Name: isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea
Uploaded: 2012-09-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea at JoVE.com

ברצוננו להכיר את FACS הרחב תאי גזע מרכז המחקר ומודה במיוחד לג&#39;סיקה סקולס ופליציה Codrea על עזר במיון תא. העבודה מומנה על ידי CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, אגודה אמריקנית בית חזה / COPD קרן ATS-06-065, קרן הדאגה, נבג Jonsson UCLA המקיף במרכז סרטן חזה אונקולוגיה תכנית / סרטן הריאות, הסרטן של אוניברסיטת קליפורניה מחקר ועדת תיאום וGwynne הייזן דובדבן זכרון המעבדות (BG).

קווי מתאר של צעדים 1. נתיחה של קנה נשימה 2. ניקוי קנה נשימה וחותך אותו 3. אנזים עיכול ועיבוד לתוך השעית תא בודדה 4. הכתמה ?...

<ol>
	<li>Bartlett, J. A., Fischer, A. J., McCray, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+functions+of+the+airway+epithelium.">Innate immune functions of the airway epithelium.</a> Contrib. Microbiol. 15, 147-163 (2008).</li><li>Finkbeiner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+and+pathology+of+tracheobronchial+glands.">Physiology and pathology of tracheobronchial glands.</a> Respir. Physiol. 118, 77-83 (1999).</li><li>Hegab, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Stem/Progenitor+Cell+Population+from+Murine+Tracheal+Submucosal+Gland+Ducts+with+Multipotent+Regenerative+Potential.">A Novel Stem/Progenitor Cell Population from Murine Tracheal Submucosal Gland Ducts with Multipotent Regenerative Potential.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Jeffery, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+features+of+airway+surface+epithelial+cells+and+glands.">Morphologic features of airway surface epithelial cells and glands.</a> Am. Rev. Respir. Dis. 128, S14-S20 (1983).</li><li>Rock, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 12771-12775 (2009).</li><li>Goldstein, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trop2+identifies+a+subpopulation+of+murine+and+human+prostate+basal+cells+with+stem+cell+characteristics.">Trop2 identifies a subpopulation of murine and human prostate basal cells with stem cell characteristics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20882-20887 (2008).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>McQualter, J. L., Yuen, K., Williams, B., Bertoncello, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+an+epithelial+stem/progenitor+cell+hierarchy+in+the+adult+mouse+lung.">Evidence of an epithelial stem/progenitor cell hierarchy in the adult mouse lung.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1414-1419 (2010).</li><li>Inayama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+growth+and+differentiation+of+clones+of+tracheal+basal+cells.">In vitro and in vivo growth and differentiation of clones of tracheal basal cells.</a> Am. J. Pathol. 134, 539-549 (1989).</li><li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 283, L1315-L1321 (2002).</li><li>Wu, X., Peters-Hall, J. R., Bose, S., Pena, M. T., Rose, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Bronchial+Epithelial+Cells+Differentiate+to+3D+Glandular+Acini+on+Basement+Membrane+Matrix.">Human Bronchial Epithelial Cells Differentiate to 3D Glandular Acini on Basement Membrane Matrix.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. , (2010).</li><li>Ooi, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+a+putative+tumor-initiating+progenitor+cell+population+predicts+poor+prognosis+in+smokers+with+non-small+cell+lung+cancer.">Presence of a putative tumor-initiating progenitor cell population predicts poor prognosis in smokers with non-small cell lung cancer.</a> Cancer Res. 70, 6639-6648 (2010).</li></ol>

