Name: dissection of adult mouse utricle and adenovirus-mediated supporting-cell infection
Uploaded: 2012-03-28T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection at JoVE.com

Эта работа была поддержана Отделом Внутренние исследования в Национальном институте глухоты и других расстройств общения. Дополнительная поддержка была оказана NIDCD 5R01 DC007613.

1. Вскрытие мешочке и культуры <ol><li> Эвтаназии взрослых (4-недельного возраста и старше) мыши, используя утвержденного протокола и обезглавить. </li><li> Надрез наружный слуховой проход по обеим сторонам головы и подтягивает кожу вперед, к носу. Пополам голову задом наперед и удалять мозга с...

<ol>
	<li>Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+mouse+utricle+as+an+in+vitro+preparation+for+studies+of+ototoxic-drug-induced+sensory+hair+cell+death.">The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death.</a> Brain Res. , (2006).</li><li>Schmitt, N. C., Rubel, E. W., Nathanson, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin-induced+hair+cell+death+requires+STAT1+and+is+attenuated+by+epigallocatechin+gallate.">Cisplatin-induced hair cell death requires STAT1 and is attenuated by epigallocatechin gallate.</a> J. Neurosci. 29, 3843-3851 (2009).</li><li>Ou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+FDA-approved+drugs+and+bioactives+that+protect+hair+cells+in+the+zebrafish+(Danio+rerio)+lateral+line+and+mouse+(Mus+musculus)+utricle.">Identification of FDA-approved drugs and bioactives that protect hair cells in the zebrafish (Danio rerio) lateral line and mouse (Mus musculus) utricle.</a> J. Assoc. Res. Otolaryngol. 10, 191-203 (2009).</li><li>Chiu, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+zebrafish+lateral+line+to+screen+for+ototoxicity.">Using the zebrafish lateral line to screen for ototoxicity.</a> J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 178-190 (2008).</li><li>Sugahara, K., Rubel, E. W., Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JNK+signaling+in+neomycin-induced+vestibular+hair+cell+death.">JNK signaling in neomycin-induced vestibular hair cell death.</a> Hear Res. , 221-221 (2006).</li><li>Matsui, J. I., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+hair+cell+death+and+regeneration:+two+halves+of+the+same+equation.">Sensory hair cell death and regeneration: two halves of the same equation.</a> Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 12, 418-4125 (2004).</li><li>Ryals, B. M., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration+after+acoustic+trauma+in+adult+Coturnix+quail.">Hair cell regeneration after acoustic trauma in adult Coturnix quail.</a> Science. 240, 1774-176 (1988).</li><li>Corwin, J. T., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+sensory+hair+cells+after+acoustic+trauma.">Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma.</a> Science. 240, 1772-174 (1988).</li><li>Shang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supporting+cell+division+is+not+required+for+regeneration+of+auditory+hair+cells+after+ototoxic+injury+in+vitro.">Supporting cell division is not required for regeneration of auditory hair cells after ototoxic injury in vitro.</a> J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 203-222 (2010).</li><li>Stone, J. S., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration+in+the+avian+auditory+epithelium.">Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium.</a> Int. J. Dev. Biol. 51, 6-7 (2007).</li><li>Lahne, M., Gale, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage-induced+activation+of+ERK1/2+in+cochlear+supporting+cells+is+a+hair+cell+death-promoting+signal+that+depends+on+extracellular+ATP+and+calcium.">Damage-induced activation of ERK1/2 in cochlear supporting cells is a hair cell death-promoting signal that depends on extracellular ATP and calcium.</a> J. Neurosci. 28, 4918-4928 (2008).</li><li>Cunningham, L. L., Cheng, A. G., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+Hair+Cells+of+the+Mouse+Utricle+Exposed+to+Neomycin.">Caspase Activation in Hair Cells of the Mouse Utricle Exposed to Neomycin.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8532-8540 (2002).</li><li>Matsui, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+inhibitors+promote+vestibular+hair+cell+survival+and+function+after+aminoglycoside+treatment+in+vivo.">Caspase inhibitors promote vestibular hair cell survival and function after aminoglycoside treatment in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 6111-6122 (2003).</li><li>Matsui, J. I., Ogilvie, J. M., Warchol, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+caspases+prevents+ototoxic+and+ongoing+hair+cell+death.">Inhibition of caspases prevents ototoxic and ongoing hair cell death.</a> J. Neurosci. 22, 1218-1227 (2002).</li><li>Nakagawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+inducing+local+inner+ear+damage.">A novel technique for inducing local inner ear damage.</a> Hear Res. 176, 1-2 (2003).</li><li>Forge, A., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+death+of+hair+cells+in+mammalian+vestibular+sensory+epithelia.">Apoptotic death of hair cells in mammalian vestibular sensory epithelia.</a> Hear Res. 139, 1-2 (2000).</li><li>Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+inhibitors+prevent+cisplatin-induced+apoptosis+of+auditory+sensory+cells.">Caspase inhibitors prevent cisplatin-induced apoptosis of auditory sensory cells.</a> Neuroreport. 9, 2609-2614 (1998).</li><li>Taleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp70+inhibits+aminoglycoside-induced+hearing+loss+and+cochlear+hair+cell+death.">Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hearing loss and cochlear hair cell death.</a> Cell Stress Chaperones. 14, 427-437 (2009).</li><li>Taleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp70+inhibits+aminoglycoside-induced+hair+cell+death+and+is+necessary+for+the+protective+effect+of+heat+shock.">Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hair cell death and is necessary for the protective effect of heat shock.</a> J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 277-289 (2008).</li><li>Francis, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celastrol+Inhibits+Aminoglycoside-Induced+Ototoxicity+via+Heat+Shock+Protein+32+(HSP32).">Celastrol Inhibits Aminoglycoside-Induced Ototoxicity via Heat Shock Protein 32 (HSP32).</a> Cell Death and Disease. , (2011).</li><li>Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+inhibitors,+but+not+c-Jun+NH2-terminal+kinase+inhibitor+treatment,+prevent+cisplatin-induced+hearing+loss.">Caspase inhibitors, but not c-Jun NH2-terminal kinase inhibitor treatment, prevent cisplatin-induced hearing loss.</a> Cancer Res. 64, 9217-9224 (2004).</li><li>Bird, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supporting+cells+eliminate+dying+sensory+hair+cells+to+maintain+epithelial+integrity+in+the+avian+inner+ear.">Supporting cells eliminate dying sensory hair cells to maintain epithelial integrity in the avian inner ear.</a> J. Neurosci. 30, 12545-12556 (2010).</li><li>Sato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+fractalkine+receptor+CX3CR1+on+cochlear+macrophages+influences+survival+of+hair+cells+following+ototoxic+injury.">Expression of fractalkine receptor CX3CR1 on cochlear macrophages influences survival of hair cells following ototoxic injury.</a> J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 223-234 (2010).</li></ol>

