, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+features+of+airway+surface+epithelial+cells+and+glands.">Morphologic features of airway surface epithelial cells and glands.</a> Am. Rev. Respir. Dis. 128, S14-S20 (1983).</li><li>Rock, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 12771-12775 (2009).</li><li>Goldstein, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trop2+identifies+a+subpopulation+of+murine+and+human+prostate+basal+cells+with+stem+cell+characteristics.">Trop2 identifies a subpopulation of murine and human prostate basal cells with stem cell characteristics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20882-20887 (2008).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>McQualter, J. L., Yuen, K., Williams, B., Bertoncello, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+an+epithelial+stem/progenitor+cell+hierarchy+in+the+adult+mouse+lung.">Evidence of an epithelial stem/progenitor cell hierarchy in the adult mouse lung.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1414-1419 (2010).</li><li>Inayama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+growth+and+differentiation+of+clones+of+tracheal+basal+cells.">In vitro and in vivo growth and differentiation of clones of tracheal basal cells.</a> Am. J. Pathol. 134, 539-549 (1989).</li><li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 283, L1315-L1321 (2002).</li><li>Wu, X., Peters-Hall, J. R., Bose, S., Pena, M. T., Rose, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Bronchial+Epithelial+Cells+Differentiate+to+3D+Glandular+Acini+on+Basement+Membrane+Matrix.">Human Bronchial Epithelial Cells Differentiate to 3D Glandular Acini on Basement Membrane Matrix.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. , (2010).</li><li>Ooi, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+a+putative+tumor-initiating+progenitor+cell+population+predicts+poor+prognosis+in+smokers+with+non-small+cell+lung+cancer.">Presence of a putative tumor-initiating progenitor cell population predicts poor prognosis in smokers with non-small cell lung cancer.</a> Cancer Res. 70, 6639-6648 (2010).</li></ol>

Diese Technik zum Kanal und basalen Zellen aus den Atemwegen zu isolieren, ist für ein besseres Verständnis der Atemwege Reparatur und Regeneration und Atemwegserkrankungen wichtig. Die hier beschriebenen Techniken sind ein paar wichtige Schritte. Die erste ist die optimierte enzymatische Verdauung Zeitraum. Die zweite ist die Schaffung eines einheitlichen Zellsuspension durch serielle Passage mit progressiv höhere Gage Nadeln Zelle Scherung zu verhindern, sondern brechen Zellklumpen. Die dritte ist die FACS-Analyse,...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Vollmedium 10: DMEM-F-12, 50/50, 1X) </td><td> Mediatech </td><td> 15-090-CV </td></tr><tr><td> Hepes (15 mM) </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td></tr><tr><td> Natriumbicarbonat (3,6 mm oder 0,03%) </td><td> Invitrogen </td><td> 25080 </td></tr><tr><td> L-Glutamin (4 mM) </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-Cl </td></tr><tr><td> Penicillin (100 E / ml) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> Streptomycin (100 ug / m) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> Amphotericin B (0,25 g / ml) </td><td> Lonza </td><td> 17-836R </td></tr><tr><td> InSulin (10 ug / ml) </td><td> Sigma </td><td> I6634 </td></tr><tr><td> Transferrin (5 ug / ml) </td><td> Sigma </td><td> T1147 </td></tr><tr><td> Cholera-Toxin (0,1 ug / ml) </td><td> Sigma </td><td> C8052 </td></tr><tr><td> Epidermal Growth Factor (25 ng / ml) </td><td> BD </td><td> 354001 </td></tr><tr><td> Rinderhypophysenextrakt (30 ug / ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 13028-014 </td></tr><tr><td> Fötalem Rinderserum (5%) </td><td> Fischer </td><td> SH3008803HI </td></tr><tr><td> Retinsäure (0,05 pM) </td><td> Sigma </td><td> R2625 </td></tr><tr><td> Growth Factor Reduced Matrigel </td><td> BD </td><td> 354230 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Füllen Media-Komponenten. <table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td&gt; <td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Pronase </td><td> Roche </td><td> 10165921001 </td><td> Gebrauchte bei 0,15%: -O / n bei 4 ° C Verdauung insgesamt trachealen Zellen (ALI Kultur) zu isolieren -4 Hr Verdauung 4 ° C bis zu isolieren SMG </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> BD Biosciences </td><td> 354235 </td><td> Gebrauchte bei 16 Einheiten: 30 min bei RT </td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> DN25 </td><td> Verwendet bei 0,5 mg / ml: 20-30 min bei RT </td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Enzyme für die enzymatische Verdauung der Luftröhre eingesetzt.

isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea

Die große Atemwege sind in direktem Kontakt mit der Umwelt und daher anfälliger für Verletzungen von Toxinen und Krankheitserregern, dass wir den Atem in 1. Die großen Atemwege erfordern daher eine effiziente Reparatur-Mechanismus, um unseren Körper zu schützen. Diese Reparatur-Prozess tritt aus Stammzellen in den Atemwegen und Isolierung dieser Stammzellen aus den Atemwegen ist wichtig für das Verständnis der Mechanismen der Reparatur und Regeneration. Es ist auch für das Verständnis abnorme Reparatur, die Atemwegserkrankungen 2 führen kann wichtig. Das Ziel dieses Verfahrens ist es, ein neues Stammzellpopulation von den Maus trachealen submucosalem Drüsenkanäle isolieren und diese Zellen in vitro und in vivo Modellsystem zu platzieren, um die Mechanismen der Reparatur und Regeneration der submucosalen Drüsen 3 zu identifizieren. Diese Produktion zeigt Methoden, die zur Isolierung und Test der Kanal-und basalen Stammzellen aus dem großen Atemwege 3 werden kann. Dies wird uns erlaubenzu Erkrankungen der Atemwege, wie zystischer Fibrose, Asthma und chronisch obstruktiver Lungenerkrankung studieren. Derzeit gibt es keine Verfahren zur Isolierung von submucosalem Drüse Gangzellen und keine in vivo-Modellen, um die Regeneration des submucosalen Drüsen studieren.

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Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

Hier zeigen wir unser Protokoll zur Isolierung von basalen und submuköse Drüsen Gangzellen von Maus Luftröhre. Darüber hinaus zeigt das Verfahren zum Einspritzen von Stammzellen in die dorsale Maus Fettkörper ein erstellen<em&gt; In vivo</em&gt; Modell der submukösen Drüsen Regeneration.

Isolierung von Basalzellen und Submuköse Gland Duct Zellen aus Maus Trachea

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Forschung

Biologie

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolation und Ableitung von embryonalen Maus-Keimzellen

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolierung von Retinal Stammzellen aus der Maus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Isolierung von Maus Speicheldrüsen Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolierung und Kultivierung von Zellen aus dem Nephrogene Zone der embryonalen Maus Niere

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolierung von Immunzellen aus Primärtumoren

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolierung und Kultivierung von primären Maus Azinuszellen des Pankreas

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...