טכניקה זו לבודד תאים הבזליים מצינור ודרכי הנשימה היא חשובה לשיפור ההבנה של דרך נשימת תיקון והתחדשות ומחלות של דרך נשימה שלנו. הטכניקות המתוארות כאן כוללות כמה שלבים קריטיים. הראשון הוא תקופת העיכול אנזימטי האופטימלית. השני הוא היצירה של השעית תא בודדה דרך סידורי passag...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> השלם בינוני 10: DMEM-F-12, 50/50, 1X) </td><td> Mediatech </td><td> 15-090-CV </td></tr><tr><td> Hepes (15 מ&quot;מ) </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td></tr><tr><td> סודיום ביקרבונט (3.6mm או 0.03%) </td><td> Invitrogen </td><td> 25080 </td></tr><tr><td> L-גלוטמין (4 מ&quot;מ) </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-Cl </td></tr><tr><td> פניצילין (100 U / ml) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> סטרפטומיצין (100 מיקרוגרם / מ &#39;) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> Amphotericin B (0.25 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> Lonza </td><td> 17-836R </td></tr><tr><td> בתוךsulin (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> סיגמא </td><td> I6634 </td></tr><tr><td> Transferrin (5 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> סיגמא </td><td> T1147 </td></tr><tr><td> רעלן הכולרה (0.1 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> סיגמא </td><td> C8052 </td></tr><tr><td> עוריות Growth Factor (25 ng / ml) </td><td> BD </td><td> 354001 </td></tr><tr><td> תמצית יותרת מוח שור (30 מיקרוגרם / מ&quot;ל) </td><td> Invitrogen </td><td> 13028-014 </td></tr><tr><td> סרום שור עוברי (5%) </td><td> דיג </td><td> SH3008803HI </td></tr><tr><td> חומצה רטינואית (0.05 מיקרומטר) </td><td> סיגמא </td><td> R2625 </td></tr><tr><td> גורם גדילה מופחתת Matrigel </td><td> BD </td><td> 354230 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. השלם רכיבי תקשורת. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td&gt; <td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Pronase </td><td> רוש </td><td> 10165921001 </td><td> השתמש ב 0.15%: -O / n ב 4 ° C עיכול לבודד תאי קנה נשימה של כלל (לתרבות ALI) עיכול -4 שעות 4 ° C כדי לבודד SMG </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> BD Biosciences </td><td> 354235 </td><td> השתמש ב 16 יחידות: 30 דקות ב RT </td></tr><tr><td> אני DNase </td><td> סיגמא </td><td> DN25 </td><td> השתמש ב 0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל: 20-30 דקות ב RT </td></tr></tbody></table> טבלה 2. אנזימים המשמשים לעיכול האנזימטית של קנה הנשימה.

isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea

דרכי האוויר הגדולות הן ישירות במגע עם הסביבה ולכן רגישות לפגיעה מרעלים וחומרים מזהמים שאנו נושמים ב1. דרכי האוויר הגדולות ולכן דורשות מנגנון תיקון יעיל כדי להגן על גופנו. תהליך תיקון זה מתרחש מתאי גזע בדרכי אוויר ובידוד תאי גזע מדרך הנשימה הוא חשוב להבנת המנגנונים של תיקון והתחדשות. זה גם חשוב להבנת תיקון חריג שעלול להוביל למחלות דרך נשימת 2. המטרה של שיטה זו היא לבודד את אוכלוסיית תאי גזע רומן מצינוריות בלוטת submucosal קנה הנשימה של העכבר ולמקם את התאים האלה במבחנה במערכות מודל vivo לזהות את המנגנונים של תיקון והתחדשות של בלוטות submucosal 3. ייצור זה מציג שיטות שיכולות לשמש לבידוד ובדיקת תאי הגזע הדביקים ובסיסיים מ3 דרכי האוויר הגדולות. זה יאפשר לנוללמוד מחלות של דרך הנשימה, כגון סיסטיק פיברוזיס, אסתמה ומחלת ריאות חסימתית כרונית. נכון לעכשיו, אין שיטות לבידוד של תאי צינור בלוטה submucosal ואין במודלי vivo ללמוד התחדשות של בלוטות submucosal.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea at JoVE.com

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

כאן אנו מראים הפרוטוקול שלנו לבידוד של תאי צינור בלוטה הבזליים וקנה נשימת submucosal מעכבר. גם אנחנו מדגימים את השיטה של ​​הזרקת תאי גזע לכרית השומן הגבה עכבר כדי ליצור<em&gt; In vivo</em&gt; מודל של התחדשות הבלוטה submucosal.

בידוד של תאי בסיס ותאי בלוטת Duct Submucosal מעכבר קנה נשימה

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

בידוד של תאים מסוג CD4 + T מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור Miltenyi MACS

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

בידוד והתרבות של תאים מאזור nephrogenic של הכליה עכבר עובריים

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

בידוד והתרבות של תאי גזע השיניים אפיתל ממבוגרי העכבר הארקטיק

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...