Сенсорные волосковые клетки чувствительны к смерти от различных стрессов, включая старение, шум травмы, и воздействие ототоксичных наркотиков, в том числе аминогликозидов и противоопухолевое средство цисплатин. У млекопитающих волосы гибель клеток приводит к постоянной потере слуха...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/3734">Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection</a>. There was an error with a figure, the authors middle names were omitted, and the acknowledgements were updated.

Erratum: Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Реагенты</strong</td&gt;<td<strong&gt; О компании</strong</td&gt;<td<strong&gt; Номер по каталогу</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Среды 199</td&gt;<td&gt; Gibco / Invitrogen</td&gt;<td&gt; 12 350</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DMEM/F12</td&gt;<td&gt; Gibco / Invitrogen</td&gt;<td&gt; 11 320</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fine щипцы (# 55)</td&gt;<td&gt; Изобразительных средств наук</td&gt;<td&gt; 11255-20</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fine щипцы (# 5)</td&gt;<td&gt; Изобразительных средств наук</td&gt;<td&gt; 11252-30</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Щипцы (# 3)</td&gt;<td&gt; Изобразительных средств наук</td&gt;<td&gt; 11231-30</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Пенициллин G</td&gt;<td&gt; Sigma</td&gt;<td&gt; P3032</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Фетальной телячьей сыворотки</td&gt;<td&gt; Invitrogen</td&gt;<td&gt; 10082-139</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Nunc мини-поднос</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 12-565-68</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Аденовирус-GFP</td&gt;<td&gt; Векторные Biolabs</td&gt;<td&gt; 1060 *</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Cal-Ex decalcifier</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; CS510-1D</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Боргидрид натрия</td&gt;<td&gt; Sigma</td&gt;<td&gt; 452882</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Защита от миозина 7а (поликлональных)</td&gt;<td&gt; Proteus Biosciences</td&gt;<td&gt; 25-6790</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Защита от миозина 7а (моноклональные)</td&gt;<td&gt; Исследования развития Hybridoma банка</td&gt;<td&gt; MYO7A 138-1</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Защита от Кальмодулин</td&gt;<td&gt; Sigma</td&gt;<td&gt; С 3545</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Защита от кальбиндин</td&gt;<td&gt; Chemicon</td&gt;<td&gt; AB1778</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fluoromount G</td&gt;<td&gt; Южный биотехнологии Associates</td&gt;<td&gt; 0100-01</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;<p class="jove_content"<strong&gt; Таблица 1</strong&gt;. Реагенты и инструменты, используемые в мешочке культуры и аденовирусной инфекции.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; * Примечание: Ad-GFP обычно обеспечивается векторные Biolabs на фондовой титр 1x10<sup&gt; 10</sup&gt; БОЕ / мл. Мы просили пользовательского усиления, чтобы обеспечить запас вируса в титре 1,2 × 10<sup&gt; 11</sup&gt; БОЕ / мл.</p&gt;

dissection of adult mouse utricle and adenovirus-mediated supporting-cell infection

