Name: methods for intravenous self administration in a mouse model
Uploaded: 2012-12-08T14:00:00
Duration: 12 min 9 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model at JoVE.com

Deney hayvanları üzerinde yapılan Hayvan Bakım ve McGill Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı. Bu araştırma Sağlık Araştırması (CIHR) ve Kanada Enstitüsü&#39;nün KG verilen fonları tarafından desteklenmiştir. Çıkar çatışması ilan etti.

1. Hayvan Konut ve Alışma Prosedürleri <ol><li> Erkek ve dişi CD-1 fare su şişeleri ve gıda karşılamak için tel ızgara kapaklı beta çipine yatak ve nestlet yastıkları, içeren standart plastik kafeslerde eşcinsel littermates, kafes başına en fazla 5 hayvan ile yerleştirilmiştir. Standart fare yemi ve su deney boyunca ev kafeslerine mevcut ad libitum bulunmaktadır. </li><li> Fare bir ters ışık-karanlık zamanlama (22:00 10:00 &#39;ışıkları) tutulur. </li><li> Fare deneysel prosedür başlamadan önce bir hafta boyunca IVSA test odaları iklime alıştırmak için izin verilir. </li></ol> 2. Edimsel Eğitim <ol><li> Şekerli süt eğitim ve intravenöz ilaç öz-yönetim oturumu dahil tüm davranışçı tedaviler 2 ultra-hassas fare kolları, diper bardak, uyarıcı ışıklar ve mikrolitre şırınga pompaları (Med Association ile donatılmış 15,9 x 14 x 12,7 cm, ölçüm edimsel odaları kullanılarak yapılmaktadırates Inc, St Albans, VT, ABD). Chambers donatı planı programlamak ve veri toplamak için Med Associates Akıllı CR arayüzü ve Med-PC yazılımı kullanılarak bir bilgisayara bağlanabilirler. </li><li> Naïve fareler edimsel odalarına alışan ve diper fincan sunulan bir şekerli süt ödül (0,1 ml) kullanarak kolu basın için eğitilmiştir. Operant süt eğitim 5-7 gün boyunca 1 saatlik seans yapılır. Etkin kolu üzerinde sabit bir oranı (FR) programının tamamlanması dipper fincan ve bir uyarıcı ışık aydınlatma tanıtımı sonuçlandı. Şekerli süt çözeltisi sütler (3,25% yağ içeriği) eklenen sakaroz (10 mg / ml, ACS Reaktif, Sigma-Aldrich Inc St-Louis MO, USA) oluşuyordu. Şekerli bir çözelti süt ya da bir sıvı besin güçlendiricidir ile operant eğitim operant fareler 1,2 yanıt kolaylaştırmak için kullanılan yaygın bir tekniktir. </li></ol> 3. Cerrahi Sırasında Kullanılacak Ekipman hazırlanması RequIRED ekipmanları - 20, 23 ve 26 gauge iğne, taşlama, 1 cc şırınga, Tygon tüp, havya, heparin, antibiyotikler ve analjezik. <ol><li> 20 gauge iğne aşağı tıraş tarafından juguler vene kateter yerleştirilmesi yönlendirecek bir iğne hazırlayın. Iğne mili vene kateter tüp rehberlik iğne içinde bir kanal oluşturmak için bir değirmeni kullanarak aşağı traş edilir. İğne kanalı dikkatle tevdi edilmiş herhangi bir metal artıkları kontrol edilmelidir. Kanal için herhangi bir engel ince uçlu forseps kullanılarak kazınıp atılmalı. </li><li> Yıkama ve kateter kontrol edilmesi için kullanılmak üzere iki adet 1 cc şırınga uyarlamak. Tygon boru 12 cm parça alarak ve 1 cc şırınga yapıştırılmış 26 gauge iğne ile bir ucunda onları takın ve 23 gauge iğne üzerinde hortumun diğer uçları germe tarafından iki şırınga hazırlayın. Bir şırınga bir heparinize tikarsilin çözeltisi (tikarsilin 33 mg ile% 0.9 steril tuzlu su ve diğer doldurulmalıdırve steril salin 10 ml heparin başına 0.3 mg). </li><li> Kateter kanül kapaklar hazırlayın. Tygon tüp bir 23 gauge iğne gerilir ve konik 1 cm kesilir. Kalın bir mühür oluşturmak için boru parçasının açık olan ucundan eritin. Hortum tüm kanül kapak kanül ucuna sıkıca kapalı ucu geçme ile, kateter kanül üzerine uyacak şekilde yeterince uzun olacak şekilde eritilir olmalıdır. Kapağı çok uzun ise, o vidalı kateter kapsar bağlama işlemi sırasında eğildi ve sonradan delinmiş olacak bir risk olduğunu unutmayın. Böylece kateter kapaklar dikkatli bir hazırlık kanül ile iyi bir uyum sağlamak için, tavsiye edilmektedir. </li><li> Gerekli çözümleri hazırlayın. Tüm reaktifler Sigma-Aldrich Inc (St-Louis MO, ABD) satın alınır. <ol class="lalpha"><li> Kateter yıkama için Heparinize tikarsilin çözüm - 0.33 g tikarsilin (disodyum tuzu) ve steril serum fizyolojik 10 ml heparin 0.003 gr çözülür. Çözeltisi 0.03 mL thr