Name: phenotypic analysis and isolation of murine hematopoietic stem cells and lineage-committed progenitors
Uploaded: 2012-07-08T14:00:00
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우리는 귀중한 조언을 Nobuyuki Onai, 히토시 타키자와 마르쿠스 Manz 감사드립니다. 이 작품은 스위스 국립 과학 재단, 스위스 암 리그와 Fondazione Ticinese마다 라 RIcerca ㅡ Cancro에 의해 재정 지원되었다.

1. 골수의 세포 현탁액의 준비 <ol><li> 마우스를 안락사와 복부 뒤로 향해 스테인리스 냄비와 스프레이 70 % 에탄올에 동물을 배치하십시오. 대퇴골과 경골 뒷다리에서, 그리고 척추를 수집합니다. </li><li> 정확하게 날카로운 팁 가위로와 거즈로 다리 뼈에서 척추에서 모든 연조직 잔류물을 제거합니다. 50 μm의 β-메르 캅 토 에탄올, 100 μm의 제품 MEM 비 필수 아미노산과 보충 10% 열 inactivated 태아 소 ...

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	<li>Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+units+of+development,+units+of+regeneration,+and+units+in+evolution.">Stem cells: units of development, units of regeneration, and units in evolution.</a> Cell. 100, 157-168 (2000).</li><li>Calvi, L. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+variation+in+cycling+of+hematopoietic+stem+cells+in+steady+state+and+inflammation.">Dynamic variation in cycling of hematopoietic stem cells in steady state and inflammation.</a> J. Exp. Med. 208, 273-284 (2011).</li></ol>

여기서 설명한 방법은 개별 생쥐 (그림 1) 조혈의 신속하고 정확한 분석을 가능하게합니다. murine 염증의 모델, autoimmunity, 면역 결핍, 퇴행성 질환, 대사 질환 및 암 등 다양한 실험적 설정,이 분석은 조혈에 대한 병리 학적 조건의 영향을 해결하실 수 있습니다. 그림 3은 전자 문이 LKS의 세포 사이클링 활동의 분석을 보여줍니다 CD34 - KI-67 mab 및 DAPI로 더럽?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Gibco </td><td> 42,401 </td></tr><tr><td> MEM NEAA 100X </td><td> Gibco </td><td> 11,140 </td></tr><tr><td> 나트륨 Pyruvate </td><td> Gibco </td><td> 11,360 </td></tr><tr><td> PenStrep </td><td> Gibco </td><td> 15,070 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Gibco </td><td> 20,012 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Gibco </td><td> 16,000 </td></tr><tr><td> 셀 스트레이너 40 μm의 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,340 </td></tr><tr><td> 7-AAD의 염색법 솔루션 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559,925 </td></tr><tr><td> 버퍼를 Lyse / 수정 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558,049 </td></tr><tr><td> 버퍼 III를 파마 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558,050 </td> &lt;/ TR&gt; <tr><td> KI-67 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 556,026 </td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td></tr><tr><td> CD4 (GK1.5) </td><td> eBioscience </td><td> 150,041 </td></tr><tr><td> CD8 (53-6.7) </td><td> eBioscience </td><td> 150,081 </td></tr><tr><td> 인 경우에는 3 번 CD (145-2C11) </td><td> eBioscience </td><td> 150,031 </td></tr><tr><td> CD45R (RA3-6B2) </td><td> eBioscience </td><td> 150,452 </td></tr><tr><td> CD19 (6D5) </td><td> eBioscience </td><td> 150,193 </td></tr><tr><td> Gr1 (RB6-8C5) </td><td> eBioscience </td><td> 155,931 </td></tr><tr><td> Tre119 (TER-119) </td><td> eBioscience </td><td> 155,921 </td></tr><tr><td> NK-1.1 (PK136) </td><td> eBioscience </td><td> 455,941 </td></tr><tr><td> C-키트 (2B8) </td><td> eBioscience </td><td> 171,171 </td></tr><tr><td> SCA-1 (D7) </td><td> eBiosci줬어 </td><td> 135,981 </td></tr><tr><td> CD34 (RAM34) </td><td> eBioscience </td><td> 110,341 </td></tr><tr><td> FcγR (2.4G2) </td><td> eBioscience </td><td> 553,145 </td></tr><tr><td> 안티 APC의 MicroBeads </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-090-855 </td></tr><tr><td> LS 열 </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-401 </td></tr></tbody></table>

phenotypic analysis and isolation of murine hematopoietic stem cells and lineage-committed progenitors

