Name: a polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain
Uploaded: 2012-03-07T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain at JoVE.com

이 작품은 미국 심장 협회 (AYS로 포스트 박사 교제)와 국립 보건원 (MH085499, EB003832 및 OD006831 디케이까지)에 의해 지원되었다. 우리는 원고에 대한 의견에 대해 베스 프리드먼과 파블로 무계획 감사드립니다.

1. 수술 준비하기 전 <ol><li> 초음파 세척기의 Maxizyme, 외과 우유의 혼합물에 sonicating하여 수술 도구를 청소합니다. 각 실험 전에 수술 도구를 압력솥. </li><li> 필요한 모든 시약과 disposables를 사용할 수 있는지 확인합니다. 시약 및 disposables의 목록은 표 2에 제공됩니다. 가능하면 노출된 조직과 접촉 시약 및 disposables는 살균해야합니다. </li><li> 마취를 유도. 생존 연구에 적합한 일반 anesthetic...

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	<li>Cetin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+gene+delivery+in+the+rodent+brain.">Stereotaxic gene delivery in the rodent brain.</a> Nature Protocols. 1, 3166-3173 (2006).</li><li>Kleinfeld, D., Delaney, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributed+representation+of+vibrissa+movement+in+the+upper+layers+of+somatosensory+cortex+revealed+with+voltage+sensitive+dyes.">Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes.</a> Journal of Comparative Neurology. 375, 89-108 (1996).</li><li>Driscoll, J. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+of+cranial+window+type+for+in+vivo+imaging+affects+dendritic+spine+turnover+in+the+cortex.">Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex.</a> Nature Neuroscience. 10, 549-551 (2007).</li><li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+microglial+cells+are+highly+dynamic+surveillants+of+brain+parenchyma+in+vivo.">Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo.</a> Science. 308, 1314-1318 (2005).</li><li>Davalos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo.">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature Neuroscience. 8, 752-758 (2005).</li><li>Ascenzi, A., Fabry, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+for+dissection+and+measurement+of+refractive+index+of+osteons.">Technique for dissection and measurement of refractive index of osteons.</a> The Journal of Biophysical and Biochemical Cytology. 6, 139-142 (1959).</li><li>Stosiek, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 100, 7319-7324 (2003).</li><li>Grinvald, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+architecture+of+cortex+revealed+by+optical+imaging+of+intrinsic+signals.">Functional architecture of cortex revealed by optical imaging of intrinsic signals.</a> Nature. 324, 361-364 (1986).</li><li>Dunn, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+cerebral+blood+flow+using+laser+speckle.">Dynamic imaging of cerebral blood flow using laser speckle.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 21, 195-201 (2001).</li><li>Villringer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+perfusion+of+the+rat+brain+cortex:+An+in+vivo+confocal+microscopy+study.">Capillary perfusion of the rat brain cortex: An in vivo confocal microscopy study.</a> Circulation Research. 75, 55-62 (1994).</li><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li><li>Srinivasan, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+for+the+quantitative+study+of+cerebrovascular+physiology.">Optical coherence tomography for the quantitative study of cerebrovascular physiology.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &#38; Metabolism. 31, 1339-1345 (2011).</li><li>Hu, S., Wang, L. 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두 광자 포트 창을 통해 영상은 레이저 빛을 attenuates하고 더 깊이 8 시에 광학 aberrations을 추가 thinned 뼈 및 경질 통해 전송을 필요로합니다. 그러나이 단점에도 불구하고 최대 pial 표면 아래 250 μm의에 이미징 깊이는 900 nm의 여기를 구현할 수 있습니다. 그레이터 이미징 깊이는 원칙적으로 13 이상 여기 파장과 수도 있습니다. 이 방법의 가장 큰 장점은 완전한 craniotomy 14, 15과</su...