temizlendiGünlük ough kateter. Antibiyotik çözüm geliştirme kan pıhtıları ve enfeksiyonları önlemek için uygulanır. </li><li> Deri altı enjeksiyon için Amikicin (antibiyotik) - A tek bir subkutan enjeksiyon, 10 mg / post-operatif enfeksiyonları önlemek için kg &#39;lik bir dozda ameliyatı takiben verilir. </li><li> Deri altı enjeksiyon için ketoprofen (analjezik) - A tek bir subkutan enjeksiyon 5 mg / herhangi ameliyat sonrası ağrı yönetimi kg &#39;lik bir dozda ameliyatı takiben verilir. </li></ol></li></ol> 4. Kateter İmplantasyon Cerrahi Gerekli ekipman ve reaktifler: İzofluran, steril salin, alkol (% 70), 1 ve 3 cc şırınga steril salin, 1-cc adapte şırıngalar, Yukarıdaki bölümde 3, fare kateterler (CamCaths, Cambridgeshire, UK hazırlanan antibiyotik ve analjezik çözümleri ile dolu ), kateter kapakları (HRS Bilimsel, Montreal, Quebec kristal kapaklar), göz yağlayıcı, (bu damar yükseltmesine 4 cm plastik çubukplastik bir Q-ucu), polysporin, steril pamuklu çubuklar ve gazlı bez, kavisli ve düz forseps, arter kelepçeler, ince makas inşa edilebilir. <img src="/files/ftp_upload/3739/3739step1.jpg" alt="Adım 1" fo:content-width="3in" fo:src="/files/ftp_upload/3739/3739step1highres.jpg"/><ol><li> Standart aseptik teknikler cerrahi tezgah, cerrahi aletler ve kateterlerin kullanılması ameliyat öncesinde sterilize edilir. Uygun sterilizasyon teknikleri CamCaths satın cerrahi aletler ve kateterler için otoklav buhar içerir. Cam boncuk sterilizasyon ayrıca cerrahi aletlerin uçları kullanılabilir. Etilen oksit sterilizasyon riski erime olduğunu daha hassas kateterler veya malzemeler üzerinde istihdam edilebilir. Kemirgen cerrahi aseptik teknikler daha ayrıntılı bir açıklaması ilişikteki referanslar 1,2 bulunabilir. Tezgah kurma, cihazlar ve bakım anestezi için burun konisi fotoğrafı gösterilmiştir. </li><li> Fare izofluran gaz anestezisi, ve bir atma sistemi altında bir solunum tüpü kullanılarak anestezi altında yapılmaktadır. Göz yağlayıcı (Tears Naturale PM) işlem sırasında kurumasını önlemek için her iki göze uygulanır. Uygun cerrahi sınır hayvanın sırtına ve boynuna traş edilir. Herhangi kesiler yapılır önce, cerrahi alanları steril örtüler kullanarak sınırlıdır. </li><li> Kalbin sağ atriyum içine yerleştirilmesi için kateter hazırlamak için, fazlalık kateter tüp, kateter bir ampul itibaren 1,2 cm kesilir. Bu yetişkin CD-1 farelerde, yaş yaklaşık 8 hafta, 20-25 gram vücut ağırlığı için kurulan uygun uzunluğudur. Kateter tüp uzunluğu fare suşu, büyüklüğü ve yaşına göre, (deneme ve yanılma ile) hafifçe ayarlanması gerekebilir. Yerleştirilmeden önce, steril tuzlu su içeren şırınga (bölüm 3.2) kateter kanül takılır ve kateter temizlendi ve kaçakları kontrol. TutmakBu şırınganın cerrahi prosedür boyunca kateter bağlı. Bu kateter yıkayın ve adım 4.7 kan geri çekmek için kullanılacaktır. </li><li> 2 cm uzunluğunda midscapular kesi arka ortasında başlayan ve kateter tabanına karşılamak amacıyla ensenin hemen altında biten yapılmış,% 70 alkol ile sterilizasyon olduğunu ardından. Bağ dokusu, deri altı kateter tabanı için yer açmak için forseps ile ayrı zorunlu olmalıdır. </li><li> Alanı% 70 alkol ile temizlenmesi sonra 2 cm çapraz kesi, hayvanların çene yukarı doğru gidiyor, sağ klavikulanın yapılır - ikinci bir sığ 1, sırtında hayvan yerleştirme. Juguler ven boyun deri altında yüzeysel bulunacaktır. Kateter hazırlıklarında, kateter tabanından boru arka kesiden çekilir ve sadece sağ omuz üzerinden deri altına tüp geçirerek yakın şahdamarından getirdi. Kateter tüpünün sonudursonra bir arter kelepçe takılı ve onu yerde tutmak için hayvanın yan yerleştirildi. </li><li> Sağ juguler ven hafifçe hayvanın boynuna kesiden yüzeysel bağ ve yağ dokusu uzaklaşıyor tarafından bulunur. Ven çevresinde bağ dokusu kavisli bir forseps kullanarak ayrı kırık ve ven daha sonra steril bir plastik çubuk kullanarak yükselir. Gevşek açık sütür venin her iki ucu etrafında yapılır ve kateter tüp tepe püskülü aracılığıyla dişli ve sağ omuz üzerinden çözülür dinlenmek için dikiş ipliğinin üzerinde döngü gerçekleştirilir. </li><li> Önce ekleme