Name: isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea
Uploaded: 2012-09-14T12:00:00
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Vorremmo riconoscere gli indirizzi di massima Stem Cell FACS centro di ricerca e in particolare ringrazio Jessica Scholes e Felicia Codrea per il loro aiuto con la selezione delle cellule. Il lavoro è stato finanziato dal CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, American Thoracic Society / BPCO Fondazione ATS-06-065, la Fondazione preoccupazione, Il toracica UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center Oncology Program / Lung Cancer SPORE, l&#39;Università della California Cancer La ricerca e il Comitato di Coordinamento Gwynne Hazen Cherry Memorial Laboratories (BG).

Schema delle fasi di 1. Dissezione della trachea 2. Pulizia trachea e tagliarlo 3. Enzima digestione e la trasformazione in sospensione singola cella 4. La colorazione per FACS e l&#39;ordinamento 5. Lavorazione di cellule filtrate per in vivo e in vitro 1. Dissezione di Trachea <ol><li> Euthanize il mouse con una iniezione intraper...

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	<li>Bartlett, J. A., Fischer, A. J., McCray, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+functions+of+the+airway+epithelium.">Innate immune functions of the airway epithelium.</a> Contrib. Microbiol. 15, 147-163 (2008).</li><li>Finkbeiner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+and+pathology+of+tracheobronchial+glands.">Physiology and pathology of tracheobronchial glands.</a> Respir. Physiol. 118, 77-83 (1999).</li><li>Hegab, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Stem/Progenitor+Cell+Population+from+Murine+Tracheal+Submucosal+Gland+Ducts+with+Multipotent+Regenerative+Potential.">A Novel Stem/Progenitor Cell Population from Murine Tracheal Submucosal Gland Ducts with Multipotent Regenerative Potential.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Jeffery, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+features+of+airway+surface+epithelial+cells+and+glands.">Morphologic features of airway surface epithelial cells and glands.</a> Am. Rev. Respir. Dis. 128, S14-S20 (1983).</li><li>Rock, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 12771-12775 (2009).</li><li>Goldstein, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trop2+identifies+a+subpopulation+of+murine+and+human+prostate+basal+cells+with+stem+cell+characteristics.">Trop2 identifies a subpopulation of murine and human prostate basal cells with stem cell characteristics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20882-20887 (2008).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>McQualter, J. L., Yuen, K., Williams, B., Bertoncello, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+an+epithelial+stem/progenitor+cell+hierarchy+in+the+adult+mouse+lung.">Evidence of an epithelial stem/progenitor cell hierarchy in the adult mouse lung.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1414-1419 (2010).</li><li>Inayama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+growth+and+differentiation+of+clones+of+tracheal+basal+cells.">In vitro and in vivo growth and differentiation of clones of tracheal basal cells.</a> Am. J. Pathol. 134, 539-549 (1989).</li><li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 283, L1315-L1321 (2002).</li><li>Wu, X., Peters-Hall, J. R., Bose, S., Pena, M. T., Rose, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Bronchial+Epithelial+Cells+Differentiate+to+3D+Glandular+Acini+on+Basement+Membrane+Matrix.">Human Bronchial Epithelial Cells Differentiate to 3D Glandular Acini on Basement Membrane Matrix.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. , (2010).</li><li>Ooi, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+a+putative+tumor-initiating+progenitor+cell+population+predicts+poor+prognosis+in+smokers+with+non-small+cell+lung+cancer.">Presence of a putative tumor-initiating progenitor cell population predicts poor prognosis in smokers with non-small cell lung cancer.</a> Cancer Res. 70, 6639-6648 (2010).</li></ol>