<table border="1"><tbody><tr><td> 대리인 </td><td> 인도의 루트 </td><td> 마우스에 대한 선량 </td><td> 존속 기간 </td><td> 노트 </td><td> 출처 </td><td> 심판 심판 </td></tr><tr><td> Pentobarbital (Nembutal) </td><td> IP </td><td> 90 μg / g </td><td> 15-60 분 </td><td> 좁은 여유가 없다. 천천히 마취의 적절한 복용량까지 작동합니다. 필요에 따라 유도 선량의 10 %를 보완. </td><td> 036093; 버틀러 Schein </td><td> 7 </td></tr><tr><td> 케타민을 (Ketaset)는 Xylazine (Anased) 섞인 </td><td> IP </td><td> 60 μg / G (K) 10 μg / g (X) (동일 주사기에 혼합) </td><td> 20-30 분 </td><td> Xylazine는 근육 이완 및 진통제로 공동 주입된다. 필요에 따라 유도 선량의 50 %에서만 케타민을 보완. </td><td> (K) 010177, (X) 033,198; 버틀러 Schein </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Isoflurane (Isothesia) </td><td> 흡입 </td><td> 4 % 유도를위한 폐포 농도 (MAC)을 의미, 유지 보수 1-2% MAC </td><td> 4-6 H. </td><td> 70 % 산소 30 % 질소 산화물의 혼합물로 제공. 장시간 마취 회복을 늦추기 위해 이끌고 있습니다. </td><td> 029403; 버틀러 Schein </td><td> 26 </td></tr></tbody></table> 표 1. 생존 공부를 마취 요원을 제안했습니다. <table border="1"><tbody><tr><td> ITEM </td><td> 회사 </td><td><stroNG&gt; 카탈로그 # / 모델 </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 6,906,950 </td></tr><tr><td> Buprenorphine (Buprenex) </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 031,919 </td></tr><tr><td> 플루오레신 isothiocyanate dextran, 2 MDA 분자량 </td><td> 시그마 </td><td> FD2000S </td></tr><tr><td> 이소 프로필 알코올 </td><td> 어부 </td><td> AC42383-0010 </td></tr><tr><td> Lactated 울리는의 솔루션 </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 009846; </td></tr><tr><td> Lidocaine 용액, 2 % (V / V) </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 002,468 </td></tr><tr><td> 식염 </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 009,861 </td></tr><tr><td> 외과 우유 </td><td> 버틀러 Schein </td><td&gt; 014,325 </td></tr><tr><td> 텍사스 레드 dextran, 70 kDa 분자량 </td><td> Invitrogen </td><td> D1864 </td></tr><tr><td> Maxizyme </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 035,646 </td></tr><tr><td> DISPOSABLES </td></tr><tr><td> 초경 털은, 1 / 2mm 팁 크기 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 19007-05 </td></tr><tr><td> Cottoned 팁 applicators </td><td> 피셔 과학 </td><td> 23-400-100 </td></tr><tr><td> 유리, 아니 보호해. 0 두께 </td><td> 토마스 과학 </td><td> 6661B40 </td></tr><tr><td> Cyanoacrylate 접착제 </td><td> ND 산업 </td><td> 31,428 H04308 </td></tr><tr><td> 가스 살포기 </td><td> Newegg </td><td> N82E16848043429 </td></tr><tr><td> 그립 시멘트 분말 </td><td> Dentsply </td><td> 675,571 </td></tr><tr><td> 그립 시멘트 용매 </td><td> Dentsply </td><td> 675,572 </td></tr><tr><td> 인슐린 주사기, 29.5 게이지 바늘로 0.3 ML 볼륨 </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 018,384 </td></tr><tr><td> 너트와 머리를 고정 볼트 </td><td> Digikey </td><td> 너트, H723-ND, 볼트, R2-56X1/4-ND </td></tr><tr><td> Opthalmic 연고 </td><td> 버틀러 Schein </td><td> 039,886 </td></tr><tr><td> 메스 블레이드 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12-460-448 </td></tr><tr><td> 나사, 셀프 태핑 # 000 </td><td> JI 모리스 회사 </td><td> FF000CE125 </td></tr><tr><td> 실리콘 수족관 밀봉 재 </td><td> 완벽 제조 </td><td> 31,001 </td></tr><tr><td> 주석 산화물 분말 </td><td> 엄마의 광물 </td><td> EQT-TINOX </td></tr><tr><td> 장비 </td></tr><tr><td> 유리 학자 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 08-675 </td></tr><tr><td> 현미경 해부 </td><td> 칼 자이스 혈구 </td><td> OPMI-1 FC </td></tr><tr><td> 전기 파워 드릴 </td><td> Foredom 또는 Osada </td><td> K.1020 (Foredom) 또는 EXL-M40 (Osada) </td></tr><tr><td> 전기 면도기 </td><td> Wahl </td><td> 시리즈 8900 </td></tr><tr><td> 집게, 뒤몽 안돼. 55 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11255-20 </td></tr><tr><td> 피드백 조절 열 패드 </td><td> FHC </td><td> 40-90-8 (직장 써미스터, 40 - 90 5D-02, H) 패드, 40-90-2-07 먹어 </td></tr><tr><td> Isoflurane 기화기 </td><td> Ohmeda </td><td> IsoTec4 </td></tr><tr><td> 펄스 산소 농도계 </td><td> 스타 생명 과학 </td><td> MouseOx </td></tr><tr><td> 미니어처, 드라이버 </td><td> 가렛 웨이드 </td><td> 26B09.01 </td></tr><tr><td> Stereotaxic 프레임 </td><td> Kopf 인 스트 루먼트 </td><td> 모델 900 (마우스 마취 마스크와 비 파열 귀에 바 있음) </td></tr><tr><td> 외과 가위, 무딘 끝 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 14078-10 </td></tr><tr><td> 초음파 세척기 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 15-335-30 </td></tr></tbody></table> 표 2. 특정 시약, disposables 및 장비 목록.

a polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain

생체내에서는 대뇌 피질 기능의 영상은 intracranial 환경의 방해없이 뇌로 광 액세스가 필요합니다. 우리는 직경 몇 mm에 걸쳐 그리고 수 개월 동안 안정 마우스 두개골에 광택과 철근 thinned 두개골 (포트) 윈도우를 구성하는 방법을 제시한다. 두개골이 광학 선명도를 달성하는 훈련을 실​​시 손으로 두께 10-15 μm의에 thinned하고 있으며, 다음으로 cyanoacrylate 접착제와 덮개 유리로 중첩됩니다 : 1) 강성, 2를 제공하는 것은) 뼈 regrowth을 억제하고 3) 빛의 산란을 감소 뼈 표면에 부정에서. 두개골이 터진 않았으므로, 공부중인 프로세스에 영향을 미칠 수있는 염증이 크게 줄어 듭니다. 최대 대뇌 피질의 표면 아래 250 μm의로의 이미징 깊이는 두 광자 레이저 스캐닝 현미경을 사용하여 얻을 수 있습니다. 이 창문은 잘 anesthetized 정신 모두 준비에서 대뇌 혈류와 세포 기능을 공부하기 적합합니다. 그것은 더 이상 작전을 제공합니다portunity는 optogenetics를 사용하여 세포의 활동을 조작하거나 photosensitizers 순환의 조사의 대상이 혈관의 혈액 흐름을 방해한다.

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A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain

우리는 mm에 걸쳐하고 뇌의 염증없이 몇 달 동안 안정 마우스 두개골에 이미지 창을 형성하는 방법을 제시한다. 이 방법은 잘 두 광자 현미경을 사용하여 혈류, 세포 역학 및 세포 / 혈관 구조의 종방향 연구에 가장 적합합니다.

마우스 뇌의 장기 이미징을위한 세련된와 철근 Thinned-해골 창

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Thinned - 해골 준비를 사용하여 마우스 시각 피질의 만성 이미징

In vivo imaging using two-photon laser scanning microscopy (2PLSM) allows the study of living cells and neuronal processes in the intact brain. The ...

연구

신경과학

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

휴일 두개골 윈도우를 사용하여 마우스 뇌 엑기스의 Intravital 현미경

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

여러 마우스 Neuroanatomical 자기 공명 영상

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Extinction Training During the Reconsolidation Window Prevents Recovery of Fear

Reconsolidation 창 동안 멸종 교육은 두려움의 복구를 방지

Fear is maladaptive when it persists long after circumstances have become safe. It is therefore crucial to develop an approach that persistently prevents ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

의 장기 강한 적응의 분자 판독<em&gt; C. elegans</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

에 얇게 - 두개골 두피 창 기술<em&gt; 생체 내</em&gt; 광 결맞음 단층 촬영 영상

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

장기 상승 작용으로 매우 안정하고 재현성 기록을위한 향상된 준비 및 해마 마우스 조각의 보존

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

두 광자<em&gt; 생체</em&gt; 시닝 두개골 준비를 사용하여 마우스 피질 돌기 쪽의 영상

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

마우스 인공 와우의 Explants의 장기 시간 경과 영상

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

의 장기 칼슘 이미징을위한 아가로 오스 Microchambers<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...