için, ıslak sürtünmeyi azaltmak için steril serum fizyolojik ile 20 gauge ekleme iğne ve ven hem de. İğne damarına paralel olarak düzenlenen ve yükseltilmiş ven (Not: iğne ucu yaklaşık 0,5 cm ven girmesi gerekir) altına yakın yavaşça eklenir. Forseps kullanarak, ven içine iğne mili aşağı kateter tüp kaydırın. Direnç bu boru i işaret ederbağ dokusu içinde değil ven içinde s. Hiçbir sızıntı olmadığından emin olmak için damar yoluyla tuzlu 0.03 cc itin. Kaçaklar ven deldi veya kateter tüp yerleştirme ayarlanması gerektiğini olabileceğini işaret eder. Not: Hortumun ven içinde olup olmadığını kontrol etmek için, ekteki salin şırınga kullanarak bazı kan çekmeyi deneyecek. Kan hemen çizilebilir yapamıyorsanız, ven veya kalp duvarının kateterin ucu tıkanıklığını gidermeye olabilir veya ven deldi olmamıştır; tüp ayarlayın ve tekrar deneyin. Kan hala çizilmiş olamaz eğer İğne reinsertion gerekli olabilir. </li><li> Yerinde kateter sabitlemek için, ekleme noktası için kateter ampul itmek ve iğne çıkarılır. Alt düğüm ve daha sonra ampul Yukarıdaki ikinci düğüm sağ ipe önce bar karşı kateter sifonu çekerim. Kan çizilebilir görmek ve gerekirse biraz eğer knot gevşetmek için tekrar sınayın. Deri ve dikiş altında kateter tüp sıkıştırınhayvanın boynuna ventral kesi. Steril pamuk uçlu bir aplikatör veya tercihen kapalı kesi bazı analjezik içeren diğer antibiyotikli merhem kullanarak Hızlı Heal Polysporin uygulayın. </li><li> Onun karın hayvan ile hazırlanan kesi içinde arka deri altında kateter tabanı yerleştirin. Aşırı boru minimal ilmekledi ve iyi çiğneme ve piercing hayvanın şansını en aza indirmek için kateter tabanı altında gizli olduğundan emin olun. Kateter baz her iki kesik dikiş, ve steril bir pamuk uçlu bir aplikatör kullanılarak Polysporin Heal hızlı uygulanır. </li><li> Yapıştırılmış boru (bölüm 3.2) ile şırınga kullanarak heparinize tikarsilin çözüm 0,03 cc ile kateter yıkayın. Beyaz kateter kapağı üzerindeki plastik kanül kapağı ve vida ile kanül kapak takın. Kanül şapkalı önce ameliyat taze bazı farelerde kan kateter dışarı sızabilir. Bu re-floş hayvan ve rapidl önemlidirKan akmaya şansı bulamadan y kanülün kapağını değiştirin. Hayvanlar kateter açıklığını korumak için günlük olarak yıkanması gerekir. </li><li> % 70 etanol ile hayvanlara arka bacakları arasından enjeksiyon alan aşağı silme sonra, deri altından bir tarafında 5 mg / kg &#39;lık bir dozda enjekte analjezik ketoprofen, ve diğer yan üzerinde 10 mg / kg&#39; lik bir dozda antibiyotik amikicin. </li><li> Anestezi kesilir sonra, hayvanlar 5 ila 7 gün boyunca yiyecek ve su kolay erişim ile temiz bir kafes içinde kurtarmak için izin verilir. Fare post-operatif hipotermi önlemek için bir gecede bir ısıtmalı kabin konulmalıdır. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3739/3739step2.jpg" alt="Adım 2" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/3739/3739step2highres.jpg"/> 5. Davranışsal test - Öz-Yönetim İntravenöz <ol><li> Davranış testi kateterler öncesinde% 0.9 steril serum fizyolojik ile temizlendi. Fare ardından yerleştirmek edilird operant odalarında ve infüzyon hattı ve infüzyon pompası bağlanır. Aktif Kolu pres uyarıcı ışık aydınlatması ile birleştiğinde bir 3.2 sn 18 ul ilaç infüzyonu ile sonuçlanabilir. Her kolu basın uyarıcı ışığı açık kalır dönem sırasında üzerinden 8 sn süre ile takip edilir. </li><li> Edimsel oturumun ardından, farelerin kateterler evlerine kafes iade edilmeden önce heparinli tikarsilin çözeltisi ile temizlendi. </li><li> Fareler her dozda 3 ardışık 2-hr oturumları için kendini yönetmek için izin verilir. Aşağıdaki bölümde gösterildiği gibi Dozlar her fare için rastgele sırayla sunuldu. </li><li> Kateter açıklığı tuzlu ve antibiyotik solüsyon hem kateter ile yıkanabilir sağlayarak günlük değerlendirilir. Ekli referans 5 içinde tarif edildiği gibi Buna ek olarak, midazolam / ketamin deney yapılır. Kısaca, bu tür 0,02-0,03 ml ketamin (15 mg / ml) bir infüzyon 5 saniye içinde hareketsizlik gibi anestezi belirtileriveya midazolam (0.75 mg / ml) midazolam patent kateter 5 kanıtıdır. </li></ol>