Questa tecnica di isolare cellule del dotto e basale dalle vie aeree è importante per migliorare la nostra comprensione della riparazione e rigenerazione delle vie aeree e malattie delle vie aeree. Le tecniche qui descritte sono a pochi passi critici. Il primo è il periodo ottimizzato digestione enzimatica. Il secondo è la creazione di una sospensione singola cellula tramite seriale passaging con aghi calibro progressivamente più elevate per impedire ghigliottina cella ma per rompere ammassi cellulari. Il terzo è l...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Completa media 10: DMEM-F-12, 50/50, 1X) </td><td> Mediatech </td><td> 15-090-CV </td></tr><tr><td> Hepes (15 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td></tr><tr><td> Bicarbonato di sodio (3,6 mm o 0,03%) </td><td> Invitrogen </td><td> 25080 </td></tr><tr><td> L-glutammina (4 mM) </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-Cl </td></tr><tr><td> Penicillina (100 U / ml) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> Streptomicina (100 mg / m) </td><td> Mediatech </td><td> 30-001-CI </td></tr><tr><td> Amfotericina B (0,25 mg / ml) </td><td> Lonza </td><td> 17-836R </td></tr><tr><td> Ininsulina (10 pg / ml) </td><td> Sigma </td><td> I6634 </td></tr><tr><td> Transferrina (5 mg / ml) </td><td> Sigma </td><td> T1147 </td></tr><tr><td> Tossina colerica (0,1 mcg / ml) </td><td> Sigma </td><td> C8052 </td></tr><tr><td> Epidermal Growth Factor (25 ng / ml) </td><td> BD </td><td> 354001 </td></tr><tr><td> Bovina estratto ipofisario (30 mg / ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 13028-014 </td></tr><tr><td> Siero fetale bovino (5%) </td><td> Pescatore </td><td> SH3008803HI </td></tr><tr><td> L&#39;acido retinoico (0,05 mM) </td><td> Sigma </td><td> R2625 </td></tr><tr><td> Fattore di crescita ridotto Matrigel </td><td> BD </td><td> 354230 </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Completare i componenti Media. <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td&gt; <td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Pronase </td><td> Roche </td><td> 10165921001 </td><td> Usato a 0,15%: -O / N a 4 ° C per isolare la digestione totale delle cellule tracheali per la cultura (ALI) -4 Digestione hr 4 ° C per isolare SMG </td></tr><tr><td> Dispasi </td><td> BD Biosciences </td><td> 354235 </td><td> Usato a 16 unità: 30 min a RT </td></tr><tr><td> DNasi I </td><td> Sigma </td><td> DN25 </td><td> Usato a 0,5 mg / ml: 20-30 min a RT </td></tr></tbody></table> Enzimi Tabella 2. Utilizzato per la digestione enzimatica della trachea.

isolation of basal cells and submucosal gland duct cells from mouse trachea

Grandi vie aeree sono direttamente in contatto con l&#39;ambiente e quindi suscettibile al danno da tossine e agenti infettivi che respiro in 1. Le vie aeree di grandi dimensioni richiedono quindi un meccanismo di riparazione efficace per proteggere i nostri corpi. Questo processo di ripristino si verifica a partire da cellule staminali delle vie aeree e isolare queste cellule staminali delle vie aeree è importante per la comprensione dei meccanismi di riparazione e rigenerazione. E &#39;anche importante per comprendere riparazione anormale che può portare a malattie delle vie aeree 2. L&#39;obiettivo di questo metodo è quello di isolare una nuova popolazione di cellule staminali da tracheali dotti delle ghiandole topo sottomucosi e di inserire in queste cellule in vitro e in vivo sistemi modello per identificare i meccanismi di riparazione e rigenerazione delle ghiandole della sottomucosa 3. Questa produzione mostra i metodi che possono essere utilizzati per isolare e saggio le cellule staminali condotto e basale del grande vie aeree 3. Questo ci permetteràstudiare le patologie delle vie aeree, come la fibrosi cistica, asma e malattia polmonare ostruttiva cronica. Attualmente, non esistono metodi per l&#39;isolamento delle cellule della ghiandola sottomucosa condotto e non ci sono modelli in vivo per studiare la rigenerazione delle ghiandole della sottomucosa.

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Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

Qui mostriamo il nostro protocollo per l&#39;isolamento di cellule della ghiandola basali e sottomucoso condotto da trachee del mouse. Abbiamo anche dimostrare il metodo di iniezione di cellule staminali nel cuscinetto di grasso dorsale del mouse per creare un<em&gt; In vivo</emModello&gt; di rigenerazione ghiandola sottomucosa.

Isolamento delle cellule basali e sottomucosa cellule del dotto di Gland mouse Trachea

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Ricerca

Biologia

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

L&#39;isolamento e la derivazione di cellule embrionali del mouse Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolamento di cellule staminali della retina dalla Eye mouse

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Isolamento di cellule staminali del mouse ghiandole salivari

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolamento e coltura di cellule dalla Zona nefrogenica del Rene embrionali di topo

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolamento di cellule immunitarie di tumori primari

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generazione di topi derivati ​​da cellule staminali pluripotenti indotte

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induzione e Analisi dei epiteliale a Mesenchymal Transizione

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolamento e Cultura del mouse principale acinose pancreatiche Cellule

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolamento e Cultura della Dental epiteliali cellule staminali del topo adulto Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...