골수는 HSCs보다 성숙한 혈액 세포 가계 progenitors가 거주하고 성인 유기체에서 차별 교장 사이트입니다. HSCs는 삶의 시간을 1 모든 혈액 세포 lineages을 생성할 수있는 pluripotent 세포 분 세포 인구를 구성합니다. 골수에서 HSCs 항상성의 분자 해부는 조혈, 종양학 및 재생 의료에서​​ 중요한 의미를 가지고 있습니다. 우리는 형광 항체 및 개별 생쥐의 조혈 전구 하위 집합 및 HSCs 분포 (그림 1) 득점하기 유동세포계측법의 전자 게이팅 절차 라벨 프로토콜을 설명합니다. 또한 광범위하게 조혈 progenitors뿐 아니라 장기 (LT) 및 C-Kit를 표현하는 세포의 자성 농축하여 풀링된 골수 세포 현탁액에서 HSCs를 reconstituting 단기 (ST)를 풍부하게하는 방법을 설명합니다. 그 결과 세포 준비는 체외에 대해 선택한 하위 집합을 정렬하는 데 사용할 수 있습니다생체내 기능 연구에 대하여 (그림 2). 두 trabecular osteoblasts 2,3 및 sinusoidal 내피의 4 골수에서 HSCs을 지원하는 기능성 틈새를 구성합니다. N-cadherin + osteoblasts 3의 하위 집합과 그 리간드 angiopoietin-1 5 HSCs로 표현 수용체 티로신 키나제의 Tie2의 상호 작용을 포함 osteoblastic 틈새에서 몇몇 메커니즘은 HSCs의 정지를 결정하는데 동의합니다. 골수에서 &quot;최대 절전 모드&quot;는 과도한 사이클링 활동 6시 복제 및 최종 피로로부터 HSCs을 보호하기 위해 중요합니다. 이러한 수신자 같은 수용체 리간드 7, 인터페론-α 6 등 타고난 면역 계통의 세포에 따르고 외인성 자극에도 혈통이 커밋된 progenitors으로 확산 및 HSCs의 분화를 유도하실 수 있습니다. 최근 린 내에서 휴면 마우스 HSCs의 인구 - C-키트 + 무서-1 + CD150 + CD48 - CD34 - 인구가 8을 설명했습니다. 세포 정렬 여기에 설명된대로 조혈 progenitors 강화 세포 현탁액에서 CD34 표현에 따르면 허용 정지 자체 갱신 LT-HSCs과 ST-HSCs 9 모두의 고립. 혈통 긍정적인 세포의 고갈과 CD48와 Flk2 항체와 LT-HSC의 분류를 기반으로 유사한 절차는 이전에 10을 설명했습니다. 현재 보고서에서는 phenotypic 특성화 및 다른 생리 및 병리 학적 조건에서 조혈을 모니터하는 데 유용할 수 있습니다 조혈 progenitors의 전직의 생체내 세포주기 분석을 위해 프로토콜을 제공합니다. 더욱이, 우리는 요인 및 세포 생물학 및 신호 전달 장치 assays에서뿐만 아니라 이식에 대한 그들의 자기 갱신, 확장 및 분화를 조절 메커니즘을 정의하는 데 사용할 수 HSCs를위한 절차를 정렬 FACS에 대해 설명합니다.

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Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

유동세포계측법의 골수 조혈 progenitors의 유통뿐만 아니라 효율적으로 분리 고도 정화 조혈 줄기 세포 (HSCs)를 분석하는 방법을 설명합니다. 분리 절차는 본질적으로 세포 및 분자 연구를위한 HSCs를 정화 정렬 C-키트 + 세포와 세포의 자성 농축에 근거한다.

Murine 조혈 줄기 세포와 리니지 - 헌신 Progenitors의 Phenotypic 분석 및 절연

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

분리 및 조혈 줄기 세포의 이식 (HSCs)

연구

생물학

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

태반에서 조혈 줄기 세포의 분리 및 분석

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Murine 난황과 AGM에서 조기 조혈 줄기 세포의 분리

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

간엽 전환을 유도하고 상피의 분석

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

근육 위성 세포의 분리, 문화, 및 이식

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

쥐과 밸브 내피 세포의 분리

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

쥐과 배아의 레트로 바이러스 감염은 조혈 분화 분석을위한 세포 유래 배아 바디 줄기 세포

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

RNA 시퀀싱 분석하여 EML 조혈 전구체 세포의자가 재생 (self-renewal)과 분화를 조절하는 중요한 요소의 식별

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...