<ol>
	<li>Rocha, B. A., Ator, R., Emmett-Oglesby, M. W., Hen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intravenous Cocaine Self-Administration in Mice Lacking 5-HT1B Receptors. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 57 (3), 407-412 (1997).</li><li>Zapata, A., Chefer, V. I., Ator, R., Shippenberg, T. S., Rocha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+sensitization+and+enhanced+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+after+intravenous+cocaine+self-administration+in+mice.">Behavioural sensitization and enhanced dopamine response in the nucleus accumbens after intravenous cocaine self-administration in mice.</a> European Journal of Neuroscience. 17 (3), 590-596 (2003).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Techniques in Aseptic Rodent Surgery Current Protocols in Immunology. , 1.12-1.14 (2001).</li><li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Intravenous+Drug+Self-Administration+in+Rats+and+Mice.">Chronic Intravenous Drug Self-Administration in Rats and Mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. . 9, 20.1-20.40 (2005).</li><li>Gill, K. J., Boyle, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+quantitative+trait+loci+for+cocaine+induced+activation+in+the+AcB/BcA+series+of+recombinant+congenic+strains.">Confirmation of quantitative trait loci for cocaine induced activation in the AcB/BcA series of recombinant congenic strains.</a> Pharmacogenetics. 13, 329-338 (2003).</li><li>Gill, K. J., Boyle, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influences+on+drug-induced+psychomotor+activation+in+mice.">Genetic influences on drug-induced psychomotor activation in mice.</a> Genes, Brain &#38; Behavior. 7, 859-868 (2008).</li><li>Boyle, A. E., Gill, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+AXB/BXA+recombinant+inbred+lines+of+mice+to+the+locomotor+activating+effects+of+cocaine:+A+QTL+analysis.">Sensitivity of AXB/BXA recombinant inbred lines of mice to the locomotor activating effects of cocaine: A QTL analysis.</a> Pharmacogenetics. 11 (3), 255-264 (2001).</li><li>Boyle, A. E., Gill, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+verification+of+previously+identified+QTLs+for+cocaine-induced+activation+using+a+panel+of+B6.A+chromosome+substitution+strains+(CSS)+and+A/JxC57Bl/6J+F2+mice.">A verification of previously identified QTLs for cocaine-induced activation using a panel of B6.A chromosome substitution strains (CSS) and A/JxC57Bl/6J F2 mice.</a> Psychopharmacology. 207 (2), 325-3234 (2009).</li><li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychomotor+stimulant+effects+of+cocaine+in+rats+and+15+mouse+strains.">Psychomotor stimulant effects of cocaine in rats and 15 mouse strains.</a> Experimental and Clinical Psychopharmacology. 19 (5), 321-341 (2011).</li><li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+drug+self-administration+in+mice:+practical+considerations.">Intravenous drug self-administration in mice: practical considerations.</a> Behavior genetics. 37 (1), 101-118 (2007).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Uyuşturucu hayvan modelleri uyuşturucuyla ilgili davranışların genetik temelini anlamada yararlıdır. Örneğin, farklı genetik profilleri ile farelerin kokain 6-8 duyarlılıkları farklılıklar kalıtsaldır ve identify potansiyel gen adaylar fenotipik değişkenlik 9 gözlenen arabuluculuk yardımı göster. Bu yazıda anlatılan intravenöz kateterizasyon girişimlerinde farelerin yanı sıra farklı genetik geçmişleri 10 farelerde çeşitli suşları ilaç IVSA incelemek için hatırı sayılır bir başarı ile kullanılmaktadır. Bu videoda gösterilen işlemler sırasında odaklanmak önemli faktörler vurgulamak ve güvenilir intravenöz kendinden-yönetim veri elde etmek amacıyla kateterizasyon cerrahi sonrası. İlk olarak, sağ atriyum içinde kateter tüp yerleştirme blot pıhtı ikinci kateter yetersizliği önlemek için son derece önemlidir. Ameliyat sırasında emin olmak için önemli olduğu katetersonunda engelsiz ve kalp veya damar dokusu da tıkanmasıyla değildir. İkinci olarak, her gün sonda yıkama tıkanıklıkları önlemek için operant seans önce hem de sonra gereklidir. Son olarak, kateter kanül enkaz girişini önlemek için, hayvanlar kafeslerine zaman kanül kapaklar ve kristal hem kapaklar sürekli örtülmelidir. Kateter kanül Minör tıkanması, özellikle hayvanlar IVSA için test edilmemiştir günlerde, heparinize antibiyotik solüsyon gerekli olan ancak günlük yıkama, ince bir 26 gauge iğne kullanılarak yerinden olabilir. Hayvan sağkalım cerrahi, aseptik tekniklerin iyi bir bilgi gerçekleştirmek için, analjezi ve anestezi gereklidir. Bu videoyu uygun bir cerrahi eğitimi yerine geçmez iken, bu paradigma için gerekli teknikleri edinmek isteyen araştırmacılar için bir kılavuz olarak kullanılabilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Tikarsilin disodyum tuzudur </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T5639-1G </td><td> 1 gram şişe </td></tr><tr><td> Tears Naturale PM (Göz yağlayıcı) </td><td> Alcon </td><td> N / A </td><td> 3,5 gram tüpü Bu göz yağlayıcı çoğu eczanelerde bulunabilir. Herhangi bir oftalmik göz yağlayıcı madde kullanılabilir. </td></tr><tr><td> Kokain </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 0723-06 </td><td> 1 gram şişe </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 1754-1704 </td><td> 25 gram şişe </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 2519-06 </td><td> 1 gram şişe </td></tr><tr><td> Heparin sodyum tuzu </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H4784-250MG </td><td> 250 gram şişe </td></tr><tr><td> Ketoprofen </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> K1751-1G </td><td> 1 gram şişe </td></tr><tr><td> Amikicin Sülfat tuzu </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A2324-5G </td><td> 5 gram şişe </td></tr><tr><td> Sakaroz ACS Reaktif </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S5016-500G </td><td> 500 gram şişe </td></tr><tr><td> Yumuşak örgü Standart fare kateterler </td><td> CamCaths </td><td> MIVSA/20/26/BC-1S </td><td> Boru özellikler: 26SWG; 0,451; 0,254 </td></tr><tr><td> Kristal kap aplikatörü </td><td> HRS Bilimsel </td><td> 313CAC </td><td> Bu beyaz kateter kap olduğunu. </td></tr><tr><td> Tygon Mikro Boru Çap </td><td> Thomas Bilimsel </td><td> 9561S41 </td><td> Boru özellikler (çap inç x od x duvar kalınlığı): .01 x .03 x .01 </td></tr>
 </tbody>
</table>