Потеря слуха и равновесия нарушения часто бывают вызваны смертью mechanosensory волосковых клеток, которые являются рецепторных клеток внутреннего уха. Поскольку не существует клеточная линия, удовлетворительно представляет клетках млекопитающих волосы, исследование волосковых клеток основывается на первичных культурах органа. Наиболее характерны в пробирке модель системы зрелые клетки млекопитающих волосы использует орган культур Мешочки из взрослых мышей (рис. 1) 1-6. Мешочке находится вестибулярный орган и волосковых клеток утрикулюса схожи по структуре и функции волосковых клеток слухового органа, органа Корти. Маточки взрослой мыши Препарат представляет собой зрелый сенсорного эпителия для изучения молекулярных сигналов, которые регулируют выживание, гомеостаз, и смерти этих клеток. Млекопитающих кохлеарные волосковые клетки терминально дифференцированные и не восстанавливаются в случае их утраты. В не-маммалийских позвоночными, слуховой и вестибулярной гибели клеток волос сопровождается надежной регенерации, восстанавливает слуха и равновесия функций 7, 8. Регенерации волосковых клеток опосредуется глии, как поддерживающие клетки, которые контактируют с базальной поверхности волосковых клеток чувствительного эпителия 9, 10. Поддержка клетки также являются важными посредниками волос выживания и гибели клеток 11. Недавно мы разработали методику инфекции опорных клеток в культуре Мешочки использованием аденовируса. Использование аденовируса типа 5 (dE1/E3) для доставки трансгена содержащие GFP под контролем промотора CMV, мы обнаружили, что аденовирус конкретно и эффективно заражает опорных клеток. Поддержка эффективности ячейки инфекции составляет примерно 25-50%, а волосковые клетки не заражены (рис. 2). Важно отметить, что мы обнаружили, что аденовирусная инфекция опорных клеток не приводит к токсичности для волосковых клеток или поддерживающие клетки, а клеток в Ad-GFP инфected Мешочки эквивалентны тем, кто в неинфицированных Мешочки (рис. 3). Таким образом, аденовирус-опосредованной экспрессии генов в клетках поддержки культурных Мешочки предоставляет мощный инструмент для изучения роли опорных клеток в качестве посредников волос выживаемость клеток, смерть и возрождение.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection at JoVE.com

Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection

Mechanosensory волосковых клеток рецепторных клеток внутреннего уха. Наиболее характерны<em&gt; В пробирке</em&gt; Модель системы зрелые клетки млекопитающих волосы использует орган культур Мешочки из взрослых мышей. Мы представляем вскрытии взрослого маточки мыши, и мы демонстрируем аденовирус-опосредованной инфекции опорных клеток в культуре Мешочки.

Препарирование взрослых маточки мыши и аденовирус-опосредованный опорно-клетки инфекции

Hearing loss and balance disturbances are often caused by death of mechanosensory hair cells, which are the receptor cells of the inner ear.  Since there ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

Несколько мыши нейроанатомической Магнитно-резонансная томография

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Препарирование Мышь Око за полного горе пигментный эпителий сетчатки

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

Цереброваскулярные Литье взрослых мышь для 3D-визуализации и морфологический анализ

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

Вскрытие и культуры мышь дофаминергической и стриатуме эксплантов в трехмерных Анализы коллагеновой матрице

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

Вскрытие и иммуногистохимического личинок, куколок и взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Сетчатки

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Простой Одношаговый Вскрытие Протокол целом монтажа подготовки взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Мозги

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

Взрослый мыши DRG Explant и отделить ячейки модели расследовать Нейропластичность и реагирования на экологические оскорблений, включая вирусной инфекции

This protocol describes an ex vivo model of mouse-derived dorsal root ganglia (DRG) explant and in vitro DRG-derived co-culture of dissociated sensory ...

Cochlear Surface Preparation in the Adult Mouse

Кохлеарная поверхность Подготовка в взрослой мыши

Auditory processing in the cochlea depends on the integrity of the mechanosensory hair cells. Over a lifetime, hearing loss can be acquired from numerous ...

Cryo-section Dissection of the Adult Subependymal Zone for Accurate and Deep Quantitative Proteome Analysis

Криосекционное рассечение субэпендимальной зоны взрослого человека для точного и глубокого количественного анализа протеома

The subependymal neurogenic niche consists of a paraventricular ribbon of the lateral ventricular wall of the lateral ventricle. The subependymal zone ...