methods for intravenous self administration in a mouse model

Hayvan modelleri intravenöz kendinden-yönetim (IVSA) paradigma dahil ilaçların takviye etkileri incelemek için geliştirilmiştir. Kokain gibi kötüye ilaçların takviye özelliklerini incelemek için bir IVSA paradigma kullanmanın avantajları ilacın yerine öz-yönetilen deneyci-yönetilen, takviye programı değiştirilebilir olduğu gerçeği, ve miktarlarının hassas bir şekilde ölçebilecek ilaç olarak tüketilen zamanlama ve IV enjeksiyon kalıbı elde edilebilir. Ayrıca, idarenin intravenöz ilk geçiş metabolizması veya tat ile ilgili potansiyel karıştırıcıların önler, kan ve beyin ilaç düzeyleri hızlı artışlar üretir. Bu video özetlendiği gibi, intravenöz öz-yönetim yıkama ve bakım cerrahi ve titiz günlük kateter sırasında dikkatli kateter yerleştirilmesini takiben önceden yiyecek kısıtlaması veya önceden ilaç eğitim olmadan elde edilebilir. Bu belirtilen deneysel prosedürlerkağıt bir hayvan barınağı tanımı ve alıştırma yöntemleri, şekerli süt çözümlerini kullanarak edimsel eğitim ve kateter implantasyonu içerir.

<img src="/files/ftp_upload/3739/3739fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. İntravenöz ilaç öz-yönetim için yanıt paterni kullanılan ilaç, doz aralığı ve fare zorlanma göre değişir. Sunulan rakam video açıklanan yordamı kullanarak başarılı kateterizasyon operasyonlar sonrasında kokain öz-yönetim verileri gösterir. Şekil kokain infüzyon takviye bir FR1 zamanlamaya göre rastgele sırayla sunulan 4 kokain doz aralığında (mg / kg vücut ağırlığı) kazandı ve ortalama (± SEM) kokain tüketimi (± SEM) anlamına gösterir. Abscissa: infüzyon başına kendi kontrolünde ilaç dozu. Sol Ordinat: infüzyonlarının toplam sayısı 2-hr edimsel oturumu sırasında kazandı. Sağ Ordinat: 2-hr test oturumu sırasında mg / kg toplam kokain alımı. Tüm 13 kateterler çalışma süresi (4 hafta) patent kalmıştır. Doz konusunda yapılan tek yönlü ANOVA ortaya koyduğu mikrofonE [F (1,12) = 42.8, p &lt;0.05]. doza bağımlı bir şekilde kokain idare edildi Doz-yanıt eğrisi [F (3,36) = 29.6, p &lt;0.05] daha yüksek dozlarda basarak kolu bir düşüşe rağmen fazla kokain tüketiminin bir artış vardır. Her veri noktası CD-1 fare (kombine n = 13 / doz, erkek ve kadın) toplanan her kokain dozu (± SEM) az 3 test seans ortalama temsil eder. Doz yanıt eğrisi boyunca yanıt aktif (ilaç takviyeli) vs inaktif kolu Karşılaştırmalar bu fareler iki kolu arasında ayrımcılık vardı sağlamak için iki yönlü ANOVA kullanılarak yapılmıştır. CD1 fareler için analiz aktif kolu için bir tercih [F (1,12) = 10.255, p &lt;0.05] tam doz-tepki eğrisi (veriler burada gösterilmemiştir) üzerinde mevcuttu.

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model at JoVE.com

Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model

Intravenöz kendinden-yönetim (IVSA) paradigma kemirgenlerde kötüye ilaçların takviye özelliklerini incelerken altın standart olarak kabul edilir. Bu yazıda güvenilir IVSA verilerini elde etmek için gerekli deney prosedürleri ve cerrahi teknikler özetliyor. Özellikle, titiz kateter implantasyonu ve bakım vurgulanır.

Bir Fare Modelinde İntravenöz Öz Yönetim Yöntemleri

Animal models have been developed to study the reinforcing effects of drugs, including the intravenous self-administration (IVSA) paradigm. The advantages ...

methods-for-intravenous-self-administration-in-a-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

Sıçanlar İlaç Öz-yönetim sırasında Ultrasonik seslenmelere Değerlendirilmesi

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Nörobilim

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

Çoklu-fare nöroanatomik Manyetik Rezonans Görüntüleme

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol. However, ethanol is typically self-administered orally, rather than intravenously like many other drugs of abuse. The pharmacokinetics of orally administered drugs are more complex than intravenously administered drugs. Because understanding the relationship between the pharmacological and behavioral effects of ethanol requires knowledge of the time course of ethanol reaching the brain during and after drinking, we use in vivo microdialysis and gas chromatography with flame ionization detection to monitor brain dialysate ethanol concentrations over time. 
Combined microdialysis-behavioral experiments involve the use of several techniques. In this article, stereotaxic surgery, behavioral training and microdialysis, which can be adapted to test a multitude of self-administration and neurochemical centered hypotheses, are included only to illustrate how they relate to the subsequent phases of sample collection and dialysate ethanol analysis. Dialysate ethanol concentration analysis via gas chromatography with flame-ionization detection, which is specific to ethanol studies, is described in detail. Data produced by these methods reveal the pattern of ethanol reaching the brain during the self-administration procedure, and when paired with neurochemical analysis of the same dialysate samples, allows conclusions to be made regarding the pharmacological and behavioral effects of ethanol.

A method to determine the time course of ethanol concentration in the brains of rats during operant ethanol self-administration is described. Gas chromatography with flame ionization detection is used to quantify ethanol in the dialysate samples, because it has the sensitivity required for the small volumes that are generated.

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C. elegans genome includes potential antipsychotic drug (APD) targets conserved in humans, including genes encoding proteins required for neurotransmitter synthesis and for synaptic structure and function. APD exposure produces developmental delay and/or lethality in nematodes in a concentration-dependent manner. These phenotypes are caused, in part, by APD-induced inhibition of pharyngeal pumping1,2. Thus, the developmental phenotype has a neuromuscular basis, making it useful for pharmacogenetic studies of neuroleptics. Here we demonstrate detailed procedures for testing APD effects on nematode development and pharyngeal pumping. For the developmental assay, synchronized embryos are placed on nematode growth medium (NGM) plates containing APDs, and the stages of developing animals are then scored daily. For the pharyngeal pumping rate assay, staged young adult animals are tested on NGM plates containing APDs. The number of pharyngeal pumps per unit time is recorded, and the pumping rate is calculated. These assays can be used for studying many other types of small molecules or even large molecules.

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Approaches for testing the effects of antipsychotic drugs (APDs) in Caenorhabditis elegans are demonstrated. Assays are described for testing drug effects on development and viability and on pharyngeal pumping rate. These methods are also applicable for pharmacogenetic experiments with drug classes other than APDs.

Antipsikotik İlaçların Etki Mekanizmaları incelenmesi için Yöntemleri<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets containing specific growth factors that trigger blood vessel growth throughout the naturally avascular cornea, angiogenesis can be measured and quantified. In this assay the angiogenic response is generated over the course of several days, depending on the type and dose of growth factor used. The induction of neovascularization is commonly triggered by either basic fibroblast growth factor (bFGF) or vascular endothelial growth factor (VEGF). By combining these growth factors with sucralfate and hydron (poly-HEMA (poly(2-hydroxyethyl methacrylate))) and casting the mixture into pellets, they can be surgically implanted in the mouse eye. These uniform pellets slowly-release the growth factors over five or six days (bFGF or VEGF respectively) enabling sufficient angiogenic response required for vessel area quantification using a slit lamp. This assay can be used for different applications, including the evaluation of angiogenic modulator drugs or treatments as well as comparison between different genetic backgrounds affecting angiogenesis. A skilled investigator after practicing this assay can implant a pellet in less than 5 min per eye.

The protocol describes the corneal micropocket assay as developed in mice.

Kornea mikrocep Testi: Fare Eye Angiogenezis Bir Model

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

In this paper we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of wholemount retinas for immunohistochemistry and, 2) calcium imaging for the study of voltage gated calcium channel (VGCC) mediated calcium signaling in retinal ganglion cells. The calcium imaging method we describe circumvents issues concerning non-specific loading of displaced amacrine cells in the ganglion cell layer.

Immunohistochemistry protocols are used to study the localization of a specific protein in the retina. Calcium imaging techniques are employed to study calcium dynamics in retinal ganglion cells and their axons.

Wholemount Sıçan Retina Immunohistochemical ve Kalsiyum Görüntüleme Yöntemleri

In this paper we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of wholemount retinas for ...

Methods for Cell-attached Capacitance Measurements in Mouse Adrenal Chromaffin Cell

Neuronal transmission is an integral part of cellular communication within the brain. Depolarization of the presynaptic membrane leads to vesicle fusion known as exocytosis that mediates synaptic transmission. Subsequent retrieval of synaptic vesicles is necessary to generate new neurotransmitter-filled vesicles in a process identified as endocytosis. During exocytosis, fusing vesicle membranes will result in an increase in surface area and subsequent endocytosis results in a decrease in the surface area. Here, our lab demonstrates a basic introduction to cell-attached capacitance recordings of single endocytic events in the mouse adrenal chromaffin cell. This type of electrical recording is useful for high-resolution recordings of exocytosis and endocytosis at the single vesicle level. While this technique can detect both vesicle exocytosis and endocytosis, the focus of our lab is vesicle endocytosis. Moreover, this technique allows us to analyze the kinetics of single endocytic events. Here the methods for mouse adrenal gland tissue dissection, chromaffin cell culture, basic cell-attached techniques, and subsequent examples of individual traces measuring singular endocytic event are described.

After exocytosis, fused plasma membrane is retrieved through a process known as endocytosis. This mechanism reforms new synaptic vesicles for the next round of release. Individual endocytic events are captured and analyzed through the use of the cell-attached capacitance recordings in mouse adrenal chromaffin cells.

Fare Adrenal Kromafin Cell Hücre bağlı Kapasitans Ölçümler Yöntemleri

Neuronal transmission is an integral part of cellular communication within the brain. Depolarization of the presynaptic membrane leads to vesicle fusion ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI brain injury by studying neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated (i.e., normal) mice. During the study, Rice-Vannucci&#39;s method was used to induce neonatal HI brain damage in postnatal day 7-10 (P7-10) mice. The HI operation was performed on the pups by unilateral carotid artery ligation and exposure to hypoxia (8% O2 and 92% N2 for 90 min). One week after the operation, the damaged brains were evaluated with the naked eye through the semi-transparent skull and were categorized into subgroups based on the absence (&#34;no cortical injury&#34; group) or presence (&#34;cortical injury&#34; group) of cortical injury, such as a lesion in the right hemisphere. On week 6, the following neurobehavioral tests were performed to evaluate the cognitive and motor functions: passive avoidance task (PAT), ladder walking test, and grip strength test. These behavioral tests are helpful in determining the effects of neonatal HI brain injury and are used in other mouse models of neurodegenerative diseases. In this study, neonatal HI brain injury mice showed motor deficits that corresponded to right hemisphere damage. The behavioral test results are relevant to the deficits observed in human neonatal HI patients, such as cerebral palsy or neonatal stroke patients. In this study, a mouse model of neonatal HI brain injury was established and showed different degrees of motor deficits and cognitive impairment compared to non-operated mice. This work provides basic information on the HI mouse model. MRI images demonstrate the different phenotypes, separated according to the severity of brain damage by motor and cognitive tests.

We performed unilateral carotid artery occlusion on postnatal day 7-10 CD-1 mouse pups to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of HI brain injury. We studied neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated normal mice.

Yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarı, fare modeli neurobehavioral değerlendirmesi

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

Methods and Tips for Intravenous Administration of Adeno-associated Virus to Rats and Evaluation of Central Nervous System Transduction

Adeno-associated virus (AAV) vectors are a key reagent in the neurosciences for clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), optogenetics, cre-lox targeting, etc. The purpose of this manuscript is to aid the investigator attempting expansive central nervous system (CNS) gene transfer in the rat via tail vein injection of AAV. Wide-scale expression is relevant for conditions with widespread pathology, and a rat model is significant due to its greater size and physiologic similarities to humans compared to mice. In this example application, a wide-scale neuronal transduction is used to mimic a neurodegenerative disease that affects the entire spinal cord, amyotrophic lateral sclerosis (ALS). The efficient wide-scale CNS transduction can also be used to deliver therapeutic protein factors in pre-clinical studies. After a post-injection expression interval of several weeks, the effects of the transduction are evaluated. For a green fluorescent protein (GFP) control vector, the amount of GFP in the cerebellum is estimated quickly and reliably by a basic imaging program. For motor disease phenotypes that are induced by the ALS related protein transactive response DNA-binding protein of 43 kDa (TDP-43), the deficits are scored by escape reflex and rotarod. Beyond disease modeling and gene therapy, there are diverse potential applications for the wide-scale gene targeting described here. The expanded use of this method will aid in expediting hypothesis testing in the neurosciences and neurogenetics.

Methods for a wide-scale central nervous system gene delivery in the rat are covered. In this example, the purpose is to mimic a disease that affects the entire spinal cord. The widespread transduction can be used to deliver a therapeutic protein to the CNS from a one-time, peripheral administration.

Yöntemleri ve merkezi sinir sistemi iletim değerlendirilmesi ve Adeno ilişkili virüs fareler için intravenöz Yönetim için ipuçları

Adeno-associated virus (AAV) vectors are a key reagent in the neurosciences for clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay between perturbed BBB homeostasis and the pathogenesis of brain disorders needs further investigation, the development and validation of a reliable procedure to accurately detect BBB alterations may be crucial and represent a useful tool for potentially predicting disease progression and developing targeted therapeutic strategies.
Here, we present an easy and efficient procedure for evaluating BBB leakage in a neurodegenerative condition like that occurring in a preclinical mouse model of Huntington disease, in which defects in the permeability of BBB are clearly detectable precociously in the disease. Specifically, the high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin, which is able to cross the BBB only when the latter is impaired, is acutely infused into a mouse jugular vein and its distribution in the vascular or parenchymal districts is then determined by fluorescence microscopy.
Accumulation of green fluorescent-albumin in the brain parenchyma functions as an index of aberrant BBB permeability and, when quantitated by using Image J processing software, is reported as Green Fluorescence Intensity.

In this study, we present an easy and efficient procedure for evaluating the disruption of the blood-brain barrier under neurodegenerative conditions. To achieve our objective, we infused high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin into mouse jugular vein and evaluated its leakage into the brain parenchyma by fluorescence microscopy.

Kan - beyin bariyerini geçirgenliği FITC etiketli albümin nörodejeneratif hastalık, bir fare modeli intravenöz infüzyonu tarafından değerlendirilmesi

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...